用电子自旋共振成像观测氮氧自由基的透皮特性

在自行研制的电子自旋共振成像(Electron spin resonance imaging, ESRI)系统上建立了活体皮肤电子自旋共振成像的实验模型.观测了氮氧自由基化合物2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧(2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy,TEMPO)穿透小鼠皮肤组织的动态过程和浓度分布情况.成像结果显示TEMPO化合物对不同方法处理后的皮肤组织的透皮特性有明显差别.TEMPO水溶液难以穿透皮肤,而溶解在二甲基亚枫(Dimethyl sulfoxide,DMSO)中的脂溶性TEMPO溶液可以渗入并穿透皮肤.皮肤表层的角质蛋白对TEMPO有明显的阻隔性, 而且化合物渗入或透过皮肤组织的量具有较强的时间依赖性.本研究结果提示ESRI技术为动态研究某些特殊结构化合物的透皮特性提供了科学有效的分析手段.     

Nucleolar localization of non-structural protein 3b, a protein specifically encoded by the severe acute respiratory syndrome coronavirus

The open reading frame 3 (ORF3) of the severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) genome encodes a predicted 154-amino acid protein, which lacks similarities to any known protein, and is named 3b. In this study, it was shown that 3b protein was predominately localized to nucleus with EGFP tag at its N- or C-terminus. The localization patterns were similar in different transfected cells. Immuno-fluorescence assay revealed that 3b protein was co-localized well with C23 in nucleolus. C23, B23 and fibrillarin all are important nucleolar proteins, which localize in the region of the nucleolus. Co-transfection of p3b-EGFP with pC23-DsRed, pB23-DsRed and pfibrillarin-DsRed further confirmed 3b's nucleolus localization. With construction of serial truncated mutants of 3b, a region (residues 134-154 aa) responsible for nucleolar localization was determinated in 3b protein. These results provide a new insight for further functional studies of SARS-CoV 3b protein.     

恒河猴骨髓间充质干细胞分离培养及其生长特性

采用密度梯度离心和贴壁筛选方法分离纯化了恒河猴骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells from bone marrow of Rhesus monkey,RhBMSCs);通过表面抗原检测和核型分析对细胞进行了初步鉴定;通过生长曲线的绘制和细胞凋亡的检测探讨了细胞的生长特点。本实验获得的RhBMSCs形态以梭型为主,核型正常,CD29表达率为99.2%,CD34、CD45、HLA-DR表达率均低于3.2%,RhBMSCs表型符合间充质干细胞的特点,且纯度较高,细胞生长旺盛,但倍增时间有随传代数的增加而逐渐延长的趋势。本实验探讨了RhBMSCs的体外分离、扩增培养及鉴定的方法,并对其生长特点进行了初步观察,这不仅有助于进一步了解与之近似的人的骨髓间充质干细胞的相关特性,而且为以猕猴为对象的BMSC定向分化和组织修复等动物体内实验打下了基础。     

肿瘤抑制基因变异的分子病理学研究进展

肿瘤分子生物学研究已经证实,肿瘤是一种基因病,是由多基因变异并长期累积所致,其中肿瘤抑制基因（TSG）在肿瘤发生过程中持续丧失功能被认为是导致细胞恶变的最重要事件之一。TSG变异的最常见分子机制是因其2个位点相继因点突变和杂合性缺失（LOH）而导致功能完全失活,即广为接受的Knudsen“二次打击”理论。另一个受到高度重视的基因变异类型是DNA错配修复基因（mismatch repair,MMR)功能的失活,其分子特征是基因组DNA微卫星小体不稳定性（microsatellite instability,MSI)。这两种基因变异形式最终都将导致细胞分裂和增殖活动脱离还调控而发生肿瘤。由于LOH和MSI是肿瘤细胞的重要标志性特征,并具有分子病理学上的诊断意义而受到广泛关注。     

抗蓖麻毒素A链人源化单域抗体的设计、原核表达及生物活性检测

目的 运用计算机辅助蛋白质分子设计的方法设计针对蓖麻毒素A链(RTA)的拮抗肽,实现在大肠杆菌B121中的可溶性表达,并对其生物学活性进行评价.方法 根据RTA的晶体结构、RTA-rRNA相互作用复合物模型,在CVFF(consistent-valence force field)、Amber力场下,对RTA的空间构象进行理论模拟,初步确定其生物活性功能域;然后针对该功能域设计小分子拮抗肽,并借助人抗体重链町变区骨架,在CDR3区对拮抗肽进行展示,用重叠延伸PCR全基因合成人源化的单域抗体并克隆至载体pET-32a(+);双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定;IPrG诱导人源化的单域抗体表达,用镍离子亲和层析纯化,竞争ELISA和MTT法分别进行结合和中和活性检测.结果 从头搭建并设计合成了人源化的单域抗体,实现了其原核表达,并进行了牛物活性检测;建立了基于人源化的单域抗体的RTA和蓖麻毒素检测方法.结论 研究结果为新型蓖麻毒素小分子拮抗剂的研制奠定了理论和实验基础.     

An animal model of SARS produced by infection of Macaca mulatta with SARS coronavirus

A new SARS animal model was established by inoculating SARS coronavirus (SARS-CoV) into rhesus macaques (Macaca mulatta) through the nasal cavity. Pathological pulmonary changes were successively detected on days 5-60 after virus inoculation. All eight animals showed a transient fever 2-3 days after inoculation. Immunological, molecular biological, and pathological studies support the establishment of this SARS animal model. Firstly, SARS-CoV-specific IgGs were detected in the sera of macaques from 11 to 60 days after inoculation. Secondly, SARS-CoV RNA could be detected in pharyngeal swab samples using nested RT-PCR in all infected animals from 5 days after virus inoculation. Finally, histopathological changes of interstitial pneumonia were found in the lungs during the 60 days after viral inoculation: these changes were less marked at later time points, indicating that an active healing process together with resolution of an acute inflammatory response was taking place in these animals. This animal model should provide insight into the mechanisms of SARS-CoV-related pulmonary disease and greatly facilitate the development of vaccines and therapeutics against SARS.     

后路经皮内窥镜下颈椎椎间盘切除术的解剖学研究及临床意义

目的　探讨后路经皮内窥镜下颈椎椎间盘切除术的安全范围。 方法　选取20具成人颈椎标本，分别测量C3/C4至C6/C7各节段左右两侧V点与硬脊膜外侧距离、V点与椎动脉水平及垂直距离、小关节面宽度，并进行统计学比较。 结果　V点与硬脊膜外侧距离为：左（1.31±0.32）~（2.46±0.60） mm，右（1.29±0.35）~（2.75±0.45） mm，各节段间差别有统计学意义，同一水平左右差别无统计学意义；V点与椎动脉水平距离为：左（2.17±0.42）~（5.10±0.93） mm，右（1.99±0.39）~（5.00±0.71） mm，各节段间差别有统计学意义，同一水平左右差别无统计学意义；V点与椎动脉垂直距离为：左（11.05±1.06）~（13.47±1.12）mm，右（11.33±1.20）~（13.61±1.01）mm，同一水平左右侧差别有统计学意义，节段间比较C3/C4与C4 /C5无明显差异，其余节段间差别均有统计学意义；小关节面宽度为：左（10.79±0.93）~（12.66±0.88） mm，右（10.86±0.68）~（12.54±0.70）mm。 结论　后路经皮内窥镜下颈椎椎间盘切除术的安全范围宜控制在距V点内侧C₃/C₄至C₆/C₇各水平1.20~2.00 mm；磨除范围距V点外侧C₃/C₄至C₆/C₇各水平超过2.00~5.00 mm时可能到达椎动脉体表投影处，因此需注意此时的手术进入深度宜控制在：C₃/C₄~C₆/C₇各节段距V点11.00~14.00 mm。     

腺样体肥大患儿血清炎症介质和淋巴细胞亚群表达特征及与患儿预后的相关性

目的研究腺样体肥大患儿血清炎症介质、淋巴细胞亚群表达特征及其与患儿预后的相关性。方法选取浙江中医药大学附属第三医院收治的86例腺样体肥大患儿(观察组)和86例健康儿童(对照组)作为研究对象,采集血液标本测定血清炎症介质及淋巴细胞亚群相关指标,对比两组儿童的测定结果。分析腺样体肥大患儿的肥大程度、腺样体再增生情况,对比不同肥大程度患儿的血清指标,并分析各指标与患儿病情程度及预后(腺样体再增生)的关系。结果观察组患儿肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)及白细胞介素-6(IL-6)水平分别为(492.44±50.56)mg/L、(420.48±61.79)U/ml及(33.65±4.51)pg/ml,对照组儿童分别为(301.22±41.65)mg/L、(236.55±57.90)U/ml及(16.25±3.27)pg/ml,差异均有统计学意义(t=16.004,P<0.05;t=20.311,P<0.05;t=8.995,P<0.05)。观察组CD4⁺、CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺水平分别为(35.75±7.05)、(16.22±2.69)及(1.46±0.67),对照组分别为(34.25±4.53)、(17.62±2.35)及(1.40±0.62),差异均无统计学意义(t=1.036,P>0.05;t=0.905,P>0.05;t=0.823,P>0.05)。相比腺样体中度肥大患儿,重度肥大患儿的TNF-α、sIL-2R、IL-6、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺水平明显更高(P<0.05)。相比未增生患儿,腺样体再增生患儿的TNF-α、sIL-2R、IL-6、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺水平明显更高(P<0.05)。相关分析显示,患儿腺样体肥大程度与TNF-α、sIL-2R、IL-6、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺水平均呈正相关(P<0.05)。患儿腺体再增生与TNF-α、sIL-2R、IL-6、CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺水平也呈正相关(P<0.05)。结论腺样体肥大患儿的血清炎症介质及部分T淋巴细胞亚群表达显著升高,其与腺样体肥大程度、患儿预后密切相关。     

肺泡上皮细胞间质转化在小鼠矽肺模型发生发展中的作用

目的 研究矽肺肺泡上皮细胞有无发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及其在疾病发展中的作用。方法 将30只小鼠依据体质量随机分为对照组与模型组,每组15只;采用气管暴露法建立矽肺小鼠模型。建模后第7天、14天、28天每组各处死5只小鼠,留取肺脏,采用HE染色、Masson染色观察两组小鼠肺部组织病理学改变及胶原纤维生成情况;检测肺组织E-钙黏蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏蛋白（N-Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的mRNA与蛋白表达量,并进行相应的组间比较。结果 HE染色显示,对照组小鼠肺泡结构清晰,肺泡壁薄,各时间节点间对比无明显改变;模型组小鼠在建模后第7天肺部组织见明显的炎性细胞浸润,随时间的增长,肺部纤维组织明显增生,肺泡间隔增厚,造模后第28天观察到矽结节形成。Masson染色显示,对照组小鼠肺部未见明显的胶原纤维生成,而模型组小鼠肺泡间隔、支气管壁可观察到蓝染的胶原纤维沉积。模型组小鼠E-Cadherin的mRNA水平在建模后各时间点均低于对照组（P<0.05）,N-Cadherin的mRNA水平在各时间节点两组差异均无统计学意义（P>0.05）,Vimentin的mRNA表达水平在建模后第14天、28天高于对照组（P<0.05）。E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的蛋白表达量比较显示,在建模后第7天两组间差异无统计学意义（P>0.05）,在建模后第14天、28天,模型组E-Cadherin的蛋白表达量低于对照组,N-Cadherin、Vimentin的蛋白表达量则高于对照组（P<0.05）。结论 矽肺模型小鼠肺泡上皮发生的EMT参与了矽肺肺间质的纤维化病变过程。     

北京市郊区某中学初中生膳食矿物质和维生素摄入与近视发生的调查研究

目的 了解初中生膳食矿物质和维生素摄入状况,分析饮食行为与近视之间的关系。方法 采用整群抽样法,选取2018年7月至2019年3月北京市郊区某中学的所有初中生,应用24 h膳食回顾调查表及自编“1周内饮食行为问卷”进行膳食调查,采用NCCW营养软件分析矿物质和维生素摄入情况,采用全国通用的E字标准视力表对初中生进行视力检查。结果 本次共调查181名初中生,其中女生92人（50.8%）,男生89人（49.2%）。年龄10~16岁,平均（13.06±0.96）岁。蛋类、粗粮及大豆制品的食用情况不佳,能坚持一周内食用5~6次粗粮的初中生只有20人（11.0%）。24 h膳食回顾调查NCCW软件分析结果发现,该校初中生膳食矿物质的摄入中仅磷的摄入量男、女生均达到推荐摄入量的90%以上,其余矿物质和维生素摄入整体不足,其中钙的摄入量处于严重不足情况,摄入量仅为推荐摄入量的23.50%、26.62%。近视筛查发现,该校56.7%的初中生处于重度近视范围,其中女生左眼近视程度高于男生（P<0.05）。不同程度近视随着矿物质和维生素摄入量不同出现差异,钙的摄入量在重度近视学生中要高于轻度及中度近视,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 该校初中生矿物质和维生素摄入量不足,其中矿物质钙与近视程度存在一定联系,建议家长及学校应在学生饮食上做到科学膳食均衡搭配,从饮食方面降低青少年近视发生风险。