应用MPB64抗原检测快速鉴定结核分枝杆菌的研究

目的评价检测分枝杆菌MPB64抗原对快速鉴别分枝杆菌菌种的价值。方法采用结核分枝杆菌MPB64抗原胶体金法和传统对硝基苯酸(PNB)生长实验,对652株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并比较分析。结果两种方法的检测结果相符647株,不符5株,符合率99.2%(647/652),两种方法对分枝杆菌复合群检出率差异无统计学意义(P>0.05),用胶体金法检测结核分枝杆菌复合群敏感性为99.1%,特异性为100.0%。结论与PNB方法相比,分枝杆菌MPB64抗原胶体金法有较高的特异性和灵敏性,方法简便、快速,是分枝杆菌菌种鉴别的有效方法。     

非结核分枝杆菌病的实验室诊断技术进展

目前,非结核分枝杆菌（NTM)病的发病率在全球逐年提高,NTM与结核分枝杆菌均可引起肺部以及其他部位病变,而且临床症状相似,鉴别诊断困难,所以分枝杆菌菌种鉴定对于疾病的诊断、治疗及预后意义重大。传统生化鉴定方法费力耗时,不能很好地满足临床需要。近年来,以免疫层析技术为基础的MPB64抗原胶体金法、以色谱技术为基础的气相及高效液相色谱法、以基因探针、限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）及PCR-基因测序方法为代表的分子生物学技术等各种新技术的引入,为NTM的菌种鉴定提供了更为科学的方法。作者就上述3种技术为基础开展的菌种鉴定方法,综合国内外近年来的文献,介绍了各种方法的原理、应用情况、性能指标等,同时对方法的优点及局限性进行初步评价。相信随着新技术不断完善,能够逐步形成快速可靠、成本低廉的标准化NTM菌种鉴定体系。     

Spoligotyping结合多位点PCR用于牛分枝杆菌卡介苗的快速鉴定

目的鉴别分枝杆菌临床分离菌株中的牛分枝杆菌卡介苗,为临床确诊提供依据。方法采用PNB／TCH鉴别培养基和分子生物学技术（间隔寡核苷酸分型Spoligotyping和多位点PCR）对从一例疑似牛分枝杆菌卡介苗感染的结核病患者分离的菌株（FJ07111）进行鉴定。结果临床分离分枝杆菌菌株FJ07111具有与牛分枝杆菌93006一致的生长特性,Spoli—gotyping和多位点PCR结果与注射用BCG完全一致。结论Spoligotyping和多位点PCR方法可简便、快速、准确鉴定牛分枝杆菌卡介苗。     

Sysmex XT-1800i血液分析仪对异常血细胞报警的评价

目的评估Sysmex XT1800i全自动血液分析仪对异常血细胞报警的可信度。方法选择Sysmex XT1800i异常血细胞报警的标本296例,无异常报警的标本180例,进行手工推片瑞氏染色镜检,观察血涂片红细胞、白细胞和血小板形态,与Sysmex XT1800i异常报警进行比较。结果 Sysmex XT1800i对异常血细胞报警灵敏度100.0%,特异性58.4%,阳性预测值56.7%,阴性预测值100.0%,对血小板的聚集和异型淋巴细胞警告功能较差。结论 Sysmex XT1800i全自动血液分析仪能够有效地筛选出真正异常的标本,同时应结合仪器性能制定复检规则,使工作人员更有效对真阳性标本进行复检。     

福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的 对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定.方法 分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16s rRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定.结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌.结论 在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现.     

结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征初步分析

目的 阐明结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法 对110株结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区（RRDR）81个碱基在内的286bp片段进行聚合酶链反应．单链构象多态性（PCR．SSCP）分析，并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌rpoB基因此扩增区域进行序列测定。其中利福平耐药株73株，非利福平耐药株11株，敏感株26株。结果 PCR—SSCP检测显示利福平耐药株中有47株有突变存在，经直接测序分析其中76．6％的菌株存在rpoB基因的单位点突变，主要集中在531位（61．1％）和526位（25．0％）；联合突变发生率为23．4％。此外，经PCR—SSCP检测，11株非利福平耐药株中2株有突变存在，26株敏感株中1株有突变存在。经直接测序分析突变涉及位点为511位、526位和535位。结论 rpoB基因耐药决定区发生突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因，其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

荧光PCR熔解曲线法快速鉴定痰标本中分枝杆菌菌种的临床应用价值

目的：研究荧光聚合酶链式反应（PCR）熔解曲线法快速鉴定痰标本中分枝杆菌菌种的临床应用价值。方法：采集福州肺科医院2018年1月至2019年12月经BACTEC MGIT 960系统液体培养阳性的558株疑似非结核分枝杆菌（NTM）临床分离菌株。对所有菌株均开展荧光PCR熔解曲线及16S核糖体核糖核酸（rRNA）基因测序法鉴定。将16S rRNA基因测序结果作为标准,采用荧光PCR熔解曲线法鉴定NTM的效能,分析主要NTM的耐药性情况。结果：16S rRNA基因测序法鉴定结果显示,疑似NTM菌种以胞内分枝杆菌（M.胞内）、龟/脓肿分枝杆菌（M.龟/脓肿）、鸟分枝杆菌（M.鸟）、堪萨斯分枝杆菌（M.堪萨斯）及戈登分枝杆菌（M.戈登）为主;荧光PCR熔解曲线法鉴定结果显示,疑似NTM菌种亦以上述5种为主。荧光PCR熔解曲线法鉴定M.龟/脓肿的灵敏度、特异度及准确度为95.7%、100.0%、99.1%;M.胞内的灵敏度、特异度及准确度为100.0%、97.3%、98.7%;M.鸟灵敏度、特异度及准确度为88.7%、100.0%、98.6%;其他NTM菌种的灵敏度、特异度及准确度均为100....     

DNA芯片鉴定分枝杆菌的研究

目的评价DNA芯片技术鉴定分枝杆菌菌种的应用价值,为临床实际应用提供科学依据。方法收集以BACTECMGIT960从结核病患者分离到的分枝杆菌阳性培养物,以传统分枝杆菌菌种鉴定方法为对照,应用DNA芯片技术进行菌种鉴定。结果两种方法鉴定结果一致和基本一致共112株,吻合率为83.6%(112/134),包括胞内分枝杆菌50株,龟分枝杆菌14株,结核分枝杆菌14株,戈登分枝杆菌9株,鸟分枝杆菌7株,偶然分枝杆菌7株,堪、瘰、胃和猿分枝杆菌6株,土分枝杆菌和海分枝杆菌各1株;未分类NTM3株。应用DNA芯片未能分类的17株分枝杆菌中,传统方法分别鉴定为戈登分枝杆菌5株、胞内分枝杆菌3株、龟分枝杆菌2株、蟾分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和浅黄分枝杆菌各1株,未分类NTM4株。结论用DNA芯片检测技术,可以简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,但有待进一步完善。     

耐多药肺结核患者血清蛋白指纹图谱测定初步研究

目的 评价血清蛋白指纹图谱技术在诊断耐多药肺结核患者中的应用价值。方法 选择痰Mtb培养阳性的肺结核患者70例,其中耐多药肺结核患者35例为A组,非耐药肺结核患者35例为B组;健康者35例为C组。以B、C组为对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和蛋白芯片技术检测血清蛋白,并应用Ciphergen protein chip 3.2.1软件进行比较,分析其相关血清蛋白峰值并进行统计学处理。 结果 耐多药肺结核患者组与对照组的血清蛋白质谱数据进行比较,存在 4个差异有统计学意义的蛋白峰;其中质荷比(mass to charge ratio,m/z)在1369、3400 m/z为低表达,而8700、22 794 m/z为高表达;其灵敏度分别为77.1%（27/35）、71.4%（25/35）、80.0%（28/35）、74.3%（26/35）,特异度分别为72.9%（51/70）、74.3%（52/70）、75.7%（53/70）、81.4%（57/70）;χ²值分别为23.7、20.2、29.6、31.0,P值均＜0.01,差异有统计学意义。结论 血清蛋白质指纹图谱技术简便、快速,标本用量少,可能成为筛选耐多药肺结核一种新的检查指标。     

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究

目的探讨结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）在临床快速诊断结核病中的应用价值。方法利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率。同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对。结果164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为94.5％（155/164）,显著高于其他方法。60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8％（75/80）。结论T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别。