RNA干扰Neuropilins-2基因真核表达载体的构建及其鉴定

目的 构建Neuropilins-2(NRP2)基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以NRP2为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构件重组体,根据GenBank数据库提供的NRP2基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.重组pGenSil-NRP2载体转染LOVO细胞48 h,收获细胞,采用Western blotting检测其NRP2蛋白表达.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功.重组体pGenSil-NRP2转染LOVO细胞48 h后NRP2蛋白表达显著降低.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制NRP2表达的小干扰RNA重组体.     

糖基化白蛋白促内皮细胞小管样结构形成及其机制

目的 观察糖基化牛血清白蛋白(advanced glycated bovine serum albumin, AGE-BSA)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)小管样结构(tubule like structure,TLS)形成的影响并探讨其可能机制.方法 实验设实验组、实验对照组和空白对照组.实验组设25、50、100 μg/ml 3个AGE-BSA浓度;同时设置相同浓度的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为实验对照组;内皮细胞完全培养基作为空白对照组.各组设24、48、72 h 3个时相点,采用三维胶TLS形成实验和ELISA方法分别检测不同浓度AGE-BSA作用下HUVEC在Ⅰ型胶原中形成TLS的长度以及HUVEC自分泌血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的浓度.结果 在24～72 h内,浓度为25～100 μg/ml的AGE-BSA比相同浓度的BSA使HUVEC培养上清中VEGF的量和在胶原中分化形成TLS的长度均明显增加(P＜0.05).结论 AGE-BSA可通过刺激VEGF自分泌促进内皮细胞TLS形成,提示糖基化终末产物可能参与糖尿病视网膜血管生成.     

多功能医学实验平台的研制及在体外细胞温度效应观察中的初步应用

目的 研制一种多功能医学实验平台.方法 选用氧气、二氧化碳、湿度、温度传感器、控制器及效应器构建多功能医学实验平台并用于293细胞、PK15细胞受温度效应影响的试验.结果 该多功能医学实验平台可对温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度进行调节和控制,温度调控范围-20～ 60 ℃, 二氧化碳浓度调控范围0%～20%,氧气浓度调控范围0%～100%;湿度调控范围室温湿度至98%.采用该实验平台观察不同温度对293细胞、PK15细胞影响时发现,在10 ℃和20 ℃时,细胞出现胞体皱缩、突起变长等特征,细胞停止增殖.结论 该多功能医学实验平台可调节温度、湿度、氧气浓度和二氧化碳浓度,可用于细胞低温保存等移植相关实验.     

腔内激光+高位结扎+戴戒术治疗PDVI分析

目的：探讨腔内激光加高位结扎加股浅静脉瓣膜戴戒术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的疗效和应用价值．方法：经静脉造影等检查后，诊断为原发性下肢深静脉瓣膜功能不全患者24例（29条下肢）予以腔内激光治疗、大隐静脉高位结扎加股浅静脉瓣膜戴戒术治疗．结果：本组所有病例的下肢曲张浅静脉手术后均闭塞、消失，彩色超声多普勒检查示大隐静脉主干均发生血栓性闭塞．11条肢体（37．9％）发生沿大隐静脉行程条索状硬结或硬块，2条肢体（6．9％）出现淤斑，1例（3．4％）患者发生皮肤浅表烧伤．全组病例术后随访12～36mo，症状完全消失及明显减轻的下肢23条（79．3％），患肢溃疡愈合11条（73．3％），病情好转，症状基本消失但有轻度肿胀2条（6，9％），术后出现深静脉血栓形成者1条（3．4％）．结论：腔内激光加高位结扎加股浅静脉瓣膜戴戒术治疗原发性下肢深静脉瓣膜功能不全的疗效满意，实用性强，具有安全、微创、瘢痕小和恢复快的优点．     

诺帝对HPV16型亚基因永生化人宫颈上皮细胞的诱导分化作用

目的 研究诺帝(Nordy)对HPV16型亚基因(E6、E7)永生化人宫颈上皮细胞(H8细胞)的诱导分化作用.方法 MTT法检测诺帝对H8细胞增殖的抑制作用,流式细胞术(FCM)分析细胞周期,免疫细胞化学S-P法检测增殖细胞核抗原Ki67的表达,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化.结果 诺帝能够明显抑制H8细胞增殖;可阻滞细胞周期于G0/G1期,S期细胞减少;细胞核内Ki67蛋白的表达水平明显下降;端粒酶活性明显降低.结论 诺帝对H8细胞有诱导分化作用,这种作用可能是通过抑制增殖,阻滞细胞周期,降低端粒酶活性来实现的.     

环磷酰胺对人腺泡状横纹肌肉瘤细胞裸鼠移植瘤生长和形态结构的影响

目的 检测环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对人腺泡状横纹肌肉瘤细胞株PLA-802裸鼠移植瘤生长和形态结构的影响.方法 16只裸鼠右腋皮下接种PLA-802移植瘤细胞悬液后分成空白对照组(5只)、生理盐水对照组(5只)和20 mg/kg CTX治疗组(6只).接种后第7天开始,经腹腔注射给药,隔日1次,共注射10次.每2天测量1次肿瘤大小绘制移植瘤生长曲线.接种后第26天杀鼠摘取移植瘤称重,组织经制片染色后用光镜和电镜检查.结果 ①CTX治疗组移植瘤生长被明显抑制(P＜0.05),抑瘤率85.55%.②治疗后瘤细胞疏松排列成腺泡状,由纤维间质分隔,血管稀少;瘤细胞椭圆形、网拍状或短梭形;核椭圆或类圆形,大小不一;核分裂相减少.电镜见瘤细胞质内有不等量肌(微)丝,甚至有横纹肌肌原纤维结构形成.结论 CTX对人腺泡状横纹肌肉瘤PLA-802移植瘤生长具有一定程度的抑制作用,治疗后瘤组织形态结构改变.     

移动互联网为基础的急救医疗平台构建

构建移动急救医疗平台,介绍该平台体系架构、模拟运行功能,通过案例说明平台的功能实现,从而为参与医疗急救援助的各方提供决策支持和增值服务,根据患者所处位置及具体症状分配医院和救护车。     

益气养阴活血法治疗糖尿病周围神经病变临床探讨

[目的]观察益气养阴活血法治疗糖尿病周围神经病变（DPN）的临床效果。[方法]选取90例确诊DPN的2型糖尿病（T2DM）患者,随机分为治疗组和对照组;两组均进行饮食、运动、常规降糖及口服甲钴胺分散片营养周围神经等基础方案治疗,治疗组在对照组的基础上加用芪棱汤。连续治疗8周,比较两组患者治疗前后正中神经和腓总神经的感觉神经传导速度（MCV）、运动神经传导速度（SCV）、多伦多临床评分（TCSS）及临床疗效。[结果]治疗前,治疗组和对照组的空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、MCV、SCV及TCSS,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后,治疗组和对照组各组的正中神经和腓总神经MCV、SCV、TCSS均较治疗前有所改善,且治疗组较对照组改善更明显,差异有统计学意义（P<0.05）;对临床疗效比较,治疗组有效率为93.33%,对照组为73.33%,两组差异有统计学意义（P<0.01）。[结论]基础方案联合益气养阴活血法治疗DPN可增加神经传导速度、减轻临床症状及提高临床疗效。     

胰腺囊性肿瘤诊治进展

胰腺囊性肿瘤组织学分类广泛,随着影像学技术如CT、MRI等的不断发展,其检出率增加,因此规范化诊治成为临床面临的挑战。目前临床对胰腺囊性肿瘤的影像学特征及肿瘤标志物认识不足,未能制定合理的诊疗方案。影响力较高的胰腺囊性肿瘤诊治规范有国际共识指南、欧洲专家共识声明、美国胃肠病学会指南,本文围绕上述指南/专家共识声明对比分析其提出的诊治策略及建议,并结合超声内镜相关检查技术,为临床处理该类疾病提供参考意见。     

磁共振高分辨率T2加权成像联合分段读出平面回波成像鉴别诊断肌层和非肌层浸润性膀胱癌的临床价值

目的 评估磁共振高分辨率T₂加权成像（HR-T₂WI）、分段读出平面回波成像（RS-EPI）和两者联合鉴别肌层与非肌层浸润性膀胱癌的临床价值。方法 前瞻性纳入2016年6月至2017年12月于我院经膀胱镜活组织检查证实为膀胱癌、最终行手术治疗并明确病理分期的9 5例患者,所有患者均行HR-T₂WI、RS-EPI检查。分别应用HR-T₂WI、RS-EPI及HR-T₂WI+RS-EPI图像明确膀胱癌是否浸润肌层,并采用Kappa检验将3种方法的诊断结果与病理结果进行比较。绘制受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积（AUC）,评估3种诊断方法的灵敏度、特异度和准确度,采用DeLong检验对3种诊断方法的AUC进行两两比较。结果 HR-T₂WI、RS-EPI和HR-T₂WI+RS-EPI的诊断结果与病理结果的一致性均较好,Kappa值分别为0.770、0.787、0.936（P均<0.01）。3种方法鉴别肌层与非肌层浸润性膀胱癌的AUC、灵敏度、特异度和准确度分别为0.899、95.5%（42/44）、82.4%（42/51）和88.4%（84/95）,0.891、84.1%（37/44）、94.1%（48/51）和89.5%（85/95）,以及0.966、93.2%（41/44）、100.0%（51/51）和96.8%（92/95）。HR-T₂WI+RS-EPI鉴别诊断肌层与非肌层浸润性膀胱癌的AUC大于HR-T₂WI和RS-EPI（Z=-2.627 8、-2.720 5,P=0.008 6、0.006 5）。结论 HR-T₂WI联合RS-EPI可作为术前无创、准确鉴别诊断肌层和非肌层浸润性膀胱癌的方法。