非T细胞去除HLA单倍体匹配造血干细胞移植治疗白血病

目的：探讨相关HLA单倍体匹配造血千细胞移植治疗白血病的疗效及移植相关并发症。方法：4例白血病患者接受单倍体相合未去T细胞造血干细胞移植，3例为HLA-A、B、DR3个位点不合亲缘骨髓移植，1例为HLA-DR位点不合外周血造血干细胞移植，3例移植时处于完全缓解(CR)期，1例处于慢性粒细胞白细病(CML)急变期，预处理采用阿糖胞苷 环磷酰胺(CTX) 全身照射(TBI)，Graft versus host disease(GVHD)预防联合使用环孢菌素A(CsA)、甲氨喋呤(MTX)、兔抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)、抗CD25单抗、霉酚酸酯(MMF)。结果：4例均获得造血重建，植入直接证据检测证实完全供者造血，3例无aGVHD，1例发生Ⅱ度肠道aGVHD，1例移植后3个月复发，2例在行供者淋巴细胞输注治疗后均并发了Ⅲ度肠道和Ⅱ度肝脏aGVHD．免疫重建延迟。至今，3例存活( 70天- 19个月)，均为持续完全缓解(CCR)，1例 11个月因感染死亡。讨论：未去T细胞单倍体相合HSCT造血重建稳定，移植相关并发症较少，重症GVHD发生率可能低。     

结肠造口方式的选择及适应证

在我国肠造口多为结肠造口,是直肠肿瘤、外伤、炎症性疾病中常用的外科治疗手段。造口是将肠道直接引出腹壁而使肠内容物能排出体外的手术方式。良好的造口不仅有利于近期术后恢复及为二期手术创造条件,而且有利于远期生活。掌握结肠造口的适应证及选择适当的造口方式十分重要。一、结肠造口的生理变化结肠的主要功能为吸收水和电解质、储存粪便。肠内容物进入右半结肠时主要呈液体状,升结肠及近端横结肠造口将影响粪便的滞留时间及混合,进而影响结肠对水及电解质的吸收能力。因此近端结肠造口时粪便的量较多,水及钠的含量高,且排出无规律不…     

大鼠骨髓间质干细胞体外分离培养及生物学特性研究

目的：建立大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)体外分离培养方法，并对大鼠MSCs的生物学特性进行研究。方法：分离5～8周龄的大鼠股骨骨髓进行体外培养，取5代以后的MSCs观察形态特征，绘制生长曲线，进行细胞化学染色，并用流式细胞仪检测其表面标志和进行细胞周期分析。结果：大鼠MSCs细胞形态呈长梭形或多边形，细胞生长曲线呈S形，群体倍增时间为30h，细胞化学染色显示碱性磷酸酶(ALP)、过氧化物酶(POX)、苏丹黑B(SB)阴性，而*醋酸萘酚醋酶(α-NAE)与糖原(PAS)阳性，流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90表达阳性，而CD34、CD38、CD45表达阴性；细胞周期分析显示，G0／G1期：79．48％，G2／M期：6．10％，S期：14．42％。结论：本方法分离纯化出的是MSCs，其在体外具有生长稳定，增殖较快的特点，是组织工程研究中良好的细胞来源，也是转基因研究优良的载体细胞。     

高糖通过活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3途径诱导人腹膜间皮细胞凋亡

目的 探讨高糖损伤人腹膜间皮细胞(HPMC)的机制。方法 (1)分离培养HPMC,以细胞形态、免疫细胞化学染色作细胞鉴定;(2)第2代HPMC分别经含1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖的M199培养基培养48h后(以正常M199培养基和含4.25%甘露醇的M199培养基为对照),检测HPMC caspase-3活性和HPMC凋亡情况;(3)分别用25μmol/L、50μmol/L、和100μmol/LZ-VAD.fmk和4.25%葡萄糖共同刺激体外培养的HPMC(以DMSO和4.25%葡萄糖为对照),流式细胞仪观察HPMC凋亡情况,同时检测50μmol/L Z-VAD.fmk组和葡萄糖对照组caspase-3活性。结果 (1)HPMC caspase-3活性和凋亡率与葡萄糖浓度呈正相关(r分别为0.9506和0.9868,P<0.01),且HPMC caspase-3活性与凋亡率呈正相关(r=0.9860,P<0.01)。与M199对照组相比,2.5%葡萄糖组和4.25%葡萄糖组HPMC caspase-3活性和凋亡率显著增加(P<0.05),而1.5%葡萄糖组及4.25%甘露醇组HPMC caspase-3活性和凋亡率无显著差异(P>0.05)。(2)4.25%葡萄糖组caspase-3活性显著高于4.25%甘露醇组(P<0.05),但4.25%甘露醇组caspase-3活性与对照组相比无显著差异(P>0.05)。(3)与对照组相比,Z-VAD,fmk组HPMC凋亡率(P<0.05)和caspase-3活性(P<0.05)显著下降,且HPMC凋亡率与Z-VAD.fmk呈负相关(r=-0.8836,P<0.01)。结论 (1)高糖能以     

1—氰基—2—苯甲酰—1,2—二氢异喹啉的合成

采用1,1,2-三氯乙烷作溶剂,三乙胺作相转移催化剂合成了吡喹酮的重要中间体1-氰基-2-苯甲酰-1,2-二氢异喹啉。本法单耗低,产物质量好。Reissert 反应收率由文献报道的82%提高至90%。     

环孢菌素A对体外NIT-1胰岛β细胞增殖及其增殖相关基因表达的影响

目的 观察环孢霉素A(CsA)对体外培养的NIT-1胰岛β细胞增殖和pol αl mRNA表达的影响。方法 用MTT法检测不同浓度的CsA(0．05～10μmol／L)作用48和72h后NIT-1胰岛β细胞增殖的情况。利用半定量RT-PCR法检测10μmol／L CsA处理NIT-1胰岛β细胞48h后pol αl在mRNA水平上的表达。结果 CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞的增殖，且与时间、剂量正相关。另外，CsA还下调了pol αl mRNA的表达。结论 CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞增殖．其机制可能与下调pol αl mRNA表达有关。     

O-GlcNAc糖基转移酶在原核和真核细胞中的表达和提纯

目的 :本文为进一步研究蛋白 O- Glc NAc糖基化修饰提供重要资源。方法 :为了探索制备纯化具有生物学活性的重组 OGT的有效方法 ,本文用大肠杆菌和 Hi5昆虫细胞表达并纯化具有活性的重组 OGT。携带人 OGTc DNA的 PET32 a质粒在大肠杆菌中表达出带有 1个 S- Tag的重组人 OGT融合蛋白 ,然后用与 S-蛋白质偶联的琼脂糖凝胶颗粒从细菌裂解液中亲和纯化 OGT融合蛋白。结果 :其纯化的 OGT在电泳中显现单一条带并具有生物活性 ,但其活性在洗脱后丧失。在 Hi5昆虫细胞中表达的鼠肝 OGT带有一 His6 tag,经镍离子螯合柱纯化后 ,其比活性达到 0 .88nmol· min- 1 · mg- 1 OGT。结论 :在这两个表达系统中制备重组 OGT各有利弊。     

重组2型腺相关病毒-转化生长因子β3对实验性肝纤维化大鼠肝脏组织病理学和Ⅰ型胶原表达的影响

Objective To investgate the effects of TGF β 3 on rat hepatic fibrosis. Methods The TGF β 3 cDNA was cloned into rAAV2 vector. Rats were randomly divided into four groups: normal control group, model group, negative control group and TGF β 3 group. Hepatic fibrosis was induced by hypodermic injection of 40% CCI4. Recombinant AAV2-TGF β 3 viral particles were injected via the vena caudalis one week before CCh treatment. Rats were executed 8 weeks after CCI4 treatment, global histological change was observed after HE staining, the distribution of the collagen fibers was observed after masson staining, his-tochemistry was done to observe the expression of collagen Ⅰ; The positive area rate of the collagen fibers and the average optical rate of collagen Ⅰ were quantified. Results HE staining indicated that collagen fibers were reduced in the TGF β 3 group. Masson staining shown that the collagen fibers were distributed around the blood vessel, in the portal area and disse space. Compared to the model group (13.2%±2.2%) and negative control group (12.3%±1.5%), the collagen fibers in liver tissues of TGF β3 group (7.7% ± 1.5%) were significantly decreased (q = 9.456, P < 0.01; q = 8.217, P < 0.01). Histochemistry indicated that the collagen fibers of liver tissues of TGF 15 3 group (0.185±0.033) were significantly higher than those in the model group (0.252±0.042) and the negative control group (0.230±0.029), (q = 6.228, P < 0.01; q = 4.346, P < 0.01). Conclusion TGF β 3 alleviates the damage to hepatic cell and the level offibrosis in CCI4 treated rats and inhibits the expression of collagen Ⅰ.     

ApoMT对CdMT肾毒性保护作用研究

本文研究了去除金属离子的金属硫蛋白（ApoMT）对镉金属硫蛋白（CdMT）肾毒性作用的影响。结果发现，与单独给予CdMT比较，ApoMT能降低尿蛋白量和尿碱性磷酸酶（AKP）活性，并能促进尿Cd的排泄。肾组织形态学结果显示肾近曲小管损伤程度明显减轻。提示ApoMT对CdMT肾小管损伤具有保护作用。     

老龄大鼠非细菌性多器官功能不全综合征模型的建立

目的以酵母多糖腹腔注射建立老龄大鼠多器官功能不全综合征(MODSE)模型,并进一步与成年多器官功能不全综合征(MODS)模型作比较.方法成年和老龄SD大鼠,腹腔注射不同剂量酵母多糖,以血气、血生化和心、肝、脑、肺、肾等各主要脏器的光镜检查等为指标,观察上述各主要脏器的功能和形态学的变化.结果与成年和老龄正常对照组相比,成年和老龄不同酵母多糖组血气和血生化指标均出现不同程度的改变,肺、心、肝、脑、肾等主要脏器出现明显病理改变.在相同酵母多糖浓度下,老龄组呼吸功能、心脏功能和肾脏功能降低较相应成年组重;在复制模型程度相似的情况下,与成年大鼠相比,老龄大鼠有死亡时间延迟的趋势.结论酵母多糖腹腔注射可复制MODSE模型,以0.5 g/kg腹腔注射最为理想,该模型可用于MODSE机制和实验治疗学的探讨.