生物学变异推导出的质量规范在肿瘤标志物检测指标质量评价中的应用

目的探讨由生物学变异推导出的允许总误差(TEa)和允许不精密度(CV)质量规范在肿瘤标志物室间质量评价(EQA)和室内质量控制(IQC)中的应用。方法收集肿瘤标志物EQA数据,同时要求各实验室上报当月IQC的CV。以基于生物学变异推导出的和EQA计划的TEa及允许CV作为质量规范,并用Excel 2010软件对EQA和IQC数据进行分析。结果EQA结果显示,所有检验指标均有80%以上的实验室能达到基于当前技术水平的TEa质量规范控制限;AFP、CEA、CA125、CA153、CA199和总PSA指标有80%以上的实验室能达到最佳的TEa质量规范评价限;铁蛋白均能达到最低的TEa质量规范评价限;β2-微球蛋白只有70%以上实验室能达到最低的评价限。IQC结果显示,所有检验指标均有80%以上实验室能达到1/3 TEa的允许CV质量要求,60%以上实验室能达到1/4 TEa的允许CV质量要求;CA125、总PSA检测指标有80%以上的实验室能达到适当的允许CV质量要求;AFP、CEA、CA199、铁蛋白检测指标有80%以上的实验室能达到最低的允许CV质量要求;而CA153和β_2-微球蛋白检测指标无法满足最低的允许CV质量要求。结论以生物学变异推导出的质量规范作为肿瘤标志物的EQA和IQC评判标准能全面客观地了解各实验室的检测质量水平,为肿瘤标志物检验指标的互认提供依据。     

国际参考实验室能力验证样品的均匀性评价

目的评价国际参考实验室能力验证样品(RELA-A/B)的均匀性是否满足参考实验室比对的要求。方法参照CNASGL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》,用Roche Modular P800生化分析仪测量2014至2016年连续3年RELA-A/B的14个项目,即丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、L-γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、总胆红素(T-Bil)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)。计算测量结果均值()、标准差(s)和变异系数(CV),用单因素方差分析和SS≤0.3σ准则分析评价其瓶间差异。结果 RELA 2014A和2014B样品AST测量结果 CV2.0%。除RELA 2016B样品CK测量结果 CV2.0%外,其他样品CK测量结果 CV均2%。单因素方差分析结果显示,所有样品中CK测量结果 F均临界值4.39,差异有统计学意义(P0.05);2015B样品ALT和T-Bil,2014A样品Cr测量结果 F均临界值4.39,差异有统计学意义(P0.05);其他测量结果 F均临界值4.39,差异无统计学意义(P0.05)。S_S≤0.3σ准则分析结果显示,所有样品CK测量结果 S_S0.3σ,CK测量结果存在瓶间差异;其他项目测量结果 S_S均≤0.3σ,其他项目测量结果无瓶间差异。结论国际参考实验室能力验证样品CK项目存在瓶间差异,值得注意;其他项目均匀性能满足参考实验室能力验证要求。     

新生儿遗传代谢病筛查数据实验室间比对和监测平台的应用

目的用新生儿遗传代谢病筛查数据比对和监测平台分析新生儿疾病筛查实验室数据,用实验室数据进行质量控制并实现筛查数据的实验室间比对。方法用开发的新生儿筛查数据比对和监测平台收集全国45家新生儿遗传代谢病筛查实验室2016年6月苯丙氨酸(Phe)和促甲状腺激素(TSH)每日检验结果的中位数并进行统计分析。结果大多数实验室使用Perkin Elmer检测系统。Phe筛查数据中位数分布在0.17~1.21 mg/d L,TSH筛查数据中位数分布在0.90~4.56μIU/m L。Phe中位数百分差值满足1/2TEa(允许总误差)要求的实验室比例在97.8%以上,TSH约有1/3的实验室可以满足1/2TEa要求。结论新生儿遗传代谢病筛查数据比对和监测平台是新生儿筛查质量管理的有益补充,能帮助实验室使用筛查数据进行质量控制,同时实现筛查数据的实验室间比对,为检验结果互认提供参考。     

LncSox4在非小细胞肺癌中的表达及生物学作用

目的检测LncSox4在人非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达水平变化,初步探讨其生物学作用及机制,为NSCLC诊断和治疗提供新的生物指标。方法采用qRT-PCR检测LncSox4在NSCLC患者肿瘤组织中的表达水平。通过克隆形成试验、生长曲线分析、Transwell迁移和侵袭试验检测敲除LncSox4对A549细胞生物学功能的影响;采用流式细胞术分析细胞周期情况;采用qRT-PCR和western blot检测上皮-间质转化(EMT)相关基因及蛋白质的表达水平。结果与癌旁对照相比,LncSox4在NSCLC癌组织中呈显著高表达(t=7.109,P0.01);LncSox4基因沉默后,A549细胞生长速度减缓,细胞克隆形成数量减少(P0.01),细胞迁移和侵袭能力降低(P0.01),诱导细胞发生G_1期阻滞(P0.01);LncSox4基因沉默抑制A549细胞中Cyclin D1、c-Myc、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白的表达;LncSox4基因沉默还显著降低EMT相关转录因子Snail、Slug和Twist的表达水平。结论 LncSox4在NSCLC中高表达,通过影响细胞增殖、迁移和侵袭促进NSCLC恶性进展,有望成为NSCLC诊疗新靶点。     

创伤严重程度与创伤相关分子标志物和血栓弹力图的相关性

目的观察血栓弹力图(TEG)和创伤相关分子标志物与创伤严重程度的相关性。方法回顾性分析宁夏自治区人民医院急诊科75例急性创伤患者输血相关参数、PLT、血浆凝血试验项目、D-二聚体(DD)、创伤严重程度(ISS)、TEG,并检测血浆创伤相关分子标志物,如组蛋白复合的DNA片段(hcDNA)、肾上腺素、去甲肾上腺素、可溶性CD40配体(s CD40L)、凝血酶原片段1+2(PF1+2)、抗凝血酶(AT)、凝血酶/抗凝血酶复合物(TAT)、凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)、蛋白C(PC)、激活的蛋白C(APC)、黏结合蛋白多糖-1(Syndecan-1)等。用线性回归分析创伤严重程度与创伤相关分子标志物及TEG的相关性。结果极度重伤组、重伤组和轻伤组,24 h内红细胞输注量、24 h内血浆输注量、大量输血率(成人患者24 h内输注红细胞悬液≥18 U)、30 d内死亡率差异均有统计学意义(P均0.05);活化部分凝血活酶时间(APTT)42 s、国际标准化比值(INR)1.2、DD、凝血因子激活时间(R)、最大切角(α)差异均有统计学意义(P均0.05);hcDNA、sCD40L、黏结合蛋白多糖-1、FⅩⅢ、肾上腺素、去甲肾上腺素差异均有统计学意义(P均0.05)。根据创伤严重程度分组,纤维蛋白原、FⅩⅢ、s CD40L与最大振幅(MA)结果相关(P均0.05)。hcDNA、sCD40L、黏蛋白多糖-1、FⅩⅢ、去甲肾上腺素、肾上腺素临界值分别为20.1%、395 pg/m L、50.1ng/m L、28 mg/m L、1 215 pg/m L、1 010 pg/m L时判断急性创伤凝血病的敏感性依次为63.0%、58.7%、57.9%、53.1%、52.1%、51.9%,特异性依次为62.7%、59.1%、61.0%、59.5%、59.4%、57.4%。结论创伤严重程度与创伤相关分子标志物及MA相关。     

双侧肾上腺巨大原发性非霍奇金淋巴瘤1例

患者女，19岁。腰背部及上腹部胀痛不适、乏力、纳差、间歇性发热1个月。全身浅表淋巴结无肿大。血、尿常规未见异常；血乳酸脱氢酶（LDH）644U／L，血α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）640U／L，碱性磷酸酶68U／L，血钙3．86mmol／L。     

威克海姆无绿藻致手指关节腱鞘炎1例并文献复习

<正>无绿藻病(protothecoses)是由条件致病真菌无绿藻引起的一种真菌病,多发生于免疫受损人群,免疫正常人群亦有报道。该病通常病灶局限,进展缓慢。本文报道我院收治的1例由威克海姆无绿藻引起手指关节腱鞘炎的诊疗经过,并结合文献进行复习。1病历摘要患者,女,54岁,餐厅洗碗工,因右手无名指红斑、起疹、脓肿伴痒、痛1年,于2017年3月14日来我院就诊。患者1年前右手无名指出现红斑、脓肿,伴轻微瘙痒及疼痛,脓肿逐     

T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3在肿瘤发生发展及免疫治疗中的研究进展

上皮性卵巢癌(EOC)因其早期难以发现且晚期缺乏有效的临床治疗手段,已成为妇科恶性肿瘤患者死亡的重要原因。目前,免疫治疗有望成为EOC治疗的重要手段之一,但机体免疫抑制的产生会影响EOC的免疫治疗效果。T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)是一种免疫卡控点分子,参与调控机体的免疫功能,并在抗肿瘤免疫反应中发挥重要作用。体外实验和小鼠体内研究结果表明,调控TIM-3的某些生物学功能有助于激活T细胞的活性,抑制肿瘤的生长,因而TIM-3可能成为EOC免疫治疗的潜在新靶点。该文对TIM-3的生物学特性及其在EOC免疫治疗中的潜在应用前景作一综述,旨为妇科肿瘤发生机制和防治技术研究提供新策略。     

乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化

目的建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ss DNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率。方法构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成ds DNA文库,再以ds DNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ss DNA文库,并对二者进行比较。通过改变模板、聚合酶、d NTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件。结果乳液PCR能高效扩增出ds DNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ss DNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15~35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR。在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大。结论乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化(SELEX)技术筛选效率。     

ELISA定量检测抗dsDNA抗体试剂盒性能验证方法的探讨

目的探讨ELISA定量检测抗双链DNA抗体(下简称抗ds DNA抗体)试剂盒的性能验证方法。方法依据美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)批准的EP15-A2文件方法验证精密度。通过检测过往室间质量评价(external quality assessment,EQA)质评物、与比较试剂进行比较、回收试验等3种方法验证准确度。通过检测空白样本验证检测低限(lower limit of detection,LLD)。通过《CNAS-CL39:医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明》、CLSI C28-A3C文件提供的方法验证临界值。通过改良的Doumas法验证线性范围。结果实测批内、批间变异系数均小于厂家声称的变异系数或按EP15-A2公式计算的验证值。检测EQA质评物阴性符合率为98.4%(63/64),阳性符合率为100%(20/20),总符合率为98.8%(83/84)。与比较试剂的阴性符合率为91.2%(52/57),阳性符合率为87.0%(40/46),总符合率为89.3%(92/103),Kappa值为0.783(P=0.062),两种试剂具有优秀的一致性。平均回收率为99.65%。3种方法验证准确性均通过。实测LLD为0.5 IU/m L,低于厂家声称的1 IU/m L。按CNAS-CL39方法,实测的临界值为18.51IU/m L,与说明书建议的20 IU/m L接近。按C28-A3C方法,临界值验证也通过。线性回归方程为Y=0.978 8X-3.125 4,r~2为0.996 1,截距项-3.125 4与0差异无统计学意义(t=-0.772,P=0.483)。线性范围是1.6~212.5 IU/m L,与厂家声明一致,线性验证通过。结论候选抗ds-DNA抗体试剂盒的精密度、准确度、LLD、临界值、线性范围与厂家的声明一致,能满足临床诊断与治疗的需要。本研究采用的一系列验证方法为ELISA定量检测试剂的性能验证提供了新思路。