肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的结合分析

目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融合蛋白与钙离子的关系。结果 :琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定表明 ,重组原核表达载体pGEX 4T 3中 ,HCA52 0基因的插入方向及序列完全正确。Westernblot分析显示 ,纯化的蛋白均含有GST部分 ,是所需的目的蛋白。HCA52 0融合蛋白能够以剂量依赖的方式与钙离子结合。结论 :HCA52 0基因原核表达的蛋白能够与钙离子结合 ,提示其可能是一种新的钙离子结合蛋白     

血清TK1压电石英晶片免疫传感器测定法的建立及其在恶性肿瘤诊断中的初步应用

目的建立压电石英晶片免疫传感器测定方法检测人血清中胸腺嘧啶脱氧核苷激酶-1(TK1),探索其对常见恶性肿瘤早期诊断的可行性。方法克隆人TK1基因,表达并纯化TK1基因融合蛋白,再制备并纯化TK1单克隆抗体后,用生物素标记TK1单克隆抗体。再选择并利用特殊TK1固化剂和镀金压电石英晶体制备压电石英晶体TK1免疫传感器及抗干扰反应池及屏蔽系统。最后,用此免疫传感器方法检测正常人、不同肿瘤患者血清。结果肝癌血清的TK1水平最高(2·44±0·46)ng/ml,其次为乳腺癌血清(1·16±0·24)ng/ml,二者的TK1水平均明显高于其他恶性肿瘤血清(P<0·001)。肺癌、胃肠癌、生殖系统癌以及其他恶性肿瘤血清间的TK1水平接近(P>0·05),但与良性肿瘤血清TK1存在显著性差异(P<0·001)。此外,良性肿瘤血清的TK1频移值亦显著大于正常人血清(P<0·001)。结论压电石英晶片免疫传感器可作为一种简便灵敏TK1测定新方法用于临床恶性肿瘤普查以及区分肿瘤类型,尤其是肝癌的诊断。     

顺铂、5-FU联合应用及联用方式对人卵巢癌细胞株生长的抑制作用

采用细胞培养及 MTT方法检测全量、半量顺铂 (DDP)和 5 - FU及各种联用方式如预处置及同时联合应用对人卵巢癌 3AO细胞株的生长抑制作用。结果 :1DDP和 5 - FU对 3AO细胞生长均有显著的抑制作用 (P均 <0 .0 1) ,且 DDP的杀伤作用呈明显的剂量依赖性 ,半量 DDP的抑制作用较全量者明显减弱 (P<0 .0 1) ,而 5 -FU的剂量依赖性作用不明显。 2 DDP和 5 - FU以各种给药顺序、各种浓度方式联合应用对 3AO细胞均有显著的杀伤作用 (P<0 .0 1) ,尤以预处置组作用最为突出。给予 5 - FU全量预处置 2 4h后再给予 DDP(全量 5 - FU预处置组 ) ,对 3AO细胞的抑制率可达 84.8% ,比单用全量 5 - FU或 DDP效果显著提高 (P<0 .0 5 )。5 - FU半量预处置亦显示相同的作用趋势。5 - FU或 DDP半量预处置均可达到单一药物全量所能达到的细胞抑制率。3全量或半量DDP和 5 - FU同时联合应用亦可达到满意的细胞抑制水平。认为 5 - FU和 DDP联合应用及各种联用方式对人卵巢癌 3AO细胞均有显著的杀伤作用 ,尤以 5 - FU预处置的方式作用效果最为明显。采用预处置的方法联合应用DDP和 5 - FU是提高卵巢癌化疗效果、降低单药剂量及毒副作用的新途径。