全文获取类型
收费全文 | 135篇 |
免费 | 6篇 |
国内免费 | 42篇 |
专业分类
妇产科学 | 16篇 |
基础医学 | 19篇 |
临床医学 | 21篇 |
内科学 | 16篇 |
神经病学 | 5篇 |
外科学 | 17篇 |
综合类 | 43篇 |
预防医学 | 7篇 |
药学 | 2篇 |
肿瘤学 | 37篇 |
出版年
2022年 | 1篇 |
2016年 | 2篇 |
2015年 | 1篇 |
2014年 | 1篇 |
2013年 | 6篇 |
2012年 | 1篇 |
2011年 | 4篇 |
2010年 | 8篇 |
2009年 | 11篇 |
2008年 | 6篇 |
2007年 | 8篇 |
2006年 | 17篇 |
2005年 | 25篇 |
2004年 | 23篇 |
2003年 | 33篇 |
2002年 | 14篇 |
2001年 | 9篇 |
2000年 | 5篇 |
1999年 | 4篇 |
1998年 | 3篇 |
1997年 | 1篇 |
排序方式: 共有183条查询结果,搜索用时 15 毫秒
71.
逆转录病毒载体介导双自杀基因治疗肝细胞肝癌的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
我们将 2种最重要的自杀基因TK与CD基因整合在一起 ,以脂质体和逆转录病毒为载体 ,介导转入肝癌细胞HCC 990 3[1] ,最大限度地消除肿瘤细胞对治疗药物的耐药性 ;同时 ,降低前药的毒副作用。1 材料与方法 :质粒pWZLneoCDglyTK、pWZLneoTK由澳大利亚布里斯班皇家医院基因治疗中心惠赠。HCC 990 3肝癌细胞系由本课题组建立。CD与TK基因转染PA317包装细胞和肝癌细胞系HCC 990 3,脂质体介导的CD与TK基因转染PA317包装细胞。测定逆转录病毒滴度 ,逆转录病毒转染HCC 990 3细胞 ,RT PCR测… 相似文献
72.
端粒及端粒酶研究的新进展 总被引:3,自引:0,他引:3
端粒是染色体端高度保守的重复核苷酸序列,对染色体具有保护作用,随着细胞分裂的不断进行,端粒逐渐缩短,减少到一定程度,细胞就趋向衰亡,被认为是细胞有丝分裂的“生物钟”端粒酶是影响端粒长度的主要因素,以其RNA为模板,向端粒末端添加(TAGGG)n序列,使端粒延长,从而延长细胞的寿命甚至使其永生,端粒酶的功能区主要在hTR的44-203核苷酸区,3p和10p上存在着编码调整端粒酶的基因,Estl可能是 相似文献
73.
目的 探讨TK与CD双自杀基因对肝癌细胞的杀伤作用及旁观者效应,并在前药用量、杀伤效力及旁观者效应强弱等方面,与单自杀基因比较。方法 将TK与CD双自杀基因导入肝细胞肝癌细胞系HCC-9903,用不同浓度更昔洛韦(GCV)及5氟胞嘧啶(5FC)、不同混育比例及不同混育时间分别作用于细胞,观察在这些条件下的杀伤效应及旁观者效应。结果 GCV与5FC的有效浓度范围分别是大于10^-2μg/ml及大于2mmol/L,混育96h杀伤作用明显高于24h。HCC-9903/TK CD细胞占5%以上,即可观察到旁观者效应。结论 以脂质体介导成功将双自杀基因TK与CD感染肝细胞肝癌细胞系HCC-9903,双自杀基因具有强大杀伤作用,较单自杀基因更为明显,其前药用量减少,降低了药物的毒副作用,旁观者效应更为强大。其杀伤作用与前药浓度、混育比例及混育时间呈正相关。 相似文献
74.
目的:探讨小鼠免疫共刺激信号B7-2转化小鼠淋巴瘤细胞株EL4后,转化细胞介导的免疫作用.方法:(1)提取经LPS刺激后的小鼠脾细胞内的总RNA,以此为模板进行反转录PCR扩增,获得特异性的小鼠mB7-2 cDNA的产物并测序.将扩增的mB7-2 cDNA片段克隆到逆转录病毒表达载体pLXSN中,然后包装到PA317细胞中;(2)收集并浓缩PA317/mB7-2产生的病毒上清,感染EL4细胞,获得EL4/mB7-2;(3)体外进行混合淋巴细胞培养,检测EL4/mB7-2刺激小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-2情况.结果:成功得到了表达载体pLXSN-mB7-2和转基因的EL4/mB7-2.在体外,EL4/mB7-2刺激小鼠脾脏T淋巴细胞分泌的IL-2的量明显超过野生型EL-4细胞.结论:mB7-2基因转染EL-4细胞可活化T细胞分泌IL-2,为今后研究比较共刺激信号在肿瘤免疫、自身免疫病发病机制以及器官移植等方面的作用奠定基础. 相似文献
75.
76.
目的探讨白细胞介素12B(IL 12B)基因1188A/C位点多态性与山东汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法采用PCR RFLP法对324例COPD患者和389例健康人IL 12B基因1188A/C位点多态性进行分型,对等位基因及基因型分布进行统计学分析。结果IL 12B基因1188A/C多态位点AA、AC、CC基因型频率在病例组中分别为0.333?3、0.478?4和0.188?3,在对照组中分别为0.357?3、0.475?6和0.167?1,A和C等位基因型的频率在病例组中分别为0.572?5和0.427?5,在对照组分别为0.595?1和0.404?9,该位点基因型和等位基因型分布在病例组与对照组P值分别为0.689,0.389,差异均无统计学意义。结论IL 12B基因1188A/C位点多态性与山东汉族人群COPD发生无明显相关性。 相似文献
77.
利用RNAi技术抑制Bcl 2基因表达增强肺腺癌A549细胞放射敏感性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的利用RNAi技术抑制Bcl 2基因的表达,观察其对肺腺癌A549细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法构建Bcl 2基因的干扰质粒pBcl 2 siRNA,稳定转染人肺腺癌A549细胞,同时设立转染无意义链组、空载体组和未转染组。采用Real time RT PCR和Western blot方法, 观察Bcl 2基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。采用流式细胞术和克隆形成方法,检测RNA干扰对A549细胞放射敏感性的影响。结果成功构建bcl 2 siRNA质粒,转染A549细胞,获得稳定转染细胞株A549/Bcl2 Ins;Bcl 2mRNA、 Bcl 2蛋白表达明显降低;A549/Bcl2 Ins凋亡率[(10.11±0.92)%]明显高于对照组,6Gy X线照射后凋亡率[(28.81±1.10)%]明显高于对照组及未照射组;A549/Bcl2 Ins的D0和Dq值分别为1.399和1.298,明显低于转染无意义序列细胞株A549/Bcl2 Neg(1.695和2.480)、转染空载体细胞株A549/SD (1.706和2.227)和空白对照细胞A549(1.816和2.777)。结论RNAi技术可以有效抑制肺腺癌A549细胞Bcl 2基因的表达,增强A549细胞对X线的放射敏感性。 相似文献
78.
目的 探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药性(MDR)的逆转作用。方法 以人MDR-1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA-DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK-N-SH。应用流式细胞术、RT-PCR、MTT等方法分别检测反义PNA的转染效率、转染前后细胞P-糖蛋白(P-gp)、MDR-1基因mRNA的表达以及对化疗药物的敏感性。结果 荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,且呈浓度依赖性。两反义PNA均使SK-N-SH细胞P-gp表达明显降低,阿霉素和长春新碱对细胞的半数抑制浓度值明显下降,MDR-1 mRNA表达轻度降低。而PNA1转染对照组C6/adr细胞后,上述变化不明显。结论 PNA-DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取.特异序列的反义PNA可有效逆转神经母细胞瘤的MDR特性。 相似文献
79.
目的:研究树突状细胞(DC)的体外培养扩增及诱导特异性的抗肿瘤免疫反应。方法:使用mGM-CSF加mIL-4培养诱导骨髓细胞分化,采用反复冻融法制备L7212白血病细胞的冻融抗原(TAA),在DC培养的第3天加入TAA,将TAA冲击致敏的DC与T淋巴细胞共培养,获得肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),采用MTT法检测CTL对L7212细胞的杀伤作用及其对野生型L7212细胞再攻击的免疫保护作用。结果:MTT检测发现CTL对L7212细胞有特异性杀伤抑制作用,L7212抗原冲击致敏的DC能显著提高和延长野生型L7212细胞再攻击小鼠的生存率和存活期。结论:mGM-CSF和mIL-4配伍可有效地从小鼠骨髓细胞中诱导出大量的成熟的功能性DC,L7212白血病TAA冲击致敏的DC可诱导机体产生较强的抗肿瘤免疫反应。 相似文献
80.
外源野生型p53基因对人胆囊癌GBC-SD细胞生长的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察外源野生型p53(wtp53)基因对人胆囊癌GBC-SD细胞生长的抑制作用。方法用脂质体介导的转染技术,将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53导入GBC—SD细胞。用聚合酶链反应(PCR)和逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)证实外源p53基因的整合与表达;用细胞计数和克隆形成实验反映细胞增殖状况;用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果转化细胞系中存在外源p53基因的整合与表达。稳定转染wtp53基因的GBC-SD-wtp53细胞,体外生长速率明显减慢;克隆形成率仅为3.2%,显著低于对照组GBC-SD-mutp53(28%)和亲本GBC-SD细胞 (29%,P<0.01);G0/G1期、S期、G2/M期比例(%)分别为(66.12±4.2、32.87±2.15、1.01± 0.37),与对照组(46.20±5.1、30.78±2.92、23.02±1.87)及亲本细胞(41.25±3.2、40.03±2.09、 18.72±1.05)相比,G0/G1期细胞比例明显增加,G2/M期细胞比例显著减少(P<0.01)。结论外源野生型p53基因的表达能有效抑制人胆囊癌GBC-SD细胞的体外生长。 相似文献