Y染色体特异STR位点应用于无创伤性产前胎儿遗传信息的研究

目的 建立利用孕妇血清进行无创伤性产前胎儿分子遗传信息分析的方法。方法 采集53名11～36孕周的孕妇的血清,利用血清中胎儿DNA,采用”Y-PLEX 6”试剂盒,复合扩增DYS393、DYS19、DYS389 Ⅱ、DYS390、DYS391和DYS385等6个Y-STR位点,PCR产物经基因测序仪电泳检测,用相关软件分析Y-STR基因型。结果 ①29名分娩出生证实为男婴的孕妇,均检测出特异性Y-STR等位基因。检测的6个Y-STR位点,以DYS393位点的检出率最高(29/29);其次是DYS19位点,检出率为62.07％(18/29);再次是DYS390位点,检出率为34.48％(10/29);其余的DYS389 Ⅱ、DYS391和DYS385位点的检出率则较低。②24名分娩出生证实为女婴的孕妇,均未检测出特异性Y-STR等位基因。③根据DYS393位点是否检测出特异性等位基因,以及该基因波峰的高度和波峰面积值,鉴定胎儿性别的准确率达100％。④29名妊娠男婴的孕妇的血清样本,检测出的Y-STR等位基因与“丈夫”的相一致。结论 本研究建立的无创伤性Y-STR分子遗传分析方法,具有多态性丰富、灵敏度高、特异性强等特点,提高了无创伤性产前胎儿性别遗传鉴定的准确性,同时为解决妊娠男婴的亲子鉴定提供了理论依据,具有广泛的应用前景。     

下腔静脉支架置入治疗Budd-chiari综合征围手术期的护理

Ｂｕｄｄ－ｃｈｉａｒｉ综合征行下腔静脉支架置入治疗，是近年来国内开展的一项新技术。我院自１９９２年至今共施行该手术３５例，效果优良。本文仅就有关围手术期的护理方面谈点体会：１术前护理：（１）心理护理；（２）常规护理；（３）注意肝肾功能损害，应注意观察有无黄疸、出血及腹水消失、尿量的多少等情况，为医生制定术后治疗方案提供可靠依据。２术后护理：（１）严密监测生命体征变化，发现异常及时报告医生。（２）为防血柱形成，常规应用抗凝治疗，注意观察有无皮下出血、瘀斑等出血倾向。（３）做好伤口护理，通过观察下肢有无浮肿、足背动脉搏动的强弱等，了解伤口局部包扎的松紧度，如有异常及时处理。（４）术后适当限制活动，平卧休息２４小时，减少活动１周，以防支架脱落。     

下腔静脉支架置入治疗Budd—chiari综合征围手术期的护理

Ｂｕｄｄ－ｃｈｉａｒｉ综合征行下腔静脉支架置入治疗，是近年来国内开展的一项新技术。我院自１９９２年至今共施行该手术３５例，效果优良。本文仅就有关围手术期的护理方面谈点体会；１．术前护理：（１）心理护理；（２）常规护理；（３）注意肝肾功能损害，应注意观察有无黄疸，出血及腹水消失，尿量的多少等情况，为医生制定术后治疗方案提供可靠依据。２．术后护理；（１）严密监测生命体征变化，发现异常及时报告医生。（３     

225例阑尾炎术后切口感染调查分析

阑尾切除术后切口感染是阑尾炎并穿孔、坏疽性阑尾炎术后的主要并发症。为了解阑尾炎术后切口感染率,笔者对2009年普外科住院阑尾炎手术治疗的患者进行了目标性监测,现将报道如下。     

HLA-Cw基因全长序列分子克隆及测序方法的建立

目的 建立可靠的HLA-Cw基因全长序列的分子克隆和测序技术.方法 设计合成HLA-Cw基因全长序列PCR引物和探索PCR反应体系,采用长距离PCR技术,扩增HLA-Cw基因非翻泽区(untranslated region,5'-UTR)区、8个外显子、7个内含子和3'-UTR区,全长约4.5 kb.PCR产物纯化后进行分子克隆,筛选阳性克隆,提取质粒DNA,采用自行设计的测序引物进行全长双向测序.12份已经AlleleSEQR HLA-Cw测序分型试剂盒进行PCR产物直接测序、基因型已知的样本,分别用TaKaRa LATaq酶和Stratagene Pfu Taq DNA聚合酶进行HLA-Cw基因全长扩增,以及PCR产物分子克隆和序列测定,克隆测序结果分别与PCR产物直接测序结果进行对比分析.结果 PCR扩增获得了特异性目的 片段,测序获得了HLA-Cw基因-962～3576位碱基全长序列.克隆测序结果的对比表明,Pfu酶保真性高于LA Taq酶.比较本文测定的Cw*010201与Cw*07020101等位基因序列,在5'上游-962～-284位碱基区域存在11个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)和2个插入(或)缺失多态性位点;3'-UTR下游3067～3576位碱基区域存在11个SNPs和1个插入(或)缺失.结论 建立了HLA-Cw基因全长序列分子克隆及测序方法,在HLA-Cw基因全长序列分子多态性及表达调控等研究领域,具有广泛应用前景.     

α地中海贫血HKαα／--SEA基因型家系分析

目的：研究巢式 PCR 结合家系分析的方法对罕见α地中海贫血（α地贫）的诊断价值。方法对先证者及12名家系成员,采用血常规分析、红细胞脆性及血红蛋白电泳进行地贫筛查;采用 PCR-反向斑点杂交（ PCR-reverse dot blot , RDB ）技术诊断非缺失α地贫点突变和17种β地贫基因点突变;采用跨越断裂点聚合酶链反应（ Gap-PCR ）进行缺失型α地贫基因型分析;采用巢式 PCR 检测 HKαα基因型;绘制α地贫基因遗传图谱。结果12例家系成员中,4例 MCV、MCH、红细胞脆性低于正常参考值,8例血液学指标均无异常;12例血红蛋白电泳均正常;12例家系成员中--SEA／αα和αα／αα基因型各2例, HKαα／αα基因型6例, HKαα／--SEA基因型2例;均无17种常见β地贫和3种常见非缺失α地贫。结论巢式PCR 结合家系分析方法是发现罕见地贫基因型并减少HKαα地贫的漏诊误诊的重要方法。     

一例外伤后行髂外动脉重建术病人的护理

髂外动脉起始部位置较深,由钝器引起损伤罕见。我科于１９９７年７月收治了一名被铁钝器撞击伤造成血管壁严重挫伤、内膜多处断裂剥脱致管腔闭塞的患者,以髂内动脉远端与髂外动脉远端行血管重建,保证下肢血供。手术操作简便,避免了人造血管植入的并发症。现将护理报告如下。１　病例介绍患者男,２０岁,因左下腹被铁钝器撞击伤,下肢功能障碍８ｈ急症入院。患者意识清,呈焦虑面容,心理负担重,担心终生残废。查体左髂窝有直径５ｃｍ圆形皮肤挫伤,有皮下瘀血,左下腹膜刺激征阳性,直肠指检无异常,左下肢皮肤苍白,皮温低,无血运,…     

基于二代测序的HLA-Ⅱ类等位基因多态性研究及等位基因丢失防范策略

目的：研究二代测序技术（NGS）检测深圳地区随机健康无关汉族人群HLA-DRB1、DQB1、DQA1、DRB3、DRB4、DRB5、DPA1、DPB1等位基因多态性的精确性,探讨HLA-DRB1等位基因丢失的原因及室内关键质控体系建立策略。方法：采用Mi Seq DxTM NGS平台对1 012例样本完成HLA-II类等位基因分型。对质控体系软件提示的疑难样本和HLA-DRB1纯合子样本采用PCR-SSOP法或PCR-SBT法进行确认。结果：检出HLA-DRB1、DRB3、DRB4、DRB5、DQA1、DQB1、DPA1、DPB1等位基因分别有45、7、5、7、17、21、10、27种。常见等位基因（频率>10%）有HLA-DRB1*09:01(17.09%)、15:01(10.72%);DRB3*02:02(25.99%)、03:01(10.18%);DRB4*01:03(36.46%);DRB5*01:01(15.42%);DQA1*01:02(20.01%)、03:02(17.19%);DQB1*03:01(19.47%)、03:03(17.98%)、05:02(11.66...     

广东籍鼻咽癌患者与HLA等位基因相关性研究

目的 探讨广东籍鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者的人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)-A、B和DRB1等位基因多态性与鼻咽癌之间关系.方法 采用聚合酶链反应测序分型法(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCR-SBT),对35例广东籍NPC患者和119例健康对照的HLA-A、B、DRB1位点的等位基因进行序列分型及基因多态性分析.结果 HLA-A*26:01(0.0857 vs 0.0210,P＜0.05,OR=4.72)、HLA-B*40∶01(0.2571 vs 0.1639,P＜0.05,OR=2.17)和B*46∶01(0.2857 vs 0.1639,P＜0.05,OR=2.74)基因频率在NPC组显著高于正常对照组.HLA-A*11∶01(0.2143 vs 0.3193,P＜0.05,OR=0.42)和HLA-DRB1*03∶01(0 vs 0.0588,P＜0.05,OR=0)基因频率在NPC组低于正常对照组.结论 HLA-A*26∶01,B*40∶01和B*46∶01等位基因可能与广东籍人群患NPC的机会呈正相关性,HLA-A*11∶01等位基因与NPC有负相关性.     

中国人群HLA-DRB1＊1454等位基因和HLA-DRB1第3外显子鉴定意义

目的:在中国人群中鉴定人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)DRB11454等位基因,分析供受者HLA-DRB1第3外显子DNA序列信息对器官移植、细胞移植及人类遗传学研究的重要现实意义.方法:应用聚合酶链反应-直接测序分型方法对58例等待造血干细胞移植供受者进行人类白细胞抗原测序分型,1 268例广东地区随机健康供者采用聚合酶链式反应-序列特异寡核苷酸探针反向杂交法进行HLA-DRB1中高分辨基因分型,部分模棱两可结果采用聚合酶链式反应-序列特异引物PCR-SSPHLA-DRB14高分辨方法分型法.结果:在1 268例广东地区随机健康人群中检出HLA-DRB11403,1406,1410,1412,1418,1425和1454等位基因,HLA-DRB1401/1434/1454等位基因模棱两可结果的8例样本被确认为HLA-DRB11454等位基因,DRB11454等位基因可能是广东人群最为常见的HLA-DRB114 基因. 中国人群HLA-DRB114第3外显子存在多态性.结论:中国人群HLA-DRB11454等位基因确认了DRB1等位基因第3外显子多态性的存在,进一步明确了开展中国汉族人群及少数民族HLA-DRB1第3外显子检测的意义.