VP22增强慢病毒介导的自杀基因治疗抑制人卵巢癌裸鼠腹腔种植瘤生长的研究

目的:探讨单纯疱疹病毒壳膜蛋白VP22的细胞间传递作用促进HSV-TK/GCV(单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦)系统对卵巢癌腹腔移植瘤的杀伤效应。方法:将慢病毒包装质粒、包膜质粒、转移载体质粒采用磷酸钙沉淀法共转染包装细胞293T,收集病毒上清,并建立人上皮性卵巢癌(3AO)细胞株腹腔移植瘤模型。单药组分为TK+生理盐水(NS)组、VP22-TK+NS组、NS+NS组,分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK或NS1ml,继而腹腔注射NS;联合用药组分为TK+GCV组、VP22-TK+GCV组、NS+GCV组分别腹腔注射慢病毒TK、VP22-TK及NS,24h后腹腔注射GCV治疗。每组裸小鼠均为5只。观察各组裸鼠的生存时间及慢病毒的毒性作用。结果:平均生存时间TK+NS组、VP2-TK+NS组、NS+NS组、NS+GCV组、TK+GCV组、VP2-TK+GCV组分别为18.3±2.7d、18.4±1.9d,17.2±1.3d、18.7±1.9d、21±4d和46±22d,6组差异有显著性(χ2=24.81,P=0.002);并且VP2-TK+GCV组平均生存时间较TK+GCV组裸鼠明显延长(χ2=7.42,P=0.006)。结论:VP22介导的自杀基因产物的细胞间扩散作用可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

紫杉醇奥曲肽偶合物对A549裸鼠移植瘤的靶向治疗研究

目的 研究生长抑素类似物奥曲肽(OCT)与紫杉醇(FTX)的偶合物对人肺腺癌细胞株A549裸鼠移植瘤的靶向治疗作用.方法 构建1分子紫杉醇-1分子奥曲肽偶合物(PTX-OCT)和2分子紫杉醇-1分子奥曲肽偶合物(2PTX-OCT),建立裸鼠腋部皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为8组.在l、7、21 d尾静脉分别注射150 nmol/kg PTX-OCT;2FTX-OCT;OCT、PTX混合物(OP);OCT;PTX;300 nmol/kg PTX(2PTX)和2PTX-OCT[2(2PTX-OCT)].测各组小鼠体重及肿瘤体积;计算肿瘤倍增时间;眼内眦静脉取血测每组小鼠白细胞数量;组织切片HE染色及核仁区银染(AgNOR)观察肿瘤细胞生长情况;DNA梯度法检测细胞凋亡;RT-PCR法测肿瘤细胞生长抑素受体(SSTR)1至5亚型(SSTRI-SSTR5)mRNA表达情况;免疫组化SP法检测肿瘤微血管密度(MVD)以及生长抑素受体2和5亚型表达情况.结果 2PTX-OCT与2(2PTX-OCT)处理组在3次给药后与对照组相比:肿瘤生长显著抑制(均P<0.01);肿瘤倍增时间延长(均P<0.01).PTX与2PTX-OCT处理组相比,在每次给药后5 d裸鼠体重减轻差异有统计学意义(P<0.05);PTX与2PTX组的白细胞总数在26 d降到最低,与对照组、2PTX-OCT组及2(2VTX-OCT)组相比差异均有统计学意义(均P<0.05).2PTX.OCT组及2(2PTX-OCT)组MVD均明显少于对照组(均P相似文献   

p53基因转染对卵巢癌MDR细胞药物敏感性及恶性表型的影响

研究 ｐ５３基因导入已知内源背景的肿瘤 ＭＤＲ细胞所致的恶性表型和ＭＤＲ表型的改变及两者的关系。方法：用磷酸钙沉淀法将含有野生型及全长反义 ｐ５３ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＤＷｐ５３及 ｐＤＡｐ５３转染病毒包装细胞 ＰＡ３１７,测定病毒滴度。用此病毒感染卵巢癌多药耐药细胞株Ａ２７８０／ＡＤＭ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定,检测转导基因后细胞株的恶性度、多药耐药性等情况。结果：野生型及反义全长ｐ５３ｃＤＮＡ均转入 ＰＡ３１７细胞获得效价为（１－ １．５） Ｘ１０５ＣＦＵ／ｍｌ的前病毒,以此感染卵巢癌多药耐药细胞株Ａ２７８０／ＡＤＭ,Ｓｏｕｔｈｅｍ Ｂｌｏｔ证实ｐ５３基因导入该细胞并整合到基因组ＤＮＡ中,进一步测试观察到：①导入野生型ｐ５３基因的Ａ２７８０／ＡＤＭ细胞生长被抑制、恶性度降低,细胞形态和生长曲线改变,软琼脂集落形成率及裸鼠接种成瘤率降低;②细胞多药耐药性减弱,对ＡＤＭ耐药性下降,Ｐ－ｇｐ表达降低;③反义ｐ５３的导入也对Ａ２７８０／ＡＤＭ恶性度有一定的影响;④野生型ｐ５３导致的ＭＤＲ细胞恶性表型与ＭＤＲ水平的降低似有平行关系。结论：ｐ５３基因对肿瘤细胞ｍｄｒ－ １基因的表达可能起调控作用,ｐ５３发生突变的 Ｍ?     

四种Notch配体信号功能活性比较

目的 观察四种Notch配体的功能活性．探讨其在Notch信号传导机制中的作用。方法以Notch1—CHO和Notch2—CHO作为宿主细胞，瞬时转染报告质粒TP1，分别加入转染有不同Notch配体Delta1、Jagged1、Jagged2、Delta4的CHO细胞及未转染CHO细胞，使Notch分子与其配体充分结合，加入发光底物PGL100，用Lumat测定发光情况，由此观察并比较各配体对上述两种宿主细胞的信号功能活性水平。结果 各配体与Notch1结合后均能引起荧光素酶活性增高，尤其以Jagged2—CHO、Delta4—CHO1—4、Delta4—CHO1—5为著，而Deltal—CHO、Jagged1—CHO引起的活性增加程度较低，尚不能确定其信号功能活性；各配体与Notch2结合后都有较高的信号功能活性，其反应强于与Notch1的作用。结论 4种配体与Notch2作用后均能使荧光素酶活性增加多倍，故有较强的信号功能活性。     

小剂量金喜素与顺铂、VP16及5-FU对人卵巢癌细胞株生长抑制作用的实验研究

目的 :探讨小剂量国产盐酸拓扑替康 (金喜素 )与顺铂 (cDDP)、足叶乙甙(VP16 )及 5 -氟尿嘧啶 (5 -FU)对人卵巢癌细胞株 3AO细胞生长抑制的作用。方法 :采用MTT法观察上述药物单用及联合使用对 3AO细胞生长的影响 ,并评价药物的联合作用。结果 :相当于临床用药浓度的金喜素 (80 0ng/ml)及其半量浓度 (40 0ng/ml)与cDDP、5 -FU或VP16联合应用对 3AO细胞具有显著的协同生长抑制作用 ,较各药单用组抑制率显著提高。半量金喜素联用即可达到全量联用时的抑制效果。结论 :小剂量金喜素与cDDP、5-FU或VP16具有协同抑制 3AO细胞生长的作用 ,可为临床小剂量应用提供参考     

慢病毒介导的双自杀基因对T淋巴细胞杀伤作用的实验研究

目的:探讨慢病毒介导的双自杀基因对T淋巴细胞的杀伤作用。方法:在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMVΔ8.2、包膜基因pCMV.VSVG、目的基因pHR'CS.GFP或pHR'CS.CDglytk导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染T淋巴细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测基因的整合及表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV)后,MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。对照组荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见许多病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在T淋巴细胞中高效、稳定表达,单独使用GCV或5-FC对T细胞/CD+tk的存活率与未转染T细胞比较明显降低(P<0.01),与单独使用5-FC或GCV比较,联合使用5-FC和GCV时T细胞的存活率明显降低(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染T淋巴细胞,双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSV-tk/GCV)对T淋巴细胞的杀伤具有明显增强作用。     

树突细胞应用于荷白血病小鼠免疫治疗的实验研究

目的探讨白血病抗原活化的树突细胞(DC)应用于荷白血病小鼠异基因骨髓移植 (allo-BMT)后免疫治疗的可行性及有效性。方法应用mGM-CSF及mIl-4从小鼠骨髓细胞扩增出成熟DC,使其负载经冻融法制备的L7212白血病细胞相关抗原。将进行allo-BMT后的荷白血病小鼠分 A(对照组)、B(T细胞组)、C(DC T细胞组)三组进行免疫治疗,观察小鼠生存率、生存期、移植物抗宿主病(GVHD)发生等情况及血清细胞因子水平和脾细胞细胞毒活力变化。对各组长期生存小鼠行二次攻击,以观察其体内抗白血病免疫能力。结果小鼠骨髓单个核细胞经mGM-CSF、mIL-4联合作用7 d可生成大量成熟DC。B、C二组复发率分别为30％及0％,移植后长期生存率分别为30％及 70％,两组差异均有统计学意义(P<0．05),而GVHD发生率差异无统计学意义。两组平均生存时间分别为(32．95±13．29)d、(41．15±13．88)d,差异有统计学意义(P<0．01)。MYT法检测发现C组小鼠脾细胞对L7212细胞产生特异性杀伤作用;EIJSA法检测显示血清中Th1类因子IL-2水平为 (419．75±26．66)pg／ml,明显高于其他两组(P<0．01)。二次攻击后B、C二组生存率分别为33．3％及85．7％,差异有统计学意义(P<0．05)。结论肿瘤抗原负载的DC联合供者淋巴细胞输注是增强 allo-BMT后移植物抗白血病效应、减少白血病复发的有效手段。     

苯诱发白血病动物模型的研究现状

苯是确认的致癌物,持续苯暴露可引起血液系统肿瘤。流行病学研究已经证实职业苯暴露人群急性髓系白血病的高发病率。近年,苯诱导的急性白血病动物模型的建立促进了苯致白血病机制的深入研究,本文对苯皮下注射及吸入染毒两种方法诱导白血病动物模型的建立进行了综述。     

cyclinD1在卵巢癌裸鼠移植瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤组织中的表达及意义。方法构建人上皮性卵巢癌3AO裸鼠皮下移植瘤模型;设阴性对照组及早、中、晚期3个肿瘤组,应用免疫组化方法及流式细胞术(FCM)检测正常组织及移植瘤卵巢癌组织中cyclinD1的表达。结果 3AO卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型平均成瘤率91.7%。正常组织cyclinD1表达阴性或弱阳性,而卵巢癌组织中cyclinD1呈过表达(54.63%)。早、中、晚期卵巢癌组织中cyclinD1阳性表达率分别是35.00%、55.60%和73.30%,肿瘤细胞凋亡率分别是7.97%、3.45%及1.83%,Mean值分别是23.15、37.31、63.28。结论 cyclinD1在卵巢癌组织中呈过表达,且其表达与移植瘤生长增殖呈正相关,cyclinD1的表达与卵巢癌发生发展关系密切。     

急性髓性白血病患者外周血Notch信号相关基因的表达变化及意义

目的 观察急性髓性白血病(AML)患者外周血Notch信号相关基因的表达变化,并探讨其临床意义.方法 初诊AML患者30例(初诊组)、完全缓解AML患者30例(缓解组)、健康体检者24例(正常组),采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测其外周血Notch1 mRNA、Delta4 mRNA、Jagged2 mRNA、HES1 mRNA.结果 与正常组比较,初诊组Notch1 mRNA、De1ta4 mRNA、Jagged2 mRNA、HES1 mRNA表达水平升高(P均＜0.05),缓解组HES1 mRNA表达水平亦升高(P＜0.05).结论 AML患者外周血Notch信号相关基因表达水平高于正常体检者,外周血Notch信号相关基因检测有助于AML的诊断.