外源性双链RNA在蚊虫细胞中介导的基因沉默

目的　近年来 ,双链RNA介导的基因沉默 (RNA干扰 )已在许多动植物中发现 ,并成为研究基因功能的强有力的工具。为确定蚊虫细胞中是否有RNA干扰现象 ,以期为利用RNAi效应消除蚊虫抗药性研究奠定基础。　方法　设计 5′端带T7启动子的绿色荧光蛋白 (GFP)及糜蛋白酶特异性引物 ,PCR扩增目的基因获得 5′端带有T7启动子DNA片段 ,体外转录成单链RNA ,退火后形成双链RNA。转染带有GFP基因的昆虫细胞表达载体 pAct .GFP和双链RNA进入C6/ 3 6蚊虫细胞 ,72h后收集细胞 ,用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达差异 ,用半定量RT PCR检测GFP的mRNA的表达水平。　结果　转染糜蛋白酶基因双链RNA和 pAct .GFP质粒的细胞及仅转染pAct .GFP的细胞的GFP表达水平没有明显差异 ;转染GFP基因的双链RNA和pAct .GFP质粒的细胞的GFP表达水平显著下降 ,达 40 %～ 5 0 % ,GFP的mRNA的表达水平也相应下降了 60 %。　结论在蚊虫细胞内 ,双链RNA能特异性的抑制相应的同源性基因的表达 ,引起基因沉默 ,证实蚊虫细胞内RNA干扰现象的存在     

淡色库蚊抗药性相关基因NYD-Ch和NYD-Tr的表达与初步鉴定

目的　淡色库蚊抗药性相关基因NYD Ch(糜蛋白酶 )和NYD Tr(胰蛋白酶 )表达与鉴定。　方法　以淡色库蚊抗性品系全长cDNA文库为模板 ,采用PCR方法扩增出抗性品系中高表达的NYD Ch和NYD Tr基因 ,经T/A克隆测序鉴定 ,将扩增产物用NotI、EcoRI双酶切后作为插入片段 ,与具有相同粘性末端的融合表达质粒 pET 2 8a(+ )连接 ,转化入表达菌株E .coliBL2 1中 ,取含重组表达质粒的重组菌株以IPTG进行诱导表达 ,表达产物以SDS PAGE电泳和小鼠抗NYD Ch和NYD Tr抗血清进行Westernblot分析鉴定。　结果　NYD Ch和NYD Tr基因开读框大小分别为816bp和 786bp ,预计可分别编码 2 72个和 2 62个氨基酸。对应分子质量大小分别为 2 9.4ku和 2 8ku ,加上pET 2 8a(+ )载体融合部分氨基酸 ,表达产物条带应在 3 3ku附近 ,与SDS PAGE蛋白电泳胶上蛋白条带一致。Westernblot分析确认诱导后的 pET 2 8a(+ ) /NYD Ch和 pET 2 8a(+ ) /NYD Tr在分子质量约 3 3ku处出现 1条与小鼠抗NYD Ch和NYD Tr抗血清特异反应的条带。　结论　NYD Ch和NYD Tr基因在大肠杆菌中获得表达 ,Westernblot分析表明该蛋白为目的蛋白。     

云南昆明地区阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者的慢性阻塞性肺疾病流行状况

目的了解云南昆明地区阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的患病情况及重叠综合征(OS)的临床表现。方法回顾性研究4 636例打鼾患者,排除COPD以外慢性呼吸系统疾病,并对患者进行病情评估。测试内容包括AHI(呼吸暂停低通气指数)、BMI(体质量指数)、Epworth嗜睡量表测试和肺功能等。OS确诊的指标是同时满足AHI5次/h并且FEV_1/FVC70%。结果 2006-2012年,云南昆明地区OSAHS患者合并COPD的患病率为10.1%(95%CI 9.1%~11.1%),而且男性OS患病率高于女性,男性为10.2%,女性为9.7%。OS患者平均年龄为(56.9±14.1)岁,平均AHI为(47.46±26.79)次/h,平均FEV_1/FVC为(60.09±23.57)%。多导睡眠监测结果提示,单纯OSASH组和OS组患者夜间存在明显的低氧血症,但是OS组患者更为显著。肺功能检测结果提示,OS患者慢性阻塞性肺疾病病情更严重。结论 OSAHS患者合并COPD在云南昆明地区患病率较高,并且高年龄段患病率达到24%以上。同时OS患者较单纯OSAHS和COPD患者在肺功能和低氧血症病情表现更严重,但是其发病机制尚不能确定。     

知信行模式干预对颅脑损伤患者生活质量的影响

颅脑损伤(TBI)是常见病,由暴力作用造成的意外损伤,成为致死、致残的主要原因,近年来,其发病率呈逐年上升。我国TBI年发病率为783/10万[1]。"知信行"模式(knowledge,attitude,belief,practice)是改变人类健康相关行为的模式之一,它将人类行为的改变分为获取知识,产生信念及形成行为三个连续过程,即知识—信念—行为。将此模     

曲妥珠单抗联合多西他赛/S-1二线治疗进展期胃癌的初步研究

目的：评价曲妥珠单抗联合多西他赛/S-1二线治疗人类表皮生长因子受体2(HER2)阳性胃癌的临床疗效。方法选取17例既往治疗失败且具有HER-2过表达的晚期胃癌患者。多西他赛40 mg/m2,d1;每3周重复。S-1剂量按照体表面积(BSA)计算给予,BSA<1.25 m2为80 mg/d;1.25≤BSA<1.5 m2为100 mg/d;BSA≥1.5 m2为120 mg/d;d1~14;每3周重复。曲妥珠单抗每3周给药,首日给予负荷剂量8 mg/kg,然后6 mg/kg,每三周重复。两个周期后评价疗效及对生存质量的影响。结果17例患者中CR 1例,PR 7例,SD 6例,PD 3例,总有效率为47.06%。常见不良反应为食欲下降11例、乏力10例和粒细胞减少9例,没有严重不良反应发生。治疗后生存质量评分得到明显提升。结论曲妥珠单抗联合多西他赛/S-1作为二线治疗HER2阳性的进展期胃癌疗效令人满意,不良反应少,值得进一步研究。     

实验小鼠芽囊原虫感染及其对血液指标的影响

分析实验小鼠芽囊原虫感染及其对小鼠血液指标的影响。2020—2021年,采集石家庄市6个不同实验室饲养的清洁级BALB/c小鼠粪样,提取粪样DNA, PCR扩增芽囊原虫18S特异性片段,测序后在GenBank数据库中进行BLAST比对,分析实验小鼠感染芽囊原虫的亚型,用最大似然法构建基于18S序列的系统进化树。取同批次同环境芽囊原虫检测阳性和阴性小鼠各5只,采血样进行血常规检测,并对检测指标结果进行统计学分析,组间比较采用t检验。共采集小鼠粪样238份,47份PCR扩增出约250 bp的条带,实验小鼠芽囊原虫感染率为19.8%(47/238)。47份阳性样品的序列与GenBank登陆号为MK782501.1 (ST1)、 MN338076.1 (ST2)和MK861934.1 (ST7)的序列一致性分别为80.31%～82.79%、 97.84%～99.13%和98.79%;系统进化树分析结果显示,阳性样品的序列分别与ST1、 ST2和ST7亚型的序列聚集为一支。血常规检测结果显示,芽囊原虫感染小鼠的平均血红蛋白含量为（21.17±0.45） pg,低于未感染小鼠的（23.90±0.6...     

肾功能衰竭患者造瘘术后血液透析灌注不足的超声图像分析

目的分析肾功能衰竭(RF)患者动-静脉造瘘术后出现血液透析灌注不足的超声图像特征。方法彩色多普勒超声观察65例造瘘术后血液透析灌注不足RF患者头静脉、桡动脉及吻合口的内径、走形、彩色血流束及血流动力学参数,计算狭窄血管的狭窄度。结果 46例(70.77%)血栓形成;其中,完全闭塞16例,狭窄30例。14例(21.54%)吻合口瘢痕收缩;其中,高度狭窄8例,中度狭窄6例。2例(3.08%)吻合口手术狭窄,均为中度狭窄。3例(4.62%)局部血肿压迫;其中,1例闭塞,2例中度狭窄。结论血栓形成、吻合口瘢痕收缩、吻合口手术狭窄及局部血肿压迫是RF患者造瘘术后血液透析灌注不足的主要原因;血管闭塞及狭窄是造成灌注不足的血流动力学原因。     

中医分期康复理念在老年髋关节置换患者术后护理中的运用

目的探讨中医分期康复理念对老年髋关节置换术患者术后康复的影响。方法将本院80例行髋关节置换术的患者随机分为对照组(常规护理)和观察组(常规护理及中医分期康复护理),各40例。采用Harris评分、Barthel指数、SF-36量表评价2组患者术后功能康复和生活质量。结果观察组术后Harris评分、MBI评分高于对照组,髋关节功能优良率好于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组SF-36生活质量各方面评分均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论中医分期康复护理能够加速康复,改善生活质量。     

膝关节置换术后肺栓塞发生的相关危险因素研究

目的探讨膝关节置换术后并发肺栓塞的临床表现及相关危险因素干预对患者的影响。方法选取45例膝关节置换术后肺栓塞患者为研究对象,将患者分成联合治疗组和非联合治疗组,比较其在术后功能方面的差异性。结果膝关节置换术后并发肺栓塞的临床症状以呼吸困难、胸闷胸痛为主,体征以哮鸣音和湿性啰音为主;BMI、术后制动、抗凝药物应用、骨水泥、创伤、静脉血栓形成是膝关节置换术后并发肺栓塞的高危险因素(P0.05);经过康复锻炼等干预措施后,联合治疗组在疼痛、功能、僵硬和生存质量上和非联合治疗组比较有显著差异(P0.05)。结论膝关节置换术后并发肺栓塞受多种危险因素影响,干预后可降低发病风险。     

原花青素对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨原花青素对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖和凋亡的影响及初步机制.方法 不同浓度原花青素处理Daoy细胞24、48和72 h,CCK-8检测细胞增殖,Hoechst33258荧光染色法及流式细胞仪分析细胞凋亡,Western blot检测细胞Akt、p-Akt和NF-κB的表达.结果 原花青素对肿瘤细胞的增殖抑制效应呈浓度时间依赖性,72 h的半数抑制浓度IC50为0.25 mmol/L.0.2 mmol/L原花青素处理细胞24、48和72 h后,可见较多的凋亡细胞,明显的核固缩;细胞凋亡率分别为21.16％±2.49％、36.02％±0.71％、63.79％±1.47％.细胞总Akt水平无明显变化,但p-Akt和NF-κB蛋白表达水平明显降低.结论 原花青素可能通过降低p-Akt和NF-κB的表达,在体外抑制Daoy细胞增殖,并促进其凋亡.