常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子标志物检测

目的 了解浙江省湖州解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子存在状况。方法 从临床分离鲍曼不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、阴沟肠杆菌20株、嗜麦芽窄食单胞菌19株和黄杆菌属15株（脑膜败血性黄杆菌12株、产吲哚金黄杆菌3株），采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子标志物int Ⅰ1及qacE△1基因。结果 鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属中intⅠ1基因阳性率分别为58．3％、0、95．0％、0和0，qacE△1基因阳性率分别为83．3％、83．3％、85．0％、10．5％和0。合计144株中intⅠ1和qacE△1阳性株数（％）分别为54株（37．5％）、94株（65．3％），Ⅰ类整合子标志物总阳性率为68．1％（98／144）。结论 解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子携带率相当高。     

鲍曼不动杆菌启动子突变TEM-1型β-内酰胺酶基因研究

目的 分析浙江湖州地区临床分离的鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)耐药基因序列，并确定其亚型。方法 采用微量稀释法对在2001年1月至2002年12月间自临床分离的39株鲍曼不动杆菌进行药敏试验、三维试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测TEM、SHV、OXA、CTX-M、PER及VEB型BLA耐药基因，并对7株TEM基因型阳性的分离株(编号分别为HZ08、HZ09、HZ17、HZ24、HZ35、HZ37、HZ40)进行耐药基因序列分析。结果 39株鲍曼不动杆菌TEM型BLA耐药基因PCR扩增均呈阳性，其余基因PCR扩增均为阴性。7株TEM基因测序结果表明他们的基因片段全长均含1022个核苷酸，经GenBank网上同源性比较，发现这些序列与广谱酶TEM-1(GenBank注册号：AF188200)的编码区域序列相同，但在启动子区域-47位点处均有1个核苷酸发生突变(G→T)。其中HZ40株的TEM-1序列已在GenBank核酸数据库中成功注册(GenBank注册号：AY263331)。HZ08、HZ09、HZ24、HZ35、HZ37和HZ40株ESBLs均阳性，HZ17株ESBLs阴性。结论 临床分离的鲍曼不动杆菌携带伴启动子区域核苷酸突变的TEM-1亚型BLA耐药基因，此基因可以导致ESBLs表型阳性。     

阴沟肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况.方法 在2003年9月至2004年11月从解放军第98医院住院患者中分离40株阴沟肠杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析5种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、 rmtB、rmtC和rmtD)和9种AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6'')-Ⅰ b、aac(6'')-Ⅱ、ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ和aph(3'')-Ⅵ].结果 40株阴沟肠杆菌中,6种基因rmtB、aac(3)-Ⅱ、aac(6'')-Ⅰ b、ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ和aph(3'')-Ⅵ的阳性株数分别为5株(12.5%)、11株(27.5%)、29株(72.5%)、13株(32.5%)、2株(5.0%)和2株(5.0%);其余8种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为85.0%(34/40).对29株aac(6'')-Ⅰ b基因PCR阳性产物进行测序,证实有7株(24.1%)单独携带aac(6'')-Ⅰ b-cr双功能酶基因(GenBank:EF375620、EU159121),18株(62.1%)单独携带aac(6'')-Ⅰ b-Snzhou(苏州型,EU085533),3株(10.3%)同时携带aac(6'')-Ⅰ b-Suzhou及aac(6'')-Ⅰ b-cr 2种亚型,仅1株(3.4%)为aac(6'')-Ⅰ b经典型.结论 临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因阳性率较低而AMEs基因阳性率很高,至少存在5种AMEs基因.     

鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因分布研究

目的明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的耐β内酰胺类抗生素鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合酶基因(int Ⅰ 1)及氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifying enzymes,AMEs)基因分布状况。方法采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析 int Ⅰ 1及6种 AMEs 基因 aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅲ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和 aph(3′)-Ⅵ。结果鲍曼不动杆菌对头孢噻吩完全耐药,亚胺培南、美洛培南及氨基糖苷类耐药率分别为1.7%、1.7%和86.7%。60株菌中,int Ⅰ 1、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和 aph(3′)-Ⅵ基因 PCR 扩增阳性株数(%)分别为35(58.3%)、31(51.7%)、33(55.0%)、36(60.0%)、12(20.0%)和2(3.3%),aac(3)-Ⅲ均阴性。结论解放军第98医院临床分离的耐β内酰胺类鲍曼不动杆菌多重耐药严重,int Ⅰ 1及 AMEs 基因携带率均较高。     

多药耐药肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药相关基因研究

目的 了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)喹诺酮类耐药机制.方法 对一组25株MDRKP进行了染色体介导和质粒介导的耐药相关基因进行检测和分析.结果 25株中,有19种存在gyrA基因突变(76.0%);9株存在aac(6′)-Ⅰ b-Cr(36.0%);2株存在qnrA1基因(8.0%)、2株存在qnrB基因(qnrB4-like)(8.0%)、3株存在qnrS1基因(12.0%);25株均存在mdfA基因,未检出qepA基因.结论 在MDRKP中,gyrA基因突变是喹诺酮类耐药的主要原因.     

β-内酰胺酶TEM、SHV全长基因检测与应用

目的建立β-内酰胺酶TEM、SHV全长基因检测方法，并对临床分离株进行检测分析。方法检索Gen-Bank核酸库中已登录的TEM、SHV各亚型基因序列，在保守区分别设计引物、分段扩增、分段测序，并由测序仪软件拼接成全长基因序列。结果大肠埃希菌TEM-1型、TEM-2型、TEM-6型、TEM-26型、SHV-1型、SHV-2型测得序列与期望序列一致；从大肠埃希菌(苏州)、肺炎克雷伯菌(苏州)、铜绿假单胞菌(温州)、鲍氏不动杆菌(湖州)、鲁氏洛菲不动杆菌(济南)、褪色(粘质)沙雷菌(济南)、流感嗜血菌(苏州)、副流感嗜血菌(苏州)、肺炎链球菌(苏州)、淋病奈瑟球菌(常州)、MRSA(常州)、MRCNS(鄂尔多斯)等菌中检出TEM序列，并有4条TEM序列登录GenBank；从铜绿假单胞菌(温州)、鲍氏不动杆菌(湖州)等菌中检出SHV序列，并有3条SHV序列登录GenBank。结论本β-内酰胺酶的TEM、SHV全长基因检测方法在实际应用中已获得良好效果。     

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因及亲缘性分析

目的 了解解放军第98医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌（MRPA）中抗菌药物相关耐药基因存在状况及菌株亲缘性.方法 在2003年9月-2004年10月间从临床分离30株MRPA,采用PCR及序列分析的方法分析24种基因blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaPER、blaVEB、blaIMP、blaVIM、blaGES、blaCARB、blaDHA、blaMIR、aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6＇）-Ⅰ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ、aph（3＇）-Ⅵ、oprD、qacE△1-sul1、catB、cml1,采用Average法进行耐药基因聚类分析以确定菌株亲缘性.结果 30株MRPA中blaTEM、blaOXA-10群、blaCARB、aac（3）-Ⅱ、aac（6＇）-Ⅰ、aac（6＇）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、ant（2＂）-Ⅰ、qacE△1-sul1和cml1基因的阳性率分别为66.7%、3.3%、3.3%、76.7%、3.3%、33.3%、53.3%、26.7%、83.3%和3.3%,blaOXA-10群基因经序列分析确认为blaOXA-10型ESBLs,27株（90.0%）发生oprD基因缺失突变;其他基因均阴性;根据耐药基因聚类分析该30株MRPA可分4群,为医院感染所致.结论 临床分离的MRPA中至少存在10种耐药基因,oprD基因缺失突变率很高,MRPA可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行.     

20株阴沟肠杆菌耐药性及耐复方磺胺甲噁唑相关基因研究

目的 探讨临床分离的阴沟肠杆菌耐药性和耐复方磺胺甲噁唑（SMZ／TMP）相关基因存在状况。方法 采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性，采用PCR检测耐复方磺胺甲略唑相关基因sull、dfrAl和dfrA17。结果 20株菌对亚胺培南和美罗培南均敏感，对其他抗菌药物的不敏感率在25．0％～100％之间。sull、dfrA1和dfrA17基因阳性率为85．0％（17／20）、5．0％（1／21）、60．0％（12／20）。结论 阴沟肠杆菌具明显的多重耐药特征。耐复方磺胺甲口恶唑相关基因携带率很高。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因研究

目的了解大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因存在状况。方法采用PCR检测浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株21种β-内酰胺酶基因。结果检出TEM、SHV、LEN、CTX-M-1 cluster、CTX-M-9 cluster、OXA-1 cluster、OXA-10 cluster、LAP、DHA、ACT-1等β-内酰胺酶基因，并在国内外首次从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中发现LAPβ-内酰胺酶基因。结论浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因携带率高。存在新的β-内酰胺酶基因（LAP）。