蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定

目的 建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系。方法 采用PCR方法，以淡色库蚊抗药性品系CD-NA文库为模板，扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区；经T／A克隆测序鉴定后，亚克隆到真核表达载体piEl-3，构建重组昆虫细胞表达载体piEl-3／chy，经酶切和PCR鉴定后，与带有筛选标记的piEl-neo质粒共转染蚊细胞C6／36，通过G418选择培养，建立转染细胞系；用RT-PCR、Westernblotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达。结果 成功构建了真核表达载体piE1-3／chy，证明糜蛋白酶基因已转入C6／36细胞，建立了稳定转染细胞系，表达产物分子质量单位约30ku，与理论值相符。结论 稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础。     

急性有机磷农药中毒机制及治疗的研究进展

正急性有机磷农药中毒(acute organophosphorus pesticide poisoning,AOPP)主要是由于乙酰胆碱酯酶被抑制[1],临床上对AOPP的诊断,主要以乙酰胆碱酯酶活性的测定作为诊断依据。研究表明急性有机磷中毒的临床演变可分为3个阶段:初始胆     

基于相对风险的肿瘤基因差异表达分析

目的寻找与肿瘤相关的基因诊疗中差异表达基因提取的方法。方法将基因表达谱数据进行预处理,采用相对风险方法筛选出差异表达基因特征子集,计算其样本间距离,然后对特征基因加权排序和过滤冗余基因,最后应用分类器对卵巢癌基因数据集进行分析,测试该方法的有效性。结果选取20维特征基因,进行分类测试,当特征基因为3～5、7和12～20维时,分类准确率可以达到100%,假阳性率可以达到0,表现出较好的可靠性,能够有效地将2个样本类型分开。结论经分类器测试证明,分类精度高,效果优于使用传统的基因差异表达分析方法。     

小酸浆中Withaphysalins的分离和结构鉴定

研究小酸浆Physalis minima L.的活性成分。小酸浆的地上部分经乙醇提取,氯仿萃取,D-101大孔树脂柱色谱粗分,Sephadex LH-20、MCI gel CHP 20P、RP-18等色谱柱分离,并通过理化常数和波谱学方法鉴定化合物结构。从小酸浆中分离鉴定了5个化合物,分别为Withaphysalin P(Ⅰ)、14,18-di-O-acetylwithaphysalin C(Ⅱ)、Withaphysalin Q(Ⅲ)、Withaphysalin型化合物1(Ⅳ)、Withaphysalin型化合物2(Ⅴ)。化合物Ⅳ、Ⅴ为新化合物,分别命名为Withaphysalin T、Withaphysalin U。     

鹰嘴豆芽素A预防给药抑制心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌炎症产生

【摘要】目的 构建心肌缺血再灌注（MIRI）损伤动物模型,观察鹰嘴豆芽素A预防给药对心肌炎性因子调节酶过氧化物酶体增殖物激活受体ɑ（PPARɑ）、细胞色素P4501A1（Cyp4501A1）、磷脂酰肌醇 3激酶（PI3K）和丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）蛋白及mRNA表达的影响。方法 60只SD大鼠适应性喂养2周后按照随机数字法分为假手术组、模型组、雷米普利干预组、鹰嘴豆芽素A低、中和高剂量组,每组10只。灌胃给药2周后,所有大鼠均采用可逆左冠状动脉前降支结扎法构建MIRI模型,假手术组只穿线不结扎,手术后立即收集血液检测心肌酶谱和血清炎性因子含量,收集心脏检测心肌病理学、心肌炎性指标、心肌炎性因子调节酶PPARɑ、Cyp4501A1、PI3K和AKT蛋白及mRNA的表达。结果 心肌组织病理学可见,假手术组心肌纤维排列整齐,模型组有纤维断裂和组织坏死,与模型组相比,各治疗组均明显好转;与假手术组相比,模型组心肌酶CK MB和LDH、心肌和血清炎性因子Hs CRP、IL 1α、IL 6、IL 8和TNF α均明显升高（P＜0.05）,各治疗组相较于模型组明显降低（P＜0.05）;与假手术组相比,模型组心肌PPARɑ、Cyp4501A1、PI3K和AKT蛋白及mRNA表达水平均明显降低（P＜0.05）,而各治疗组相较于与模型组则明显升高（P＜005）。结论 鹰嘴豆芽素A预防给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌炎症因子具有明显抑制作用,其作用机理可能与鹰嘴豆芽素A可调节PPARɑ、Cyp4501A1、PI3K和AKT蛋白及mRNA表达有关。     

根部穿孔性阑尾炎的腹腔镜治疗策略

目的:探讨腹腔镜阑尾切除术(laparoscopic appendectomy,LA)治疗根部穿孔性阑尾炎的可行性,并提出根部穿孔性阑尾炎的临床分型及处理方法。方法:总结2012年9月至2016年3月收治的124例行LA的根部穿孔性阑尾炎患者的临床资料。根据阑尾根部、回盲部能否充分显露及阑尾根部距盲肠壁完整段的长度,将根部穿孔性阑尾炎分为Ⅰ型(Ⅰa型、Ⅰb型、Ⅰc型)、Ⅱ型,其处理方式为:用可吸收结扎夹对系膜缘侧双重夹闭阑尾根部、间断缝合阑尾残端周围5 mm盲肠壁、距阑尾根部10 mm处用腔内切割吻合器闭合并切割阑尾周围盲肠壁组织及中转开腹。结果:124例患者均痊愈出院,包括Ⅰa型73例、Ⅰb型30例、Ⅰc型18例(早期3例中转开腹,后期15例行LA)、Ⅱ型3例。术后病理均证实根部穿孔性阑尾炎。放置腹腔乳胶引流管的患者,术后48~72 h行腹腔B超检查证实无积液后拔除。随访3~48个月,无粘连性肠梗阻、腹腔脓肿及阑尾残端漏发生。结论:LA治疗根部穿孔性阑尾炎是可行的,必须依据临床分型进行根部处理,腔内切割吻合器处理根部穿孔性阑尾炎具有一定的临床意义。     

胃癌组织细胞程序性死亡配体1表达情况和CD8+肿瘤浸润T淋巴细胞密度及其与患者临床病理特征和预后的关系研究

背景 目前,胃癌组织细胞程序性死亡配体1（PD-L1）表达情况和CD8+肿瘤浸润T淋巴细胞（TILs）密度是否可作为胃癌患者预后的评估指标尚不明确。 目的 分析胃癌组织PD-L1表达情况、CD8+ TILs密度及其与患者临床病理特征和预后的关系。 方法 选择2016年1月至2018年3月在南阳市第一人民医院行手术治疗的胃癌患者125例,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测其胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量,采用免疫组化方法检测其胃癌组织CD8+ TILs密度。分析胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量、CD8+ TILs密度与患者临床病理特征的关系;胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量与CD8+ TILs密度的相关性分析采用Pearson相关分析;通过电话随访至术后36个月,以患者死亡或失访为终点事件,绘制Kaplan-Meier曲线以进行生存分析;胃癌患者预后的影响因素分析采用单因素和多因素Cox回归分析。 结果 所有患者胃癌组织平均PD-L1 mRNA相对表达量为3.1,癌巢内平均CD8+ TILs数量为36个,最终归为低水平组73例（PD-L1 mRNA相对表达量<3.1）和高水平组52例（PD-L1 mRNA相对表达量≥3.1）,低密度组55例（CD8+ TILs数量<36个）和高密度组70例（CD8+ TILs≥36个）。低水平组与高水平组患者淋巴结转移、脉管侵犯、腹膜转移情况比较,差异有统计学意义（P<0.05）;低密度组与高密度组患者浸润深度、淋巴结转移、脉管侵犯、腹膜转移情况比较,差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析结果显示,胃癌组织PD-L1 mRNA相对表达量与CD8+ TILs密度呈负相关（r=-0.412,P<0.001）。中位随访时间为36.0个月,125例患者中预后不良37例,预后良好88例;低水平组与高水平组、低密度组与高密度组患者Kaplan-Meier曲线比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素Cox回归分析结果显示,高水平PD-L1 mRNA〔HR=3.021,95%CI（1.632,5.045）〕、低密度CD8+ TILs〔HR=2.158,95%CI（1.854,4.632）〕为胃癌患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。 结论 高水平PD-L1 mRNA、低密度CD8+ TILs均是胃癌患者预后不良的独立危险因素,有望成为胃癌患者预后不良的生物标志物。