溶血对应用套式一次聚合酶链反应技术检测血清HBV—DNA的影响

<正> 应用套式一次聚合酶链反应(套式一次PCR,简称本法)技术检测血清HBV—DNA时,有时会遇到溶血标本,溶血标本对结果是否有影响尚未见报道。本文就此进行了探讨,现报告如下。 1 材料与方法 1.1标本:取自门诊及住院病人的静脉血共69份,先分离出部分血清,将余下部分标本管置于旋涡混合器上混合片刻,使部分红细胞再悬浮。然后将余下部分标本管与先前分离出的血清一样于—20℃保     

部分医院MRSA菌耐消毒剂qacA、qacA/B基因检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）是医院感染的主要病原菌。因MRSA具有耐多药特征，已成为临床抗感染治疗的难题。为进一步了解国内部分地区MRSA菌中耐消毒剂基因家族的存在状况，我们对分离自常州、湖州、杭州、南昌4家医院131株MRSA进行了qacA、qacA／B基因检测。     

常见球菌红霉素耐药基因研究

目的 探讨常见球菌红霉素耐药基因存在状况。方法 对常见细菌国内分离株进行红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因（ermA／B／C／G／Q、errnTiB、crmF）、主动外排转运基因（mefA）检测。结果 肺炎链球菌、MRSA、MRCNS、粪肠球菌、屎肠球菌的crm基因检出率较高，其中肺炎链球菌并可检出mefA基因。结论 常见球菌国内分高株红霉素耐药的常见机制为携带红霉素梭糖体甲基化酶基因。     

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合酶基因及质粒AmpC酶基因检测

目的明确我院临床分离的阴沟肠杆菌中Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)、qacE△1-sulⅠ基因和质粒Am鄄pC酶基因(AmpCMIR、AmpCDHA)存在状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药基因。结果该20株菌呈现多重耐药,对亚胺培南和美罗培南均敏感,对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药,头孢吡肟和复方新诺明的耐药率分别为25.0%和85.0%,对氨基糖苷类抗生素的耐药率在60.0%～90.0%之间,其余的耐药率在80.0%～95.0%之间。intⅠ1、qacE△1-sulⅠ、MIR和DHA基因的阳性株数(%)分别为19株(95.0%)、17株(85.0%)、17株(85.0%)、1株(5.0%)。结论我院临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,intⅠ1、qacE△1-sulⅠ和MIR基因携带率很高。在阴沟肠杆菌中检出intⅠ1、qacE△1-sulⅠ以及质粒型AmpCMIR基因在我国大陆均属首次报道。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

携带blakpc-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌医院内感染暴发的病原学分析

目的 了解引起医院内感染暴发临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌(Kpn)KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况.方法 2008年11月至2009年7月从住院患者中分离19株泛耐药Kpn,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因.结果 19株泛耐药Kpn改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100.0%,序列分析确认均为blaKPC-2亚型,其中HZ001号菌株(原始编号HZ9871)blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225.结论 临床分离的泛耐药Kpn均携带blaKPC-2基因,而产KPC-2型碳青霉烯酶是分离菌株对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因.     

常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子标志物检测

目的了解浙江省湖州解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子存在状况。方法从临床分离鲍曼不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、阴沟肠杆菌20株、嗜麦芽窄食单胞菌19株和黄杆菌属15株(脑膜败血性黄杆菌12株、产吲哚金黄杆菌3株),采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测Ⅰ类整合子标志物 int Ⅰ 1及qacE△1 基因。结果鲍曼不动杆菌、铜绿似单胞菌、阴沟肠杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属中 int Ⅰ 1基因阳性率分别为58.3%、0、95.0%、0和0,qacE△1基因阳性率分别为83.3%、83.3%、85.0%、10.5%和0。合计144株中 int Ⅰ 1和 qacE△1阳性株数(%)分别为54株(37.5%)、94株(65.3%),Ⅰ类整合子标志物总阳性率为68.1%(98/144)。结论解放军第98医院从临床分离的常见医院感染多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子携带率相当高。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌氨基糖苷类、四环素及红霉素耐药相关基因检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantstaphylococcus aureus,MRSA)具耐多药特征,是临床抗感染治疗的难题之一。为了解MRSA中氨基糖苷类、四环素及红霉素耐药相关基因存在状况,我们对自临床分离的20株MRSA进行了氨基糖苷类耐药相关基因[aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)     

创伤患者医院内感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力基因分析

目的 了解某医院临床分离的创伤患者医院内感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)毒力基因分布状况。方法 在2004年3月~2005年6月间从住院的创伤患者中分离48株MRSA,采用PCR法检测金黄色葡萄球菌看家基因spa进行菌株分子鉴定、检测甲氧西林耐药决定基因mecA确认为MRSA、检测SCCmec(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa、Ⅳb、Ⅳc、Ⅳd、Ⅴ)进行菌株基因分型均为Ⅲ型。采用PCR及序列分析的方法分析7类共43种毒力基因即1种金黄色葡萄球菌蛋白A编码基因(spa)、2种荚膜抗原(血清型)编码基因(cap5、cap8)、4种调节基因(agr1、agr2、agr3、agr4)、16种黏附毒素编码基因(sasX、fnbA、clfA、clfB、icaA、cna、bbp、ebpS、sdrC、sdrD、sdrE、map、efb/fib、isdA、isdB、isdC)、10种细胞毒素编码基因(pvl、lukE、lukM、psm-mec、psm-α、hla、hlb、hld、hlg、hlg-2)、9种胞外酶编码基因(ssp、splB、edinA、edinB、edinC、sak、nuc、hysA、lip)和1种中毒性休克毒素编码基因(tst)。结果 在48株中,除了tst基因未检出外,其他6类基因均有检出,阳性率在75.0%~100.0%。共有28种毒力基因呈阳性,其中24种基因spa、cap8、agr1、fnbA、clfA、clfB、icaA、can、sdrC、sdrD、sdrE、efb/fib、isdA、isdB、isdC、lukE、hld、hlg-2、ssp、splB、sak、nuc、hysA和lip阳性率均为100%,4种基因sasX、pvl、psm-mec和hla阳性株数(阳性率)分别为47株(97.92%)、36株(75.00%)、46株(95.83%)、46株(95.83%);其余15种基因均阴性。毒力基因检测结果可分为5种阳性模式。结论 对创伤患者医院内感染MRSA同时检测43种毒力基因为国内首次报道。毒力基因在本组菌株中广泛存在,并且是产生致病性的重要原因。     

PCR操作体会

<正> 自从1985年聚合酶链反应(polymerase chainreaction,简称PCR)技术发明至今,此项技术在医学领域得到了广泛的应用。由于PCR具有非常鲜明的技术特点,如高灵敏度、高特异性、怕污染等,使得进行PCR操作有许多不同于一般的临床检验项目之处。几年来,我们在进行PCR操作过程中,对如何用好这一曾于1993年荣获诺贝尔化学奖的基因诊断技术感触颇深,现就一些工作体会总结如下。 1 采集标本时应注意要避免相互间的交叉污染 由于PCR的扩增放大能力十分强大,灵敏度很高,理论上只要有极微量的污染便可导致假阳性,给诊断造成混乱。因此,采样人员必须要有十分认真负责的工作态度。