小细胞肺癌细胞系H446中肿瘤干细胞的分选与鉴定

 目的 明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选（magnetic cell separation,MACS）法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法 以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性（CD133+）细胞与CD133阴性（CD133-）细胞在集落形成、自我更新、增殖分化、侵袭性、耐药性和成瘤性方面的不同。结果 CD133+细胞和CD133-细胞在集落形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化能力、侵袭能力和耐药性方面基本相同。集落形成和成瘤性实验结果显示：CD133+或CD133-细胞中40%以上的细胞都能够形成含有100个细胞以上的大集落,增殖成为与未分选细胞相同的细胞群,并能在裸鼠身上成瘤。结论 表面黏附分子CD133不能作为分选小细胞肺癌H446细胞系中肿瘤干细胞的分子标志物,分选后的CD133+与CD133-细胞中含有相同的肿瘤干细胞。     

应用FISH技术对肝癌细胞系HCC-9903X染色体变异的研究

目的：研究人肝细胞肝癌细胞系HCC－9903X染色体畸变规律。方法：建立肝细胞肝癌细胞系HCC－9903，制备其染色体标本，用X染色体着丝粒特异DNA探针，对其X染色体进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH)，检测X染色体拷贝致畸变。结果：HCC－9903肝癌细胞系染色体变异发生率高，其中X染色体改变存在规律，拷贝数增多，以4拷贝为主，X染色体扩增率达99％，结论：X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高，证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用，其意义值得进一步探讨。     

神经节苷脂肿瘤疫苗研究进展

神经节苷脂是一类细胞膜上的糖鞘脂类化合物 ,其伸展于胞膜表面的糖基具有免疫原性抗原决定簇 ,能够诱发IgM抗体反应。由于其在多种神经外胚层起源的肿瘤组织中过度表达 ,因此可作为肿瘤疫苗的靶分子。各种经过加工、处理的神经节苷脂肿瘤疫苗的免疫原性明显增强 ,诱导产生IgM及IgG。经多种动物模型及临床实验证明 ,其抗体产生的水平和持续时间与肿瘤患者的预后明显相关 ,因此在肿瘤生物治疗上是一很有前景的研究目标。     

胸腔积液患者血清和胸液CYFRA21-1检测的意义

20 0 0年 9月至 2 0 0 2年 6月 ,我们检测了 33例恶性胸腔积液患者和 2 4例结核性胸腔积液患者的血清和胸液 CYFRA2 1 - 1水平 ,以探讨 CYFRA2 1 - 1检测对于两种胸腔积液鉴别诊断的价值。1　资料与方法1 .1　临床资料　恶性胸腔积液组 33例 ,均为肺癌病例。男 2 8例 ,女 5例 ;年龄 47～ 68岁。均经纤维支气管镜活检病理或胸腔积液细胞学诊断证实。其中鳞癌1 4例 ,腺癌 1 6例 ,小细胞癌 3例。结核性胸腔积液组 2 4例 ,男 1 8例 ,女 6例 ;年龄 35～ 66岁。其中 1 4例胸腔穿刺抽液 PCR查见结核菌 ,其余 1 0例根据临床表现、胸液性质、系…     

CA19-9、CA242、CEA联合检测诊断消化道肿瘤的价值

近两年来 ,我们采用酶联免疫方法对 1 1 2例消化道肿瘤患者于术前行 CA19-9、CA2 42 和癌胚抗原( CEA)测定 ,旨在探讨各种标志物单独及联合检测对消化道肿瘤的诊断价值。1　资料与方法1 .1　一般资料　本文 1 1 2例消化道肿瘤患者 ,均经病理检查确诊。其中大肠癌 42例 ,胰腺癌 30例 ,胃癌40例。患者年龄 31～ 68岁。均于术前取肘静脉血2 ml,离心取血清 ,- 2 0℃冻存备用。采用酶联免疫方法检测 CA19-9(试剂盒为意大利 SORINBIOMEDICA 公司生产 )、CA2 42 (试剂盒为瑞典Can Ag公司生产 )及 CEA(试剂盒为北京中山生物技术有限公司…     

X连锁显性遗传周围神经病一家系

先证者 (Ⅲ18)　女 ,44岁。患者自幼发育迟缓 ,1岁半左右才会走路 ,且日后行走不稳 ,易拌倒。 5岁左右出现脊柱侧弯。随年龄增长发现各种活动比同龄人迟缓 ,不能跑跳 ,夜间行走困难 ,病情呈进行性加重。患者智力正常 ,无肢体麻木感 ,二便正常。婚后生育一男一女 ,皆出现类似临床表现。查体 :身材瘦小 ,发育欠佳 ,脊柱侧弯 ,双手轻度爪型 ,双足弓高 ;四肢肌张力正常 ,未见肌萎缩 ,肌力正常 ;四肢远端 (双膝以下 )痛觉减退 ,深感觉减退 ,四肢键反射消失 ,闭目难立征阳性 ,闭目行走呈酒醉状 ,躯干肌明显消瘦。磁共振扫描 :脊柱侧弯畸形 ,脊髓形…     

自杀基因在异基因骨髓移植中的应用

异基因骨髓移植(allo-BMT)是治愈恶性血液系统疾病的重要方法之一，但其并发症移植物抗宿主病(GVHD)限制了其在临床上的发展应用。国内外不少研究表明自杀基因转染T淋巴细胞可控制移植物抗宿主病。     

人胚胎干细胞的培养条件与鉴别的方法学研究

目的：研究人胚肺成纤维细胞(human Embryonic Lung Fibroblast，HELF)饲养层对人胚胎干细胞(Human Embryonic Stem Cells，hES细胞)生长的作用，摸索适宜的hES细胞培养与识别方法。方法：以流产胎儿肺组织制备HELF饲养层，取生殖嵴或背肠系膜及其周围组织，获得由人原始生殖细胞(human Primordial Germ Cells，hPGCs)转化成的hES细胞。比较其在不同条件下的增殖行为，并通过生物学特性鉴别该细胞系。结果：HELF饲养层在LIF存在的条件下有利于支持hES细胞的体外生长；hES细胞碱性磷酸酶组织化学染色及端粒酶ELISA检测阳性；具有正常的核型；在体外发展为类胚体。结论：HELF饲养层和LIF的协同作用能支持hES细胞的生长；建立通过生物学特性鉴别hES细胞的方法。     

NOTCH配体Jagged2和Delta4对32D细胞的分化抑制研究

目的：探讨Notch信号传导系统中相关配体Jagged2和Delta4对髓系前体细胞32D的分化抑制作用．方法构建Delta4高表达载体pTracer.CMV.Delta4.FLAG，制备Delta4-CHO细胞；将Notch1-32D细胞加入含G-CSF培养液的CHO、Jagged2-CHo及Delta4-CHO细胞中，观察Notch1-32D细胞分化及分化抑制情况．结果：构建成功Delta4高表达载体pTracer．CMV．Delta4．FLAG并稳定转染CHO细胞．在G-CSF存在下，Notch1-32D细胞可分化为成熟的粒细胞；Jagged2能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化，但Delta4不能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化．结论：分化抑制实验发现NOTCH配体中，Delta4不能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化，但Jagged2能抑制G-CSF引起的Notch1-32D细胞分化，为进一步揭示Notch信号传导系统的作用机制及其对造血系统的影响提供重要理论依据．     

Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究

目的 构建人视网膜母细胞瘤基因(Rb94)真核表达载体,观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制.方法 构建重组表达质粒pIPES-Rb94,经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系.细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间;实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达;成克隆实验检测pIRES-Rb94对A549细胞放射敏感性影响,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪分析细胞周期.结果 成功构建pIRES-Rb94质粒,转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIRES-Rb94-A549.与A549细胞相比,pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长(31.5h:39.5 h;t=5.15,P<0.01);hTERT、Bcl-2 mRNA表达下降(0.02:1.00;t=18.99,P<0.01;0.01:1.00;t=13.73,P<0.01);G2+M期细胞增加(35.91%:4.53%;t=36.78,P=0.00),G0+G1期和S期细胞减少(47.02%:74.07%;t=11.71,P=0.00和17.07%:22.32%;t=2.30,P<0.05);由D0值计算的SER为1.30.结论 Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用,其机制可能是G2+M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2 mRNA表达,并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖.