HBV DNA定量检测及临床应用的研究进展

HBV DNA是乙型肝炎病毒感染最直接和可靠的标志。本文就目前几种HBV DNA定量检测方法,它们相互之间的比较及临床应用作一综述。     

献血者中SEN病毒部分基因的克隆和序列分析

目的　了解我国献血者中是否存在SEN病毒 (SENV)感染 ,并分析SENV国内分离株的部分基因序列。方法　根据SENVORF1区保守序列设计引物 ,采用套式PCR方法 ,从献血者血浆标本中分离SENV基因片段 ,对分离的DNA片段进行基因重组和核苷酸序列分析。结果　从 32 9名献血者中分离出 6株SENV基因片段 ,其核苷酸推导氨基酸序列与SENVA～H基因型序列比较 ,同源性在 5 2 %～ 10 0 % ;系统进化树分析发现 ,分离的 6株SENV属SENV H基因型。结论　国内献血者中存在SENV H基因型感染 ,输血可能成为传播SENV途径之一。     

核酸扩增检测在血液筛查的初步应用

目的为提高血站供血安全性,探讨核酸扩增检测在血站血液筛查中的可行性。方法在酶联免疫吸附试验(ELISA)常规筛查血液的基础上,采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法,检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎抗体(抗-HCV)和人免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)1/2呈阴性的献血者微量血浆汇集池标本（20人份×50μl汇集）中的丙肝病毒（HCV）和乙肝病毒（HBV）核酸,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。结果8805份（分442个汇集池）血液被检测HCVRNA,结果有1例（0.01%）为阳性;1441份血液被检测HBVDNA,结果6例（0.4%）为阳性。从标本汇集到筛查出单份阳性献血者大约需要3d。结论ELISA结合荧光定量PCR检测微量血浆汇集池标本的方法筛查血液HBV和HCV感染是可行的,能够进一步提高输血的安全性。     

3株TT病毒的基因组结构特点及其在肝炎病人中感染情况

目的：了解TT病毒(TTV)分离株基因组结构特点及其在各型病毒性肝炎患中感染情况。方法：对49株TTV相关病毒全基因组结构进行分子进化树分析，比较从我国分离的3株TTV全基因结构与原型株的同源性，并采用巢式聚合酶链反应法(nPCR)对各型病毒性肝炎患血清中TTV DNA进行检测。结果：3株TTV分离株基因组全长为3739bp，有2个读码框架（ORFs），ORF1编码770个氨基酸，位于589-2901核苷酸；ORF2编码202个氨基酸，位于107-715核苷酸。与TTV原型株TA278的核苷酸同源性为86％-96％，ORF1氨基酸同源性为88％-97％，ORF2氨基酸同源性为79％-96％。全基因组序列分子进化树分析表明，从我国分离的3株TTV属于原型组。在180例各型病毒性肝炎患中，检出TTV DNA阳性40例，阳性率为22.2％。在甲-戊型肝炎、非甲、戊型肝炎、慢性乙型肝炎患和正常人中，TTV DNA流行率分别为24.2％（29/120），18.3％（11/60），17.8％（106/595）和19.8％（19/96），4组无显性差异。结论：从我国分离的3株TTV的全基因结构特点与原型株相似，各型病毒性肝炎、慢性乙型肝炎和正常人群TTV DNA流行率相对较高。     

病毒性肝炎患者抗肝抗原自身抗体的检测与分析

目的分析病毒性肝炎患者中几种抗肝抗原自身抗体的存在状况和临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测941例病毒性肝炎患者和32例自身免疫性肝病患者血清中肝肾微粒抗体Ⅰ型(LKM-1)、肝细胞胞溶质抗原Ⅰ型(LC-1)、可溶性肝抗原(SLA)等自身抗体。结果 941例病毒性肝炎患者中,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为LKM-1 0.9%(9/941)、LC-1 0.2%(2/941)、SLA 0.0%(0/941),其中153例丙型肝炎患者中,抗肝抗原自身抗体检测阳性率分别为LKM-1 4.5%(7/153)、LC-1 1.3%(2/153)、SLA 0%(0/153);552例乙型肝炎患者中,仅检测出2例(0.4%)LKM-1阳性,在甲型肝炎、戊型肝炎和丁型肝炎中未检测出抗肝抗原自身抗体。在32例自身免疫性肝病患者中,抗肝抗原抗体LKM-1、LC-1和SLA的检出率分别为9.4%、3.1%和9.4%,其中在11例自身免疫性肝炎中,LKM-1、LC-1和SLA阳性率分别为27.3%、9.1%和18.2%。病毒性肝炎患者抗肝抗原自身抗体检出率低,与自身免疫性肝病患者比较,LKM-1和SLA差异有统计学意义(P<0.01)。结论少数丙型病毒性肝炎患者血清中存在多种抗肝抗原自身抗体,对病毒性肝炎患者进行包括抗肝抗原在内的自身抗体检测有助于病毒性肝炎合并自身免疫性肝病的诊断。     

散发性戊型病毒性肝炎71例临床研究

目的探讨散发性戊型病毒性肝炎的临床特征。方法回顾性分析了71例戊型病毒性肝炎患者的临床和流行病学资料,分别比较老年组与非老年组、单纯戊型肝炎与重叠感染组生化指标。结果戊型肝炎呈全年散在发病;男性多于女性,男女比例为2.6:1,年龄分布在11-79岁,以青壮年高发;老年组患者与其他两组非老年组患者比较,TBIL峰值、ALT峰值差异有统计学意义(P0.05),ALB低值、AST峰值差异无统计学意义(P0.05),而老年组GGT峰值与11-40岁年龄组差别无统计学意义(P0.05),与41-60岁年龄组差别有统计学意义((P0.05);单纯戊型肝炎与重叠乙肝感染组比较,TBIL峰值、GGT峰值、ALB低值、ALT峰值、AST峰值差别无统计学意义(P0.05);黄疸型67例(94.4%),重型肝炎5例,其中3例重叠乙肝感染,死亡1例,病危出院1例,转院3例。结论戊型病毒性肝炎呈全年散在发病,以青壮年和男性多见,以急性黄疸型为主,大多数患者预后良好,但有部分患者病情较重,重叠乙型肝炎感染及老年患者是造成戊型重型肝炎的危险因素。     

HBV抗原基因修饰树突状细胞疫苗体外抗HBV的作用

目的：探讨腺病毒载体介导HBV抗原基因修饰的树突状细胞(DCs)诱导抗HBV特异性CTL反应方法：制备携带HBsAg、HBeAg和HBcAg基因的3种重组腺病毒Ad-HBs,Ad-HBe,Ad- HBc,分别转染自脐带血体外诱导培养的DCs,观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达;混合淋巴细胞反应(MLR)测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力;乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG_222．1．5靶细胞的杀伤能力．结果：腺病毒载体能够高效介导HBV三个抗原基因在DCs中表达,90%以上DCs表达示踪基因EGFP,且DCs细胞形态完整：感染后72 h HBsAg和HBeAg含量分别为0．919和0．328(吸光度A值)．MLR实验显示,HBV抗原基因修饰DCs仍然具有刺激同种异体T细胞的增殖能力,Ad-HBs转染DCs组、Ad-HBe转染DCs组、Ad-HBc转染DCs组和未转染DCs组之间刺激T细胞的增殖水平无明显差异(F=1．194,P=0．389);在E：T比例为2：1,10：1和25：1时,Ad-HBs转染DC组、Ad-HBe转染DCs组和Ad-HBc转染DCs组对HepG_222．1．5细胞的杀伤率均明显高于未转染DCs组(P＜0．001);以Ad- HBc转染DC组对HepG_222．1．5细胞杀伤率最高．结论：HBV抗原基因修饰DCs疫苗具有刺激同种异体T细胞增殖能力,同时能增强抗HBV特异性CTL反应的能力,可能发展为一种新型抗病毒疫苗．     

广东省HIV-1流行株的基因亚型分析

目的　了解广东省人免疫缺陷病毒 - 1(HIV - 1)感染毒株的亚型分布情况。方法　用巢式聚合酶链反应 (nPCR)技术 ,对 1998年初至 2 0 0 2年 2月间广东省内 13例HIV - 1感染者血标本进行膜蛋白基因 (env)部分片段扩增 ,将扩增产物克隆至T载体上并进行序列分析。结果　在 11例扩增成功的血标本中 ,B亚型 6例 ,其中 3例来自献血人员 ,1例为性乱人员和 2例为吸毒人员 ;E亚型 5例 ,其中 3例为性乱人员 ,1例来自吸毒人员 ,1例来自献血人员。 5例E亚型基因离散率为 ( 6 6± 3 8) % ;6例B亚型基因基因离散率为 ( 7 6± 1 9) % ,与来自泰国和国内的B亚型代表株最接近。结论　广东省至少有HIV - 1B和E亚型毒株流行 ,且分布广泛 ,来源复杂     

深圳市SEN病毒D和H亚型感染的检测与分析

目的　了解深圳市一种新的单链DNA病毒 (SENV)的感染流行状况。方法　以SENV读码框架 1区 (ORF1)核苷酸序列设计引物建立巢式聚合酶链反应 (nPCR)方法。采用多重nPCR对6 0 1份来自不同人群血标本进行SENV DNA(D和H亚型 )检测 ,并对所分离的病毒部分基因进行克隆后测序分析。结果　在乙型肝炎患者、丙型肝炎患者、血液透析患者和吸毒人群SENVDNA阳性率分别为 2 7.8%、2 2 .2 %、2 6 .9%和 39.3% ;在献血人群中 ,体检不合格献血者和丙氨酸转氨酶 (ALT)异常升高献血者SENV阳性率分别为 2 8.1%和 31.3% ,均明显高于体检合格的献血者人群 (15 .1% )的感染率(χ2 =8.2 9,P <0 .0 1和χ2 =6 .0 3,P <0 .0 1)。 6例来自不同人群的SENV D亚型分离株部分核苷酸序列与标准株变异 <6 .8% ;4例来自不同人群SENV H亚型分离株部分核苷酸序列与标准株核苷酸最大变异为 13.5 %。结论　在深圳市高危人群 (献血和吸毒人群及肝炎患者等 )中SENV感染均广泛存在     

乙肝表面抗原快速检测在无偿献血血源筛查中的应用

深圳市无偿献血开展较早 ,目前街头流动献血车上的公民无偿献血是血液的主要来源 ,为尽量减少无偿献血中不合格血液的采集 ,减少不必要的浪费。1998年 1月起 ,笔者先后采用乳胶凝集法和金标试纸条法对街头流动献血车上无偿献血者进行现场 HBs Ag的快速筛查 ,取得较好的效果。材料与方法1　调查对象　 1997年 9月～ 1999年 12月的本站所有无偿献血者。接受 HBs Ag筛查标准 :首次献血或献血间隔超过半年以上 ,未接受过乙肝疫苗注射者。参加无偿献血 885 6 9人次 ,实际筛查为 5 84 96人次。2　检测试剂　 HBs Ag标准品购于北京生物制品鉴定…