阴沟肠杆菌喹诺酮类耐药qnr基因的发现

细菌对喹诺酮类药物的耐药机制主要是药物作用靶位的变异、细菌细胞膜通透性改变和／或主动外排系统过度表达导致药物在细菌体内浓度降低，这两种耐药机制由染色体介导引起，不具有水平传播性。最近Martine-Martinez L等发现了一个可编码喹诺酮耐药的多重耐药基因咿，qnr,qnr基因是由可接合质粒介导的喹诺酮类耐药基因，作用机制是其编码的蛋白质对喹诺酮类药物靶位点的保护，从而导致药物治疗失败。本文对2003年9月—2005年6月解放军98医院分离的44株阴沟肠杆菌中qnr基因进行筛查。     

二家医院肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因研究

目的了解不同医院间肺炎克雷伯菌连续分离株质粒AmpC基因存在情况和耐药性。方法应用聚合酶链反应（PCR）法对耐药的肺炎克雷伯菌连续分离株进行AmpC酶DHA和ACT-1基因检测和分析。结果PCR结果显示A院44株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性4株（9．1％）；B院25株肺炎克雷伯菌中DHA基因阳性8株（32．0％），ACT-1基因二家均为阴性，二家医院DHA基因检出率有明显差别（P〈0．05）。结论质粒型AmpC酶基因可通过转化、接合等方式转移给其他同种或不同种菌，易于传播。二家医院DHA基因检出率有明显差别，并均己有流行的迹象。     

仅黏菌素敏感鲍曼不动杆菌多重耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

近年来,仅黏菌素敏感鲍曼不动杆菌(COS-AB)引起的医院感染倍受关注。我们对2004年5月18日分离自我院烧伤病人创面分泌物的1株COS-AB(编号为HZ8999)进行多重耐药基因和整合子、转座子遗传标记检测。该分离株用生物-梅里埃公司API 20 NE鉴定菌种;用ATB~(?)PSE 5药敏试验条板微量肉汤法测定氨苄西林/舒巴坦、替卡西林、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢匹肟、亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、黏菌素、复方新诺明的敏感性,用K-B法测定氨曲南、头孢哌酮和头孢哌酮/舒巴坦的敏感性。根据CLSI 2005年版标准规定的     

杭州和湖州鲍曼不动杆菌β内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解浙江省杭州和湖州自临床分离的鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶(β-lactamases,BLA)基因及氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifying enzymes,AMEs)基因存在状况.方法在2000年7月～2004年2月间从省立同德医院和解放军第98医院各分离20株鲍曼不动杆菌,采用微量稀释法测定其对13种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析BLA基因(TEM和SHV)及AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)- Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅰ]类型.结果两地分离株多重耐药严重,但对亚胺培南和美洛培南均无耐药.杭州分离株中TEM、SHV、aac(3)-Ⅰ、aac(3)- Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅰ基因阳性率分别为45.0%、0.0%、55.0%、15.0%、35.0%和60.0%,湖州分离株分别为100.0%、30.0%、50.0%、10.0%、55.0%和65.0%.序列分析确认为TEM-1亚型广谱BLA和SHV-12亚型超广谱β内酰胺酶基因.其中98医院HZ40株的TEM-1序列及HZO2株的SHV-12序列均已登录GenBank(GenBank注册号分别为:AY263331和AY259163).结论浙江湖州临床分离的鲍曼不动杆菌中TEM、SHV基因阳性率均高于杭州分离株(Ρ分别＜0.01和＜0.05),但4种AMEs基因阳性率差别不大(Ρ均＞0.05).在鲍曼不动杆菌中发现SHV-12 及TEM-1基因分别为国际及国内首次报道.     

脑外伤并发嗜麦芽窄食单胞菌感染

目的了解医院内尤其是脑外伤患者感染嗜麦芽窄食单胞菌情况及其耐药性,以利于临床合理选用抗生素.方法用法国生物-梅里埃公司API20NE细菌鉴定试验条及ATB药敏试验条进行菌种鉴定及药敏试验.结果69株嗜麦芽窄食单胞菌中有47株(68.1%)分离自脑外伤患者呼吸道标本(痰41份、气管切开口分泌物6份);药敏试验显示其耐药率对环丙沙星最低(10.1%),其次为诺氟沙星(13.0%),再次为头孢他啶(42.0%),对伊米配能天然耐药.结论嗜麦芽窄食单胞菌主要引起呼吸道感染,尤其是脑外伤患者呼吸道特别易受感染;其多重耐药状况十分严重;对其感染的治疗,应在抗生素敏感试验的指导下进行.     

肺炎克雷伯菌对季铵盐消毒剂及复方新诺明耐药相关基因检测

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)季铵盐消毒剂及复方新诺明耐药相关基因存在状况。方法在2005年9月~2006年4月从住院患者中分离出25株肺炎克雷伯菌,采用PCR及序列分析的方法分析5种基因qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA12和dfrA17。结果25株肺炎克雷伯菌中,qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA5、dfrA12和dfrA17基因阳性株数分别为21(84.0%)、0、6(24.0%)、6(24.0%)和0;qacE△1-sul1阳性基因测序比对与已在美国核苷酸序列数据库(GenBank)中登录的qacE△1-sul1基因序列完全同源。结论临床分离的肺炎克雷伯菌中qacE△1-sul1基因阳性率很高,对复方新诺明耐药与菌株携带dfrA5、dfrA12和qacE△1-sul1基因有关。     

多重耐药肺炎克雷伯菌发现一组gyrA,parC,qnrS基因新变异型

目的研究多重耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)对喳诺酮类药物的耐药机制。方法收集2008年8月至2010年5月浙江省杭州市和湖州市6所医院共47株MDR-KPN,采用聚合酶链反应((PCR)及序列分析方法分析喳诺酮类药物作用靶位编码基因gyrA,parC和可移动遗传元件介导的喳诺酮类耐药基因[qnrA,qnrB,qnrS,aac(6'')-I b-cr, qepA ]。结果47株MDR-KPN中检出43株(91.5% gyrA突变、40株(85.1 % ) parC突变、3株(6.4% ) qnrB2,1株(2.1%)qnrB4,8株(17.0%)qnrS1,5株(10.6% ) qnrS4, 2株(4.3% ) aac (6'')-I b-cr,发现5株gyrA基因新的变异型( GenBank登录:JN811952,JN811953,JN811954,JN811955,JN811956),5株parC基因新的变异型(GenBank登录:JN817432,JN817433,IN817434,JN817435,JN817436),qnrS4为首次发现的qnrS变异型(GenBank登录号:JN836269)。结论本组菌株喳诺酮类药物耐药主要与gyrA和parC基因的喳诺酮耐药决定区(QRDR )有义突变相关,部分菌株可检出qnrB2,qnrB4,qnrS1,qnrS4,aac(6'')-I b-cr等可移动遗传元件介导的哇诺酮类耐药基因。检出qnrS4为国内外首次报道。     

SHV-71型β-内酰胺酶的酶动力学研究

目的对临床分离的鲍曼不动杆菌所产SHV-71型β-内酰胺酶的编码基因进行序列分析,研究其对多种β-内酰胺类抗生素的酶动力学参数,并观察pH、温度、底物浓度及酶抑制剂对酶活性的影响。方法PCR扩增SHV型酶的编码基因。将SHV的PCR产物与pMD18-T载体连接,测定它们的核苷酸序列,并将SHV-71型酶基因克隆至表达载体pET-41b(+),转化至宿主菌大肠埃希菌BL21(DE3)中。以IPTG诱导其表达并纯化,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达情况。用分光光度计测定SHV-71型酶对多种β-内酰胺类抗生素的动力学参数,以及pH、温度、底物浓度及酶抑制剂对酶活性的影响。结果SHV-71型酶对第一、二、三代头孢菌素类抗生素的相对最大水解速度及相对水解效率均较高,而对青霉素类和碳青霉烯类抗生素的相对最大水解速度及相对水解效率均较低。该酶在pH7.4、37℃的活性最高;底物浓度低于120μmol/L时,反应初速度随底物浓度增加而呈线性增加,底物浓度大于120μmol/L时,酶活性反而受抑;克拉维酸和三唑巴坦对SHV-71型酶有抑制作用。结论根据SHV-71型酶的酶学特点,我们推测SHV-71型酶为超广谱β-内酰胺酶。