BCG_3174基因敲除卡介苗菌株的构建及鉴定

目的为了证实BCG_3174是BCG基因组中存在的潜在抑制凋亡功能基因,拟构建BCG_3174敲除菌株并进行鉴定。方法以BCG中国株的基因组DNA为模板,PCR扩增BCG_3174基因,扩增产物用Van91Ⅰ酶切并回收产物。载体p0004S转化E.coli DH5α培养,用Van91I酶切载体p0004S。将酶切BCG_3174基因片段的左、右臂以及酶切载体p0004S的3.6 kb和1.6 kb两个片段连接,转化入DH5α中培养,筛选阳性克隆并测序鉴定,构建重组质粒p0004S-ΔBCG_3174。将载体phAE159转化E.coli HB101培养,提取phAE159后以PacI酶切,同时以PacI酶切重组质粒p0004S-ΔBCG_3174,以T4连接酶连接。加入E.coli HB101感受态细胞并培养,提取质粒后用PacI酶切鉴定,阳性克隆命名为phAE159-ΔBCG_3174,电击转化耻垢分枝杆菌mc2155感受态细胞。取BCG菌液与噬菌体裂解液混合共培养,提取敲除菌株的基因组DNA,鉴定正确的菌株命名为ΔBCG_3174。结果凝胶成像显示扩增产物与预期目标大小一致,左臂大小为887 bp,右臂大小为931 bp。阳性克隆测序确证左、右臂正确连入p0004S且序列无突变,p0004S-ΔBCG_3174序列与预期一致。PacⅠ酶切phAE159载体产生约42 kb和4 kb两条片段,酶切p0004S-ΔBCG_3174质粒产生7.1 kb片段,该片段亚克隆入PacⅠ酶切的phAE159载体后产生重组质粒phAE159-ΔBCG_3174,酶切鉴定证实phAE159-ΔBCG_3174构建正确。BCG_3174基因敲除的BCG基因组PCR扩增产物大小约为5.6 kb,与预期大小相符,BCG_3174基因敲除BCG菌株ΔBCG_3174构建成功。结论成功制备BCG_3174基因敲除的BCG菌株ΔBCG_3174,为BCG_3174基因的功能研究奠定了基础。     

小型节肢动物无形态损伤提取基因组DNA的研究进展

DNA 提取是获取 DNA 条形码的关键步骤及进行后续相关研究的基础。 小型节肢动物因个体微小,常用的基因组 DNA 提取方法破坏了重要的外部形态特征,致使无法进行后续的形态学验证,而无形态损伤提取 DNA 的方法有效弥补前者的不足。 本文对小型节肢动物的无形态损伤提取基因组 DNA 进行综述,对比了小型节肢动物不同基因组 DNA 提取方法的优缺点,为进一步优化改进,探索更简单、高效的无形态损伤性 DNA 提取方法奠定基础。     

2020年陕西省一起布鲁氏菌病暴发疫情的调查分析

目的 调查2020年陕西省泾阳县一起家庭布鲁氏菌病(布病)暴发疫情的原因,明确传染源和传播途径,为阻断疫情传播提供科学依据。方法 对报告病例开展布病流行病学调查,并对病例和牲畜进行布病检测和布鲁氏菌分离培养鉴定种型,对结果进行描述和分析。结果 共发现7例确诊病例和6例隐性感染者;确诊病例发病时间为3月18日至5月7日,临床表现以发热为主;经分析,病例发病与食用牛肉无关联(OR=0.48,95%CI:0.08~2.85),与去过首发病例家有关(OR=141.00, 95%CI:17.15~1 159.28);13例病例、2只羊和2只公犬布鲁氏菌抗体检测阳性,血清抗体滴度从1∶100(++)到1∶800(++++)以上;从2例病例、2只羊和1只公犬血液中共分离到5株布鲁氏菌,均为羊种3型,MLVA-16基因型均为(1-5-3-13-2-2-3-2-4-41-8-6-4-3-4-5)。结论 该起布病家庭暴发疫情的原因为公犬叼食了布病阳性羊只的流产物而感染布病,继而人通过与病犬直接接触以及接触被病犬污染的水等生活物质而发病。     

Study Design and Interim Outcomes of Guangzhou Institute of Respiratory Disease COPD Biobank

Background: GIRD COPD Biobank is a multicenter observational study blood-based database with local characteristics, in order to investigate the causes, risk factors, pathogenesis, prevalence patterns and trends of COPD and promote new pathogenic insights in China.

Methods: We enrolled 855 clinically COPD patients and 660 controls with normal lung function. Extensive data collection has been undertaken with questionnaires, clinical measurements, and collection and storage of blood specimens, following Standard Operating Procedures (SOP). All surveys had similar quality controls, supervisions, and training of the investigator team.

Results: Since September 2010, a total of 1515 subjects (1116 [73.7%] males; 855 [56.4%] diagnosed with COPD) were enrolled. Analyses of the design and interim results of the GIRD COPD Biobank Study identified patients with COPD were older, lower educational level, a longer history of pack-year smoking, less in kitchen fan usage, X-ray exposure, and history of disease (P < 0.01 for all); Most of the COPD subjects belonged to moderately severe or worse, stratified according to Global Lung Function Initiative (GLI); COPD patients had relatively more co-morbidities than controls; Environmental hazard exposures might be the main contributors to the reported respiratory symptoms; Cold air, haze, and influenza acted the top three factors to induce respiratory symptoms in both COPD cases and controls.

Conclusion: The GIRD COPD Biobank Study has the potential to provide substantial novel insights into the genetics, biomarkers, environmental and lifestyle aspects of COPD. It is expected to provide new insights for pathogenesis and the long-term progression of COPD.     

器官移植受者人巨细胞病毒糖蛋白H基因型分析

目的分析器官移植受者人巨细胞病毒（HCMV）临床分离株糖蛋白H基因型，为进一步研究其致病性、免疫性以及研制HCMV亚单位疫苗提供依据。方法以巢式聚合酶链反应（nested—PCR）检测97例器官移植受者外周血细胞中的巨细胞病毒gH基因并测序分型。结果有23例移植受者的标本经nPCR检出gH基因阳性，阳性率为23．71％，其中骨髓移植受者阳性率10．31％，肝移植受者阳性率5．15％，肾移植受者阳性率8．25％。在23例HCMV分离株中，20例得到gH基因型结果，其中gH1型10例，占50％，gH2型6例，占30％，gH1、2混合型4例，占20％，呈散在分布（χ2=4．00，P〉0．05）；gH基因型在各移植类型间也呈散在分布（χ2=5．652，P〉0．05）。结论HCMV临床分离株糖蛋白基因分别属于gH基因型1～2型，呈散在分布。     

N-乙酰半胱氨酸对早期日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的影响

目的 研究N-乙酰半胱氨酸（NAC）对早期日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的影响。 方法　 将36只健康小鼠随机分为NAC组、正常对照组、感染对照组。NAC组和感染对照组小鼠每只经腹部皮肤感染25±2条日本血吸虫尾蚴,于感染当天起给NAC组小鼠200 mg/kg NAC灌胃,2次/d,共42 d;正常对照组和感染对照组每只小鼠2 ml蒸馏水灌胃,2次/d,共42 d。感染第42天,各组小鼠全部处死后取血清和肝脏。对肝脏进行病理学观察,测定血清及肝组织的生化指标。 结果 NAC组小鼠的肝组织“+、++、+++”3级单个虫卵肉芽肿个数分别为1.80±0.25、1.37±0.23、0.53±0.15, 均显著低于感染对照组（P＜0.05）。NAC组小鼠血清中NO水平、GSH水平分别为0.53±0.17、229.66±9.47,相对感染对照组均有所下降（P＜0.05）,谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX活性为1101.99±140.81, 相对感染对照组有所升高（P＜0.05）;肝组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性、NO水平、还原型谷胱甘肽（GSH）水平及GSH-PX活性分别为6.85±0.30、13.44±0.40、358.40±19.15、110.84±10.93,均显著低于感染对照组（P＜0.05）。 结论 N-乙酰半胱氨酸可以减缓日本血吸虫病小鼠肝组织病理变化。     

静脉溶栓治疗对糖尿病并发急性心肌梗死患者近远期效果的影响

目的:本研究探讨静脉溶栓治疗对糖尿病并发急性心肌梗死(AMI)患者近远期效果的影响。方法:对本院连续住院治疗的116例AMI的溶栓治疗患者,按临床诊断分成糖尿病组(n=26)、非糖尿病组(n= 90)。根据胸痛症状、心电图ST段抬高和下降情况及心肌酶水平峰值变化,采用中华医学会心血病学分会制定的间接标准及其组合判断方法评定梗塞相关血管是否再通,随访观察和分析2组治疗效果。结果:开始溶栓时间:糖尿病组平均为(5.69±2.24)h,非糖尿病组平均为(4.68±1.80)h,两组比较糖尿病组时间延长,有显著性差异(P<0.05)。梗塞血管再通:糖尿病组有13例,再通率为56.5%,非糖尿病组66例,再通率为75.9%,两组再通率相比,糖尿病组明显低于非糖尿病组,有显著性差异(P<0.025)。心力衰竭发生率在糖尿病组溶栓后有42.3% (11例),非糖尿病组21.1%(19例),两组发生率比较糖尿病组严重心力衰竭的发生率高于非糖尿病组,有显著性差异(P<0.05)。住院病死率在糖尿病组死亡5例(占19.2%),非糖尿病组死亡9例(占10.0%),两组相比,糖尿病组死亡率有增多趋势,但尚无显著性差异(P>0.05)。平均随访5.6年(2.2～7.5年),糖尿病组病死率高于非糖尿病组(P<0.05)。结论:糖尿病并发急性心肌梗死患者经溶栓治疗后,仍有较差的近期及远期预后,其溶栓治疗再通率较低,与糖尿病患者开始溶栓时间延迟有关。     

血清透明质酸Ⅲ型前胶原Ⅳ型胶原及脯氨酸肽酶对肝组织纤维化诊断的意义

探讨肝病患者血清透明质酸（HA）,Ⅲ型前胶原（PCⅢ）,型胶原（CⅣ）及脯氨酸肽酶（PLD）水平与肝纤维化程度的关系。用酶联免疫（ELISA）法及生化比色法检测225例各种肝病患者血清中HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平,并与肝活检病理炎症分级和纤维化分期相比较。四项指标与肝组织炎症坏死及纤维化程度均呈显著相关（P〈0．05）。HA、PCⅢ及CⅣ与肝纤维化相关性高于炎症,PLD与炎症的相关性高于纤维化。血清学指标与肝组织病理病变程度一致,联合检测肝病患者血清HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平,既可反映肝纤维化严重程度,又能了解肝坏死情况,为临床诊断治疗提供参考。     

支气管哮喘中气道重构的研究状况

支气管哮喘是由嗜酸粒细胞（EOS）、肥大细胞和T细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,气道重构是在气道炎症基础上气道壁损伤,在多种细胞、炎症介质、生长因子的参与下出现的不完全修复。本文从病理和发生机制的角度对哮喘的气道重构作一综述。     

呼吸道疾病中的性别差异

流行病学研究表明，男性和女性在部分呼吸道疾病的发病率、患病风险、病理学和发病机制上存在明显差异。性别不仅造成男女的生理差别，还导致他们在社会地位、经济和文化背景等各方面的不同，这些因素同样也影响呼吸道疾病的发生和发展。该文回顾了性别差异在主要呼吸道疾病中的作用，并进一步讨论哮喘、阻塞性肺疾病（COPD）、结核病及肺癌等部分呼吸道疾病的性别差异发生的具体机制。