成纤维细胞生长因子对组织损伤保护作用研究的方法学

成纤维细胞生长因子(FGF)是一类在体内广泛分布的生长因子,对中胚层和神经外胚层来源的组织细胞普遍具有促有丝分裂和损伤保护作用,可促进细胞的分裂、增殖和分化,并对多种组织损伤具有修复作用。本文旨在总结FGF对组织损伤保护作用研究中已用过的或可借鉴的实验方法。     

组织胚胎学教学新模式的探索与实践

多年来,组胚教学一直沿用传统的教学模式,即教师在讲台上讲,学生在下面做笔记,考试也是围绕教师所讲内容进行,学生依赖教师的讲授和总结,对课本以外的知识知之甚少,造成了学生学习被动,学习就是应付考试。这些旧教学模式对现代人才培养十分不利。在知识高速增长、信息网络发达的今天,这种旧的教学模式已经不能适应时代发展的需要。为此,在广西壮族自治区教育厅和学校领导的支持下,作为自治区重点课程和精品课程的学科,本教研室在新形势下对组织胚胎学课程的教学新模式进行了初步的探索。     

酸性成纤维细胞生长因子对顺铂肾损害保护作用的实验研究

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对顺铂(DDP)引起的体外培养的肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法通过酶消化法获取肾小管上皮细胞,接种于96孔培养板:(1)培养72h后加入一系列浓度的DDP,实验组在DDP作用12h后加入不同浓度aFGF,再培养48h后用WST-8法检测细胞存活率。(2)以DDP建立损伤模型,并在加药后12h加入一定量的aFGF,观察aFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果(1)aFGF能使DDP对肾小管上皮细胞的半数抑制浓度(IC50)升高。(2)DDP组与对照组比较,各生化和酶学指标差异均有统计学意义;而aFGF加DDP组与对照组比较,SOD、GSH-Px酶活性差异无统计学意义,MDA、NO升高差异仍有统计学意义。结论aFGF对DDP损伤的肾小管上皮细胞有明显的保护作用。     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法32只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、aFGF低剂量组(8!g/kg)和aFGF高剂量组(16!g/kg),每组8只。以肾缺血再灌注损伤为模型,通过光、电镜观察肾组织病理变化。结果aFGF能明显减轻肾组织水肿、肾小管扩张和破坏,电镜下见肾小管上皮细胞超微结构(微绒毛、线粒体、溶酶体等)损伤较轻或基本正常。结论aFGF对大鼠肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

bFGF对脑出血大鼠海马组织SOD活力、MDA含量和Bax、Bcl-2转录水平的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对大鼠脑出血模型出血侧海马组织中SOD活力、MDA含量和Bax、Bcl-2转录水平的影响。方法：采用脑内注射胶原酶建立大鼠脑出血模型,将模型鼠分为模型组、NS组和bFGF组各54只,模型组不作任何干预,bFGF组肌肉注射bFGF（8ug／kg,1次／天）,NS组肌肉注射等量生理盐水。各组分别于干预第1、3、7天取出血侧海马组织,检测SOD活力、MDA含量及Bax mRNA、Bcl-2 mRNA的表达水平。结果：与NS组、模型组比较,bFGF组出血侧海马组织第7天SOD活力明显增高、MDA含量明显下降（P〈0．05）;第3、7天BaxmRNA表达水平明显下降、Bcl-2 mRNA表达水平明显增高（P〈0．05）。结论：bFGF可通过促进氧自由基清除、降低Bax／Bcl-2基因的表达比值抑制细胞凋亡,从而保护脑出血后脑损伤。     

体外原代星形胶质细胞分离培养方法的优化

目的：通过对国内外原代培养星形胶质细胞的不同方法的比较运用,旨在优化现有的星形胶质细胞（AS）分离培养方法,建立稳定,高产的培养模式,为进一步研究奠定基础.方法：结合自有实验室条件采用优化的胰蛋白酶消化组织块分离培养法获取AS,进行形态学观察,绘制生长曲线,对培养的细胞进行GFAP免疫荧光鉴定.结果：体外培养的原代AS 7～10 d基本融合,胞体不规则,突起丰富如网状,生长曲线符合正常细胞生长特性;免疫荧光染色显示细胞纯度可达95％以上.结论：优化的胰蛋白酶消化组织块分离培养法对AS的培养更适宜自有实验室条件,可获得稳定纯度较高的AS,为中枢神经系统疾病相关研究提供了新的基础.     

改构型酸性成纤维细胞因子的分子基础与生物学效应

切除aFGF基因N端第1-27位残基得到的aFGF改构体(MaFGF),去除了aFGF的促有丝分裂活性,保留其非促分裂因子样活性,减轻了促进肿瘤生长和诱发癌症发生的潜在危险。本文对aFGF的理化特征、生物学效应以及作用机理等进行综述。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脑出血血肿周围脑组织和血浆中血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a含量的影响

目的观察大鼠脑出血后应用碱性纤维细胞因子(bFGF)对血肿周围脑组织及血浆中TXB2和6-K-PGF1a含量及比值的影响。方法采用脑内注射胶原酶建立大鼠脑出血模型,分为脑出血模型对照组和bFGF治疗组,并于脑内注射生理盐水建立假手术组对照组。每组又分为1d和3d两个时间点,bFGF治疗组应用bFGF进行治疗,检测1d和3d后血肿周围脑组织及血浆中TXB2和6-K-PGF1a含量。结果bFGF治疗组与模型对照组比较,1d时血浆中TXB2含量降低(P<0.05),1d和3d时6-K-PGF1a含量则均升高(P<0.05),TXB2/6-K-PGF1a比值1d(P<0.05)和3d(P<0.01)时均降低;bFGF治疗组与模型对照组比较,血肿周围脑组织中TXB2含量3d时较脑出血模型组升高(P<0.01),6-K-PGF1a含量无显著差异(P>0.05),TXB2/6-K-PGF1a比值1d时降低(P<0.05),3d时升高(P<0.05)。结论脑出血后血浆中TXB2和6-K-PGF1a含量的变化比血肿周围脑组织中明显;bFGF可使大鼠脑出血后血浆中TXB2含量减少,6-K-PGF1a含量增多,TXB2/6-K-PGF1a比值降低。     

改构型酸性成纤维细胞生长因子对衰老大鼠血钙的影响

目的：观察改构型酸性成纤维细胞生长因子（maFGF）对D-半乳糖致衰老大鼠的血清Ca^2＋含量的影响,探讨maFGF抗衰老的机制。方法：选择成年Wistar大鼠30只,采用皮下注射D-半乳糖建立衰老模型,衰老模型成功后随机分为衰老对照组、NS对照组和maFGF治疗组,maFGF治疗组按12μg/kg剂量肌内注射,1次/d,共14d,NS对照组肌内注射与maFGF治疗组相同容量的0.9%NaCl溶液,1次/d;衰老对照组不作任何干预。各组大鼠到相对应的时间点取血测定血清Ca^2＋含量。结果：与衰老对照组和NS对照组相比,maFGF治疗组血清Ca^2＋含量均明显降低（P〈0.01）。结论：maFGF能降低衰老大鼠血清Ca^2＋含量。     

aFGF对庆大霉素所致海马星形胶质细胞损害保护作用的实验研究

目的 研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素（GM）引起的体外培养的大鼠海马星形胶质细胞损害的保护作用。方法 大鼠海马经分离、剪切、胰蛋白酶消化,进行星形胶质细胞的体外培养。采用兔抗GFAP多克隆抗体进行免疫组织化学染色鉴定,传3代细胞接种于96 孔培养板：（1）培养24 h后加入一系列浓度的GM,再培养24h后用MTT法检测细胞存活率;（2）培养24h后在系列GM浓度的基础上加入一定浓度的aFGF,继续培养24h后用MTT法检测细胞存活率。结果 aFGF能使GM对星形胶质细胞的半数抑制浓度(IC50)升高。结论 aFGF对GM损伤的大鼠海马星形胶质细胞有一定的保护作用。