表达Cys548雌激素受体突变型cDNA的真核载体构建及其促转录活性分析

目的 考察一个548位点C→T单核苷酸突变的雌激素受体(ER)在体外条件下,对乳腺癌细胞株(MCF-7)信号通路的影响,以探讨ER单核苷酸突变引起非雌激素依赖性性早熟的可能机制.方法 用重叠延伸PCR定点诱变技术对548位点的碱基进行定点突变.构建定点突变表达载体pSG5-MuER.构建含雌激素受体反应元件(ERE)的萤光素酶报告基因载体pGL3-ERE-Luc.将野生和突变ER质粒分别和pGL3-ERE-Luc共转染MCF-7细胞,观察萤光素酶的变化,以检测突变ER反应活性的变化.结果 成功构建ER突变质粒psG5-MuER和ER报告质粒pGL3-ERE-Luc,psG5-MuER较pSG5-ER能够增加萤光素酶的产生.结论 该突变雌激素受体在体外具有高促转录活性特征,构建的载体可用于进行进一步的相关研究.     

Cx43在造血调控及重建中的作用

目的:采用条件性基因敲除技术构建造血系统间隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除(Cx43~(-/-))小鼠模型,并探讨Cx43在维持造血细胞自我更新及功能稳定中的作用。方法:将引进的2对转基因小鼠Cx43 loxP/loxP和Lyz-Cre/+杂交,选取F1雌性子代Cx43 loxP/-_Lyz-Cre/+与雄性Cx43 loxP/loxP合笼回配,提取所获得子代小鼠鼠尾组织基因组DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,RT-PCR方法筛选Cx43~(-/-)小鼠,同时分析小鼠不同器官中Cx43基因的表达差异;该类小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU;125 mg/kg)处理,在化疗前及化疗后第5、10和15天经眼球取血分析其血象变化。Cx43~(-/-)及Cx43~(+/+)小鼠予7.5 Gy(~(60)Co-γ)的致死量照射,剂量率1 Gy/min,照射后6 h分别给予事先准备就序的骨髓细胞,每只3×10~6细胞于尾静脉注入,2周后处死小鼠检测造血是否重建:分离股骨切片后,收集骨髓细胞进行细胞表型分析(选用的单抗为CD45R、Gr-1、CD4、 CD8a、TCRαβ、Mac-1、抗sIgM、TER119、Sca-1及CD117);同时进行体外造血细胞集落实验观察造血细胞的体外增殖能力。结果:本研究通过2种转基因小鼠间杂交和回交,成功获得造血系统选择性Cx43基因敲除小鼠;该类小鼠骨髓及外周血细胞无Cx43表达,参与造血的组织,如肝脏和脾脏中Cx43表达也显著下调(P0.01),而心脏和肾脏的Cx43表达则无影响,小鼠成年后外周血象分析并无明显异常,但应急代偿能力下降,经5-FU处理后,其造血功能恢复显著减缓,处理15 d后,Cx43~(+/+)小鼠造血功能已接近正常水平,而Cx43~(-/-)小鼠仍无明显的恢复迹象,血红蛋白、白细胞及血小板仍处低位,2者差别有统计学显著性(P0.01);体外集落试验也证实Cx43~(-/-)小鼠造血干/祖细胞的增殖能力下降,其CFU-GM或CFU-E集落数均明显少于Cx43~(+/+)小鼠(P0.01),但流式细胞术结果显示,Cx43~(-/-)小鼠骨髓中Lin~-/c-Kit~+/Sca-1~+细胞亚群数量与Cx43~(+/+)小鼠相比差异并无统计学显著性;Cx43~(-/-)小鼠在化疗或移植后其骨髓造血功能重建均延迟,且化疗15 d后骨髓切片及涂片均证实其骨髓中造血细胞增生程度明显降低,脂肪组织显著增多,而且T、B细胞发育也有异常。此外,其外周血中CD4~+CD8~+细胞比例比野生型小鼠增多(P0.05),但CD4~+T细胞显著减少(P0.01),尤其是TCRαβ亚群细胞减少最为明显(P0.01)。同样,Cx43~(-/-)小鼠外周血中CD45R~+sIgM~-细胞亚群比例与野生型小鼠相比显著减少(P0.01)。结论:骨髓中Cx43基因表达在造血干/祖细胞发育(尤其是应急状态时)具重要作用,敲除Cx43基因后造血干/祖细胞增殖减缓,造血及免疫重建功能受损。     

天然角蛋白自身反应性B细胞亚群及功能的分析

目的:明确天然角蛋白反应性B细胞的亚群及解剖定位,初步分析其分泌天然抗角蛋白自身抗体(anti-keratinautoantibody,AKautoAb)的能力。方法:取SPF级C57BL/6小鼠的脾细胞和腹腔细胞,荧光抗体染色后用流式细胞仪分析角蛋白反应性B细胞亚群。将脾脏和腹腔淋巴细胞体外培养后,用ELISA分析AKautoAb的滴度,用ELISPOT法分析分泌AKautoAb的B细胞数。结果:腹腔中几乎所有结合角蛋白的B细胞均为B-1a细胞,脾脏中结合角蛋白的B细胞以边缘带B细胞为主。腹腔细胞中分泌AKautoAb的细胞数显著多于脾细胞,其培养上清中AKautoAb的滴度显著高于脾细胞。结论:角蛋白反应性B细胞存在于3个成熟B细胞亚群:B-1细胞、滤泡B细胞和边缘带B细胞,其中CD5 的B-1a细胞具有活跃的分泌AKautoAb的能力。     

高频电刀对家兔活体肌肉组织的作用

目的 :探讨高频电刀对肌肉组织结构的作用。方法 :用高频电极在不同输出功率时测定大白家兔活体肌肉组织的电流强度 ,灼伤中心区汽化深度和汽化表面积 ,光镜和电镜下观察创面下 0～ 6mm深度的组织结构变化。结果 :随着电流输出功率的增强 ,肌肉组织的电流强度 ,中心区汽化深度和汽化表面积也随之增加 ,创面深部组织显微和超微结构发生了热凝固性改变 ,损伤程度随着离中心区距离的延长而减弱 ,但在 6mm深处仍有较明显的损伤性改变。结论 :用高频电刀操作时应注意对深部肌肉组织的损伤性作用 ,为减少损伤应注意操作时的电流强度和电灼时间。     

双歧杆菌脂磷壁酸延缓脾脏衰老的研究

目的　研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)在D 半乳糖诱导的衰老小鼠体内 ,对脾脏指数和脾细胞DNA损伤的影响。方法　在建立D 半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时 ,注射双歧杆菌LTA ;然后测定模型对照组、正常对照组、试验组小鼠的脾脏指数 ,并以单细胞凝胶电泳试验检测脾脏淋巴细胞DNA氧化损伤的情况。结果　与正常对照组相比 ,模型对照小鼠的脾脏指数显著升高 (P <0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞DNA受到了较严重的损伤 (P <0 .0 5 ) ;用双歧杆菌LTA处理后 ,试验小鼠的脾脏指数明显下降 (P <0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞DNA的损伤程度显著降低 (P <0 .0 5 )。结论　双歧杆菌LTA能显著抑制衰老小鼠脾脏淋巴细胞DNA的氧化损伤 ,这可能与双歧杆菌抗衰老有关。     

解剖钢板结合连续被动运动功能锻炼治疗胫骨平台骨折

目的 评价解剖钢板结合连续被动运动(CPM)功能锻炼在治疗胫骨平台骨折中的应用价值.方法 2003年5月至2005年10月本院34例胫骨平台骨折行解剖复位、解剖钢板内固定并在术后进行CPM功能锻炼.结果 术后对患者行X线检查示骨折实现解剖复位或接近解剖复位.23例患者经5～30个月随访骨折均愈合,无植骨坏死发生.CPM功能锻炼后运动功能恢复优良率为82.6%(19/23).结论 采用关节面的解剖复位、解剖钢板及牢固固定后配合术后CPM功能锻炼对于胫骨平台骨折有很好的疗效.     

神经营养素受体在人外周血T细胞中表达的研究

目的 研究人外周血CD4^ /CD8^ T细胞4种神经营养素受体基因的转录。方法 应用尼龙手法分离出T细胞，磁式细胞分离法（MACS）分离CD4^ /CD8^ T细胞亚群，再以RT－PCR法研究4种神经营养素受体在两种T细胞亚群上的表达。结果 未经刺激的CD4^ /CD8^ T细胞亚群不表达任何神经营养素受体。经PHA或PPD刺激后，CD4^ /CD8^ T细胞亚群表达trkA,CD8^ T细胞亚群表达trkC；而在各种状态下的T细胞上均未见表达trkB及p75^NGFR。结论神经营养素受体在两种T细胞亚群中有不同的表达格局，提示不同T细胞亚群受神经营养素调节的模式可能各不相同。     

Lymphocyte Surface Membrane Immunoglobulin

Abstract. Demonstration of surface Ig on lymphocytes is subject to interference by the formation of immune complexes between the fluorochrome tagged antibodies and minute amounts of residual serum Ig present in the fluid phase or loosely bound to the Fc receptor. These newly formed immune complexes accordingly bind to Fc receptors, including those of the Fc-positive Ig-negative third population, and result in falsely elevated percentages of Ig-bearing cells. In principle, this immune complex formation can occur with any soluble antigens, but in practice it is most commonly encountered with IgG and to a lesser extent with IgM or IgA determinations. The use of fluorochrome tagged F(ab')₂ fragments of antibodies in fluorescence results in an immune complex without an exposed Fc region that does not bind to Fc receptors. Methods for preparation of the F(ab')₂ fragments are described. The use of latex ingestion as an aid for the identification of monocytes has the additional effect of allowing autoreactive anti-lymphocyte antibodies to elute from the cell surface and thereby diminishes this additional source of false positive surface fluorescence.     

大学生认知情绪调节与抑郁的关系

目的：研究大学生认知情绪调节与抑郁的关系。方法：选用自评抑郁量表（SDS）和认知情绪调节问卷（Cognitive Emotion Regulation Questionnaire，CERQ），对吉林省4所高校812名在校本科学生进行调查。结果：单因素方差分析表明，大学生在认知情绪调节策略的自责（F（3.808）=4．686，P=0．003）、忍受（F（3.808）=4．873，P=0．002）、沉思默想（F（3.808）=3．013，P=0．029）这3个维度上都存在显著的年级差异。相关分析表明，大学生抑郁与认知情绪调节策略各维度（除自我安慰）存在不同程度的显著性相关（P〈0．001）。多元回归分析结果显示，灾难化、积极设想、沉思默想、忍受、积极调整和责备他人这6种策略能够预测大学生抑郁35．0％的变异量，其中，灾难化、积极设想与沉思默想策略的预测力较强。结论：大学生认知情绪调节与抑郁有密切联系，认知情绪调节中的灾难化、积极设想与沉思默想策略是抑郁的较好预测指标。     

人白介素- 4对牛血管内皮细胞保护作用的研究

目的:研究人白介素-4(hIL-4)对经TNF-α活化的牛主动脉内皮细胞(BAEC)的保护作用。方法:用不同浓度的hIL-4与BAEC共孵育2h后,再与4μg/L的TNF-α共孵育6h或18h。应用细胞ELISA方法,检测BAEC表面的E选择素和ICAM-1的表达;用MTT比色法测定hIL-4对BAEC活性的影响。结果:在一定浓度内用hIL-4预处理BAEC后,能明显抑制TNF-α诱导活化BAEC上的E选择素与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性。用MTT比色法测定BAEC活性的实验表明,各实验组BAEC的活性与对照组无明显差异性。结论:hIL-4能明显抑制TNF-α诱导活化的BAEC表达E选择素与ICAM-1;hIL-4对BAEC的正常功能具有一定的保护作用。