Carrier‐free epithelial cell sheets prepared by enzymatic degradation of collagen gel

Limbal stem‐cell deficiency by ocular trauma or disease causes corneal opacification and vision loss. Conventional tissue engineering using biodegradable scaffolds has met with limited success. In this study, we developed a novel method for preparing carrier‐free epithelial cell sheets, which have potential for use in repairing defects of the ocular surface. Stratified corneal epithelial cell sheets were prepared in culture dishes coated with biodegradable type I collagen. Haematoxylin and eosin staining, electron microscopy and immunohistochemistry were performed to characterize the cell sheets. Then, carrier‐free epithelial sheets were successfully engineered using specific collagenase to degrade the collagen gel. Cell sheets of four to six cell layers after culture for 14 days were similar to natural rabbit corneal epithelia, as shown by pathological examination. Microvillus, tight cell–cell junctions and desmosome junctions were observed via electron microscopy. K3 and basement membrane components, such as type IV collagen and laminin, were expressed in the cells sheets and integrin β1 was maintained in basal cells. This novel method of using collagenase to degrade collagen gel is both simple and effective in preparing intact carrier‐free epithelial cell sheets. Such sheets have great potential for application during in vivo corneal regeneration. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

人脐带间充质干细胞影响子宫内膜异位症细胞的增殖及凋亡

背景：人脐带间充质干细胞可通过旁分泌机制调控细胞的生物学活性。目的：观察人脐带间充质干细胞对子宫内膜异位症细胞增殖及凋亡的影响。方法：体外原代培养人异位子宫内膜细胞与人脐带间充质干细胞,实验组将脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞按1×105/1×105比例接种于Transwell共培养板上下室,建立上下双层细胞非接触共培养体系,设1×105单独培养异位子宫内膜细胞为对照组。结果与结论：①MTT法检测异位子宫内膜细胞增殖：与对照组比较,实验组细胞增殖明显受到抑制（P〈0.05）,且具有时间依赖性（P〈0.05）。②流式细胞仪检测异位子宫内膜细胞增殖凋亡：实验组凋亡细胞明显多于对照组（P〈0.05）,异位子宫内膜细胞由G1期进入S期细胞减少。③RT-PCR法检测异位子宫内膜细胞张力蛋白同源物基因mRNA的表达：实验组明显高于对照组。表明人脐带间充质干细胞可以通过旁分泌机制抑制人异位子宫内膜细胞的体外增殖并促进其凋亡,且可能是通过提高张力蛋白同源物基因基因表达来达到的。     

心理干预对经食管内镜直视记忆合金支架置入患者的影响

目的探讨减轻行食管支架置入术患者紧张焦虑情绪及术后并发症的有效性心理干预措施。方法选择住院择期实施内镜下食管支架置入术的患者70例,按入院先后顺序分为观察组和对照组,各35例,对照组给予常规护理及一般心理护理,观察组除采用常规护理外,对患者实施个性化心理干预,比较两组患者紧张、焦虑情况及术后并发症发生率。结果观察组患者紧张焦虑情况较对照组有明显缓解,两组比较差异有统计学意义（无焦虑22．85％比65．71％;χ2=13．17,P〈0．05）;观察组术后并发症发生率低于对照组,差异具有统计学意义（χ2分别为11．7,4．6,4．2;P〈0．05）。结论实施心理干预能有效减轻患者的心理压力,缓解患者的紧张、焦虑情绪,从而降低术后并发症的发生,提高患者的生存质量,提高其满意度。     

广州地区抗-HCV阳性献血者核酸检测及随访

目的探讨广州地区无偿献血人群HCV感染者自然转归的相关因素。方法对ELSIA法检测为抗-HCV阳性的193名献血者采用荧光定量PCR法检测其HCV RNA,半年后随访并再次做抗-HCV和HCV RNA检测。结果 193名未经治疗的抗-HCV阳性献血者随访前后2次检测的HCV RNA及抗-HCV结果无变化;分别按性别、年龄比较其HCV RNA阳性比例:男性为60.5%(69/114)、女性为34.2%(27/79)(P0.01),35～55岁组为60.9%(42/69)、18～35岁组为43.5%(54/124)(P0.05)。结论女性HCV感染者的自然转归明显好于男性感染者,18～35岁HCV感染者的自然转归优于35～55岁感染者,提示性别及年龄均为HCV感染者自然转归的影响因素。     

单个移植中心连续41例肝移植术后长期生存影响因素分析

目的评价我院4l例肝移植患者长期生存情况,分析影响肝移植术后长期生存的因素。方法回顾分析2004年6月至2007年1月连续完成的41例肝移植病例,统计生存率,分析死亡原因、并发症情况和再移植原因。结果本组1年、3年、5年实际生存率达到95．00％、87．50％、81．96％。终末期肝病组1、3、5年生存率96．15％、92．31％、88．46％,肝癌组1、3、5年生存率92．86％、78．57％、70．71％。结论肝癌复发、胆道铸型综合征、原发疾病复发、免疫抑制剂副作用是影响本组肝移植术后长期生存的因素。加强围手术期处理是提高肝移植患者术后长期生存率的关键因素。     

脑卒中后运动性失语的功能磁共振成像研究

目的：探讨脑卒中后运动性失语症患者的语言功能恢复机制。方法：应用3T MR扫描仪对6例脑卒中患者失语后及康复后分别进行两次图片命名任务的BOLD fMRI扫描。实验采用组块设计方案,利用SPM5软件的总体线性模型（General linear model, GLM）进行后处理产生激活脑区图像。并对所有患者在发病后与康复后的脑内激活分布、大小、强度进行分析与比较。结果：所有患者在失语后左侧大脑半球语言相关脑区激活部分出现激活,其中3例右侧Broca’s镜像区出现激活。而在康复后所有患者的左侧大脑半球语言相关脑区激活增多,激活强度增加,其中左侧Broca’s区均出现激活,右侧Broca’s镜像区激活减弱。结论：失语后优势半球丧失功能的语言区移至对侧镜像区和优势半球未受累语言区的功能重组这两种机制都参与了语言功能恢复的过程,近期以右侧半球为主,远期左侧半球发挥更重要作用。     

UniCel DxH 800血细胞分析仪临床应用评价

目的 探讨UniCel DxH 800全自动血细胞分析仪检测全血细胞计数(CBC)的相关性能,并与LH 750和ADVIA 2120全自动血细胞分析仪及显微镜白细胞分类计数比较.方法 使用新鲜血标本和仪器配套质控品评价UniCel DxH 800测定CBC的精密度、携带污染率和线性范围;以显微镜法为“金标准”,评价其白细胞分类计数和网织红细胞计数的准确性;计算UniCel DxH 800与LH750和ADVIA 2120血细胞分析仪测定结果的偏差和相关性,并比较3种仪器对异常细胞报警的有效性.结果 UniCel DxH 800测定RBC、Hb和MCV的批内精密度(CV)＜0.5％,WBC和PLT的批内CV＜1.5％.上述5项参数的批间CV均＜2.5％,携带污染率均＜0.51％.在临床样本所覆盖的浓度范围内,WBC、RBC、Hb、PLT测定值与理论值呈线性相关(r＞0.999,P＜0.01).UniCel DxH 800与LH 750、ADVIA 2120血液分析仪对WBC、RBC、Hb、MCV和PLT的测定结果有良好的相关性(r ＞0.973,P＜0.01).UniCel DxH 800血细胞分析仪计数网织红细胞与显微镜法计数的相关性较好(r =0.920,P＜0.01).UniCei DxH 800血液分析仪与显微镜法分类计数白细胞比较,中性粒细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞的相关性较好(r值分别为0.914、0.900和0.725,P＜0.01),其次为单核细胞(r =0.612,P＜0.01),优于类似检测原理的LH 750.UniCel DxH 800对异常细胞报警的敏感度为96.6％,假阴性率为2.5％;对中性粒细胞核左移的敏感度为90.5％,假阴性率为5.0％.结论 UniCel DxH 800全自动血液分析仪用于全血细胞计数具有高精密度、低携带污染率和宽线性范围的优点,与LH 750和ADVIA 2120全自动血液分析仪的检测结果具有良好的相关性.     

心脏瓣膜病换瓣术后发生低心排血量综合征的危险因素分析

目的 探讨心脏瓣膜病换瓣术后发生低心排血量综合征的危险因素,为制定低心排血量综合征的防治措施提供依据.方法 采用前瞻性病例对照研究和非条件Logistic多元回归分析方法,选择宜昌市第一人民医院重症医学科2008年1月至2013年5月收治的心脏瓣膜病换瓣术后的96例患者,发生低心排血量综合征41例作为观察组,无低心排血量综合征55例作为对照组.对潜在危险因素进行对比分析,并采用非条件Logistic多元回归分析找出其独立危险因素.结果 心脏瓣膜病换瓣术后发生低心排血量综合征患者41例,发生率为42.7％.单因素分析结果显示：肝脏肿大（P =0.007）、病程≥15年（P=0.042）、体外循环时间≥120 min（x2=3.937,P=0.047）、术前心功能不全≥Ⅲ级（P=0.003）为心脏瓣膜病换瓣术发生低心排血量综合征的危险因素.Logistic多因素回归分析显示,心脏瓣膜病换瓣术后发生低心排血量综合征的独立危险因素是：病程≥15年（OR=2.825,95％ CI为1.015～7.861,P=0.047）、术前心功能不全≥Ⅲ级（OR =7.306,95％CI为2.050～ 26.035,P=0.002）.结论 病程≥15年和术前心功能不全≥Ⅲ级是心脏瓣膜病换瓣术后发生低心排血量综合征的独立危险因素.     

DNA-PK基因沉默对卵巢癌细胞细胞凋亡的影响

目的 探讨DNA-PK基因对沉默卵巢癌细胞凋亡的影响及机制.方法 DNA-PK shRNA以脂质体介导转染卵巢癌细胞株Skov3,24h后接受2Gy X射线照射,继续培养48 h.收集细胞,标记Annexin Ⅴ/PI,流式细胞术分析细胞凋亡情况,同时,RT-PCR检测p53和p21 mRNA的表达量.结果 2Gy辐射引起2.40％±1.53％ Skov3细胞凋亡,高于对照组（t=2.618,P=0.026）,而转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,凋亡细胞为18.74％±4.15％,明显高于单纯2Gy照射组（t=9.052,P＜0.001）及DNA-PK shRNA转染组（2.77％±1.73％）（t=8.869,P＜0.001）.RT-PCR检测结果显示,2Gy照射组,Skov3细胞p53 mRNA表达量高于对照组,而DNA-PKshRNA转染的Skov3细胞接受2Gy照射,其p53 mRNA表达量降低,接近正常水平,单独转染DNA-PK shRNA组p53 mRNA表达量无明显变化.转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,其p21 mRNA表达量低于2Gy照射组接近正常组水平,单独转染DNA-PK shRNA组Skov3细胞p21 mRNA表达水平与正常对照组相当.结论 DNA-PK shRNA可增加辐射后巢癌细胞株的细胞凋亡,其可能机制是通过下调p53和p21 mRNA表达,而启动细胞凋亡.     

促甲状腺激素受体抗体对人肝癌细胞HepG2凋亡和增殖的影响

目的 格雷夫斯病(Graves disease,GD)患者肝功能损害发病率高,可能与升高的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)相关,探讨TRAb对肝细胞损伤的机制.方法 用含不同浓度TRAb的GD患者血清、正常人血清及胎牛血清的DMEM培养基处理人肝癌细胞株HepG2细胞,采用异硫氰酸荧光素(annexin V-FITC)/碘化丙啶(propidiumiodide,PI)及MTT法分别检测细胞的凋亡和增殖状况.结果 5％、10％及20％ TRAb的GD血清能促进HepG2细胞增殖,且HepG2细胞凋亡较对照组增高明显,以中晚期凋亡为著.结论 TRAb能诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡,参与肝细胞损伤的发生.