重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选

目的 测定重组人肽抗生素hPAB—β及其突变体的抗菌活性，筛选理想的活性分子。方法 应用平板法和MIC测定法检测重组表达的hPAB—β及突变体hPAB—β38、hPAB—β34对8株实验室保存菌株及10株临床分离菌株的杀菌能力。并以化学合成的肽抗生素hPAB—β作对照；根据各目的分子抗菌能力的强弱，筛选理想的目标分子，并分析突变体结构的变化对其功能的影响。结果 重组hPAB—β及突变体hPAB—β38与化学合成的天然分子抗菌活性相当．对革兰氏阳性菌的MIC在125～250μg／ml之间，对革兰氏阴性菌的MIC在31～125μg／ml范围内；突变体hPAB—β34活性下降4倍左右；结构分析表明hPAB—β38与hPAB—β参与二级结构中α螺旋和β片层构成的氨基酸残基完全相同，而hPAB-β34则有显著不同，α螺旋少了2个残基，3个β片层中除β2与hPAB—β相同外，β1和β3的构成均多2个残基，推测hPAB—β34二级结构的改变是其活性降低的主要原因。结论 重组肽抗生素hPAB—β具有抗菌活性，删除3个端残基的突变体hPAB—β38活性不变，可作为hPAB—β走向临床应用的一个新侯选者。     

乳腺癌的MRI影像特征与PTEN和PCNA表达的相关性研究

目的探讨乳腺癌动态增强磁共振成像的影像特征及其与癌组织10号染色体上与张力蛋白同源的磷酸酶(PTEN)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的关系。方法纳入2015年5～2017年12月我院乳腺手术患者52例,全部患者均行MRI-弥散加权成像(DWI),将图像进行后处理,并进行ADC值测量。术后病理证实其中43例乳腺癌,9例乳腺纤维腺瘤。所有患者组织采用HE染色观察组织病理学改变,免疫组织化学方法与Western blot方法检测肿瘤组织PTEN和PCNA的表达情况,并将PTEN和PCNA的表达与MRI-DWI成像表观扩散系数(ADC值)进行相关性分析。结果与乳腺纤维腺瘤组织相比,乳腺癌组织中PTEN蛋白阳性表达的平均光密度值显著降低,PCNA蛋白阳性表达的平均光密度值显著升高(P0.01)。乳腺癌ADC值明显低于乳腺纤维腺瘤组织,乳腺癌ADC值与PTEN呈正相关(r=0.619,P0.01);乳腺癌ADC值与PCNA表达结果呈负相关(r=-0.527,P0.01)。结论 PTEN与PCNA的表达与乳腺癌的MRI影像学表现密切相关,可作为患者临床治疗和预后判断的重要参考指标。     

人肽抗生素hPAB-β多拷贝串联基因工程菌的筛选及发酵研究

目的：对已构建的人肽抗生素hPAB-β 1～8拷贝串联基因工程菌进行筛选，并对其优势菌株进行发酵研究，为hPAB-β的规模生产奠定基础。方法：对1～8拷贝串联基因工程菌的目标蛋白表达率进行比较后，选择2～5拷贝菌进行菌产量、目标蛋白表达率、包涵体溶解性、亲和层析效果比较，确定最佳多拷贝菌；对其摇瓶条件下发酵的培养液、温度、气体条件、IPTG诱导时机、浓度及时间进行研究。结果：在相同条件下，3拷贝菌产量(3．153g／L)最高，目标蛋白表达率(27．8％)接近最高水平，包涵体能溶解完全；利用亲和层析能成功捕获融合蛋白，后者经羟胺裂解，可获得相对分子质量与合成hPAB-β成熟肽大小相符的小肽，筛选出的优势菌传代稳定，其最佳摇瓶发酵条件为37℃，160r／min条件下，在改良M9-cAA培养液中培养至吸光值(A600)≈2．5时，以终浓度为100μmol／L的IPTG诱导表达5h。结论：确定了3拷贝菌为最佳多拷贝菌，并确定了其最佳摇瓶发酵参数。     

登革1型病毒GZ2002株全基因组测序与分析

目的对2002年分离自广州登革热患者的1型登革病毒GZ2002株进行全基因组序列测定及分析,为探讨其来源和基因组特征提供依据。方法利用C6/36细胞增殖GZ2002株,出现典型细胞病变后收集感染细胞及病毒液提取R NA。根据5株登革病毒1型标准株AY145123、FJ176780、FJ176779、DVU88536、EF025110全序列设计6对相互覆盖的引物。采用R T-PCR法扩增覆盖GZ2002株基因组全长的6个cDNA片段,并将其分别克隆到pMD-18T载体上,通过序列测定和重叠序列拼接获得全基因组序列。结果 GZ2002株基因组全长10 735 nt,单一阅读框长10 176 nt,推测编码3 392个氨基酸,5’及3’-UTR分别为94 nt和462 nt,无显著的密码子偏嗜性。GenBank登录号:JN205310。系统进化分析显示GZ2002株属于DENV-1型基因IV型。比较不同致病性的DENV-1型毒株发现,随DENV毒株致病力的增强,编码区氨基酸突变位点明显增多。GZ2002株、泰国16007株、柬埔寨株及印度尼西亚98901530株的5’-UTR二级结构高度保守,3’-UTR分析显示强毒力泰国16007株与柬埔寨株均存在高突变区。结论 GZ2002株属于DENV-1型基因IV型,可能与1998年印度尼西亚DENV-1流行株相关,编码区株特有氨基酸变异位点及3’-UTR高突变区的生物学意义值得进一步探讨。     

pQE-EGFP原核表达载体的构建及其表达和鉴定

目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质。结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因。所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致。结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。     

人肽抗生素hPAB-β重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建人肽抗生素hPAB-β重组质粒,并在大肠杆菌中进行表达,为大量制备hPAB-β奠定基础.方法通过PCR将hPAB-β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解,将修改的目标片段克隆到pFAST-HTa质粒中,挑取阳性重组子,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32-CP中,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,进一步以亲和层析纯化融合蛋白,用羟胺裂解分析.结果构建的pFAST-hPAB-β重组质粒经酶切可得到约230bp的片段,与预期大小相符,测序结果表明其序列正确;构建的pQE32-CP-hPAB-β重组表达质粒酶切亦可切出230bp的片段,测序结果表明序列和阅读框均正确;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约27×103大小的蛋白,表达量约占细菌总蛋白的43%,该融合蛋白以包涵体形式存在,通过亲和层析可获得该蛋白,纯度为80.4%,该融合蛋白经羟胺裂解1h即可得到与合成肽大小相符的小肽.结论本研究成功构建了含hPAB-β重组质粒的工程菌,为进一步研究和大量制备hPAB-β创造了前提.     

肺曲霉菌病的临床分类和影像学表现

曲霉菌是一类普遍存在的真菌,根据病人免疫状态及潜在肺部疾病的不同,可以造成肺部多种形式的损害及影像学表现,包括曲霉菌球(发生在肺内原有空洞/空腔内)、慢性坏死性曲霉病(见于部分性免疫损害或慢性肺部疾病病人)、侵袭性肺曲霉菌病(见于免疫缺陷病人)以及过敏性支气管肺曲霉菌病(见于哮喘病人,是对曲霉菌抗原的超敏反应).基于导致侵袭性肺曲霉菌病增加的危险因素,如器官移植和免疫抑制疗法等,熟悉各类肺曲霉菌病的临床和影像学表现是十分必要的.     

术中内镜诊断小肠出血的临床应用

目的：探讨诊断小肠出血的有效方法。方法：在剖腹探查术中，利用内镜透照方法检查全小肠。结果：对17例小肠出血皆成功地检出了出血部位和原因。结论：术中内镜检查是诊断小肠出血简便、有效的方法。     

改革教学方法和教学手段，提高微生物学教学质量

探讨改革微生物学教学的方法、手段及效果。根据不同的微生物学课程内容,灵活运用“问题式”、“讨论式”、“学导式”等不同的教学方法,寓法于文,文法结合;充分利用多媒体网络为代表的现代教育技术手段,取得了明显的教学效果。