先天性食管闭锁的外科治疗

目的：探讨提高先天性食管闭锁手术成功率的措施。方法：对我院1982－2000年62例先天性食管闭锁进行回顾分析。结果：59例获得手术治疗的先天性食管闭锁患儿,死亡7例,吻合口瘘4例,食管狭窄6例。1994年后连续22例无死亡。结论：早期诊断,熟练轻柔的手术操作及严密、高质量的术后监护是提高成功率的关键。     

心脏移植治疗儿童晚期扩张型心肌病一例报告

目的：探讨心脏移植治疗儿童晚期扩张型心肌的手术适应证，外科治疗方法，术后监测，免疫抑制剂的应用。方法：于2000年8月23日在全身麻醉，中低温体外循环下行标准式原位心脏移植手术，受体为13岁男孩，患终末期扩张型心肌病，心胸比率0．78，心功能IV级，左室射血分数24．0％，供体为成年脑死亡患者。结果：体外循环时间142min，主动脉阻断95min，供心热缺血时间3min，冷缺血时间114min，术后20h停呼吸机拔除口插管，48h，后患儿能坐起，72h后出监护室转入单间康复室，术后未出现过急性排异反应，但曾出现过巨细胞病毒感染和反应性糖尿病，经相应处理很快控制，二次心内膜活检均为轻度排异反应，未作特殊处理，患儿术后1个月出隔离室，至今1年余，心功能各项指标正常，心功能I级，免疫方案采用二联法，即环孢素A和硫唑嘌呤口服抗 排异反应，现患儿能正常上学读书，参加一般体育活动。结论：心脏移植是治疗终末期心肌病的有效方法，供心质量与受体病 情严重程度和手术成功率密切相关。     

siRNA干扰对乳腺癌（MCF-7）ATX表达和侵袭力的影响

目的:研究针对自分泌运动因子(Autotaxin,ATX)的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)对人乳腺癌细胞ATX基因表达的影响,探讨RNA干扰技术治疗乳腺癌的前景.方法:参考人黑色素瘤ENPP2基因序列,设计合成ATX-siRNA及随机阴性对照.在阳离子脂质体的介导下转染人乳腺癌细胞MCF-7,转染后48 h收集细胞,用半定量RT-PCR和western blot检测转染后ATX mRNA和ATX蛋白的表达,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果:体外合成的siRNA在转染乳腺癌细胞48 h后ATX mRNA和蛋白表达降低,转染48 h后测定乳腺癌MCF-7细胞的侵袭力明显降低(P＜0.01).结论:ATX-siRNA能有效抑制人乳腺癌细胞株ATX基因和蛋白的表达,降低人乳腺癌细胞的侵袭力.     

去铁胺预处理对幼龄大鼠深低温脑缺血/再灌注损伤的影响

复杂先天性心脏病外科手术中往往需要采用深低温停循环或深低温低流量,但一旦时间过长,均可能造成不同程度的神经系统后遗症.我们通过建市幼龄大鼠深低温缺血/再灌注模型,并检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)及一氧化氮(NO),探讨去铁胺对脑损伤的影响及可能的保护机制.     

体外转录法制备登革热1-4型病毒RNA片段

目的通过体外转录获得登革热1-4型病毒保守区基因的RNA片段,为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计登革热1-4型病毒基因保守区克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至质粒PGEM-T-easy上并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,得到固定长度的RNA片段,DNase酶处理后测定浓度,梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含登革热1-4型病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为352.6 ng/μl、384.2 ng/μl、457.3 ng/μl、368.7 ng/μl,RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为登革热1-4型病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。     

幼龄大鼠深低温低流量脑损伤模型的建立和评估

目的 建立幼龄大鼠深低温低流量(deep hypothermia low flow,DHLF)脑损伤模型,研究DHLF期间大鼠脑血流量的变化及脑损伤程度. 方法 3周龄健康SD大鼠12只,雌雄不限,体重45～50 g,按随机数字表法分为假手术组和模型组.建立DHLF模型后,利用激光多普勒血流监测仪于DHLF期间连续监测脑血流昔变化,并在降温前、降温至(21.0±0.5)℃、DHLF 0～5 min、DHLF 25～30 min、DHLF 55～60 min、DHLF 115～120 min和DHLF术后0～5 min这7个时间段记录局部脑血流量(rCBF)变化,降温前rCBF作为基线水平.另取3周龄健康SD大鼠60只,按随机数字表法分为假手术组和模型组,每组设5个时相点:DHLF术后1 h、6 h、24 h、72 h和7 d,每个时相点6只,采用HE染色和TUNEL法分别观察不同时相点脑组织病理改变及细胞凋亡变化,并于术后24 h、72 h和7 d进行神经功能缺陷评分(NDS). 结果 假手术组和模型组在降温至(21.0±0.5)℃时rCBF分别降至基线水平的(41.1±4.2)%和(40.7±3.4)%,且模型组rCBF在DHLF 0～5 min内进一步降低至(15.7±3.5)%(P＜0.01),而在DHLF期间无明显改变.与假手术组比较,模型组在术后24 h和72 h时NDS评分显著降低(P＜0.05或0.01),且脑组织病理改变明显,TUNEL阳性细胞在术后6 h、24 h、72 h和7 d均显著增高(P＜0.01). 结论 DHLF模型可以造成脑损伤,与细胞凋亡有关,且操作简单,是一种较为理想、可靠的DHLF脑损伤模型,可近似于临床心脏直视手术DHLF过程.     

延迟关胸在小儿心脏手术后的应用

报告小儿心内直视手术1377例，其中9例延迟关胸。术前心功能分级：Ⅱ级4例，Ⅲ级4例，Ⅳ级1例。体外循环时间和主动脉阻断时间分别为：131±5分钟和85±2分钟。3例术毕未能关胸，6例入监护空即刻至9小时内重新开胸。延迟关胸时间1～3天。全组无死亡，随访3个月至8年，生存良好。表明延迟关胸是处理心内直视手术后危重病人的有效方法之一，能提高小儿复杂心脏病的手术存活率。     

先天性心脏病，三道门坎严把关

先天性心脏病（CHD）简称先心病,是指胚胎发育早期（怀孕2～8周）由于某种原因造成心脏及大血管的结构发育异常,导致出生后就存在的心脏血管畸形。是儿童最常见的出生结构缺陷性疾病,患病率大约在0．7％-1％,是引起新生儿死亡的主要原因。     

HIF-2α-VEGF-Notch信号通路在高强度聚焦超声不完全消融后肝癌中的作用

目的 探讨HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch等基因在高强度聚焦超声不完全消融肝癌血管新生中的表达及其作用.方法 实验共分5组,HIFU残留肝癌细胞亚系为实验组,未处理肝癌细胞为对照组,转染HIF-2α基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制HIF-2α组,转染VEGF基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制VEGF组,转染空载慢病毒残留肝癌细胞为空载组.免疫荧光检测实验组与对照组的VEGF表达.低氧(1％O2)处理实验组与对照组细胞0、6、12、24 h,荧光定量PCR和Westernblot检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达水平.荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4 mRNA和蛋白表达水平.结果 VEGF蛋白在对照组与实验组细胞中均有表达.HIF-1α在低氧处理12 h达到顶峰,随后下降,而HIF-2α、VEGF随着低氧处理时间增加而呈上升趋势,且实验组HIF-2α、VEGF表达较对照组明显增高(P＜0.05).转染慢病毒后,抑制HIF-2α组HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),抑制VEGF组VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),实验组HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.05).结论 HIF-2α-VEGF-Notch信号通路参与调控高强度聚焦超声残余肝癌血管新生.