小鼠肝星状细胞分离纯化和体外培养模型的建立

目的 建立小鼠肝星状细胞(m-HSCs)分离纯化的高效稳定方案,并通过原代和传代培养观察其生物学特性.方法 依次应用预灌注液、0.1% Pronase E、0.075% Collagenase NB4G对在体肝脏原位灌注消化.肝脏离体后,在0.02%DNaseI液中磁力搅拌消化10 min,低速离心(25g,5 min)去除残余肝实质细胞,进一步用Optiprep密度梯度液获得纯化的m-HSCs.采用锥虫蓝染色法评估细胞产量及活力;采用自发荧光及油红O染色鉴定细胞纯度;采用光镜、电镜以及Desmin/α-SMA免疫荧光双染色观察细胞形态和生物学特征.结果 分离得到的原代m-HSCs数量为(1.4±0.3)×106/g肝脏,细胞活率＞95%;原代培养24 b后,细胞纯度＞90%,传1代后细胞纯度接近100%.静止期和不同活化阶段的m-HSCs在亚显微结构以及α-SMA表达强度等方面存在差异.结论 建立的m-HSCs分离和纯化方法及体外细胞培养模型具有稳定性和高纯度性及高活率性.

Abstract：

Objective To establish a high-performance and stable model for isolation and purification of mouse hepatic stellate cells, and investigate their biological phenotypes by primary culture and subculture. Methods The liver was digested by in situ perfusion of pre-perfusion solution, 0.1% pronase E and 0.075% collagenase NB4G in turn. The liver was continued to digest using 0.02% DNase Ⅰ liquid with magnetic stirring for 10 min in vitro. After low-speed centrifugation used to remove residual hepatocytes, cells were treated with Optiprep density gradient solution to obtain the purified m-HSCs. Trypan blue staining method was used to calculate cell production and viability. The cell purity was identified by mHSCs autofluorescence and oil red O staining. Light microscopy, electronic transmission microscopy and double immunofluorescence staining of Desmin and α-SMA were done to observe morphological characteristics and biological phenotypes of m-HSCs. Results The yeild rate of m-HSCs was (1.4±0.3)×106/g of liver tissue, the cell viability was more than 95%, the cell purity was more than 90% after 24 h of primary cluture and close to 100% after the first cell passage. The activated m-HSCs had different characteristics of submicroscopic structures and expression level of α-SMA. Conclusion This study established a stable model for isolation, purification and culture of m-HSCs, which obtained the high purity and high-living rate of m-HSCs.     

胃癌根治术后应激性高血糖与外科感染关系的临床观察

目的：比较B-1式胃癌患者手术前后血糖的变化,探讨其与胰岛素抵抗及外科感染的关系及血糖控制的意义。方法：对82例行B-1式胃癌根治术患者手术前后空腹血糖进行比较,并根据血糖水平,分成血糖浓度正常组和血糖浓度异常组,比较两组术后切口及腹腔感染发生情况,并进行统计学分析。结果：患者术后血糖均有上升,和术前比较有统计学差异,术后血糖≤8.3 mmol/L35例,术后血糖〉8.3 mmol/L 47例。术后血糖浓度〉8.3 mmol/L的患者较≤8.3 mmol/L患者术后应激性血糖浓度增高明显,切口及腹腔感染发生率显著提升,并发症发生明显增加。结论：胃癌手术应激可引起术后胰岛素抵抗,术后严密的血糖监测和合理、适量的应用胰岛素,是避免患者术后血糖升高的关键。     

经腹腔镜胰体尾部切除术治疗胰腺良性肿瘤

目的 探讨腹腔镜胰体尾部切除治疗胰腺良性肿瘤的方法 及安全性、可行性.方法 2009年11月到2010年5月,对3例胰腺体尾部占位性病变的病人实施了腹腔镜胰体尾部切除术(1例保留脾脏,2例联合脾脏切除).结果 所有手术均在手辅助腹腔镜下成功完成.手术时间75～185 min,平均120 min;出血量90～210 ml...     

多发性硬化患者的磁化传递及弥散张量成像特点

目的比较多发性硬化(MS)患者脑内病灶、表现正常脑白质(NAWM)及健康志愿者脑白质的磁化传递及弥散特性的差异,探讨MS患者的磁化传递率(MTR)与平均弥散率(MD)的相关性。方法分别对24例复发缓解型MS患者和24名健康志愿者行常规MRI、磁化传递成像(MTI)及弥散张量成像(DTI),经处理后得到相应的MTR、MD及各向异性分数(FA)图。测量MS病灶、对侧NAWM及健康志愿者相应脑白质区域的MTR、MD及FA值。结果MS患者病灶的平均MTR值(23.49%±5.16%)明显低于NAWM组(29.49%±3.38%)及健康对照组(32.78%±3.42%,F=101.44,P<0.01);病灶的平均FA值(0.32±0.09)也明显低于NAWM组(0.42±0.09)及对照组(0.51±0.09,F=95.41,P<0.01);而病灶的平均MD值[(1.10±0.17)×10-3mm2/s]明显高于NAWM组[(0.92±0.13)×10-3mm2/s]及对照组[(0.76±0.04)×10-3mm2/s,F=144.89,P<0.01]。与MS患者T1WI等信号病灶相比,低信号病灶的MTR值及FA值降低,而MD值升高。MS患者病灶的MTR值与MD值显著相关,而NAWM的MTR与MD值无明显相关性。结论MTI和DTI的指标可以反映MS患者脑内不同部位病理变化的不同,为常规MRI提供补充信息。     

经鼻蝶窦手术动物模型神经内镜手术训练

目的建立一种活体动物的神经内镜经鼻蝶手术模拟训练方法。方法选择大鼠，建立一套训练计划，完成内镜图像导引下的内镜操作，电凝止血、冲洗和吸引、活检等神经内镜经鼻蝶手术的基本技巧。结果利用大鼠颅脑进行模仿内镜经鼻蝶手术，如在内镜图像导引下操作内镜的方法；熟悉内镜系统、电凝系统、冲洗和吸引设备的使用；熟悉了神经内镜经鼻蝶手术的步骤。结论作为神经内镜实验室训练的重要组成部分，通过利用大鼠颅脑进行模拟神经内镜手术，训练者可以从中获得神经内镜操作基本技巧的练习。     

深低温对全脑缺血大鼠海马即早基因组表达的影响

目的筛选出深低温对全脑缺血大鼠海马影响的即早差异表达基因。方法建立大鼠体外循环模型，实验分成两组，常温缺血组（n=3）：常温条件下停循环全脑缺血5min；低温缺血组（n=3）：深低温条件下停循环全脑缺血5min。采用Affymetrix大鼠全基因组芯片检测两组动物海马基因表达的变化，获取差异表达基因。结果筛选出差异表达基因共有75个，其中39个基因表达有统计学意义（P〈0．01），上调33个，下调42个。结论深低温对全脑缺血大鼠海马即早基因表达有明显影响，这些差异表达基因可能与深低温脑保护作用相关。     

深低温对全脑缺血性损伤的保护作用

国际上把低温划分为轻度低温(33～35℃),中度低温 (28～32℃),深度低温(17～27℃)和超深度低温(2～16℃)。低温已经被大量动物试验和临床实践证实具有脑保护作用,但同时也存在心律失常,凝血功能障碍,免疫抑制等全身多系统副作用,产且温度越低,副作用越明显。日前国内外已经有大量的试验证实深低温对全脑缺血的脑保护作用,它能明显增加脑组织对缺血的耐受性,本文将就深低温对全脑缺血性损     

茶氨酸对脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的观察茶氨酸对脑缺血再灌注损伤的保护作用,为临床脑缺血再灌注损伤的预防和治疗提供实验依据。方法将24只健康家兔随机分为四组：假手术组、脑缺血组、茶氨酸予处理组和茶氨酸治疗组。麻醉后分离血管,采用基底动脉、双侧颈总动脉结扎法制备急性全脑缺血再灌注动物模型。假手术组仅分离动脉不结扎,予处理组在缺血前应用茶氨酸,治疗组在缺血后应用茶氨酸,缺血组不作特殊药物处理。各组分别在规定时间点即缺血前、再灌注后30min、1h、2h采血测定神经特异性烯醇化酶(NSE)含量,取脑组织活检观察超微结构,处死动物测定脑含水量。结果茶氨酸予处理组和治疗组以上各项指标均较脑缺血组有显著的改善,提示茶氨酸具有神经保护作用。实验还显示茶氨酸予处理组在再灌注30min时NSE含量与假手术组比较无差异,提示用茶氨酸予处理后可能使缺血后脑损害的发生延迟,为进一步的治疗争取了宝贵时间。结论茶氨酸对脑缺血再灌注损伤有保护作用,值得进一步研究。     

抑郁症患者血浆孤啡肽含量研究

目的为探讨抑郁症的可能病因,对抑郁症患者血浆孤啡肽(OFQ)含量进行了对照研究。方法抽取29例抑郁症患者和24例正常人的静脉血,用放射免疫(RIA)的方法分别测其血浆中OFQ含量,比较抑郁症患者和正常人血浆OFQ含量有无差异,抑郁症患者OFQ含量与汉密顿抑郁量表(HAMD)评分的相关性,及抑郁症患者血浆OFQ含量的影响因素。结果与正常人比较,抑郁症组OFQ含量明显升高(t=8．70,P＜0．0001)；OFQ含量与HAMD评分呈正相关(r=0．63,P＜0．01)；OFQ含量主要与抑郁情绪、夸大、失眠、自卑感、自杀、强迫症状、教育水平、关注身体健康等因素相关,而年龄、性别、职业、病程、曾用药等其他因素与OFQ含量无明显相关。结论通过测量血浆OFQ含量可作为抑郁症诊断的参考指标。     

2005年卒中康复治疗进展

目前脑卒中后的康复方兴未艾,越来越多的证据表明康复治疗可以影响皮质重组,并对患者与健康相关的生活质量产生影响。1功能性神经影像学