整合子与细菌耐药

近年来由于抗生素的广泛应用,尤其是不合理的使用,细菌的耐药问题越来越严重,加上新抗生素的开发需要一个较长的周期,使得未来细菌感染的治疗陷入了一个两难的境地[1]。过去人们对细菌耐药性的研究主要集中在细菌染色体的基因突变,后来则发现这种由基因突变引起的细菌耐药性是不可以传播的,而获得外源性耐药基因才是大多数细菌产生耐药性的原因。传统观念认为,耐药基因可通过接合性质粒(plasmid)、转座子(transposon,Tn)、整合型噬菌体(bacteriophage)水平传递。1989年,Stokes和Hall首次提出了一个与耐药基因水平传播有关的新的可移动基因…     

南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的调查

目的调查和研究南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特性。方法用K-B法测定97株鲍曼不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星2种抗菌药物的耐药性,用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。结果同时耐庆大霉素、阿米卡星的鲍曼不动杆菌44株,庆大霉素耐药阿米卡星敏感的有4株,庆大霉素敏感阿米卡星耐药的有3株,从51株表型耐药菌中检出4种修饰酶基因,其中带有aac(3)Ⅰ-基因19株(37.3%);带有aac(3)-Ⅱ基因15株(29.4%);有aac(6′)-Ⅰ基因8株(15.7%);ant(3″)Ⅰ-基因为3株(5.8%);同时具有aac(3)Ⅰ-和aac(6′)Ⅰ-基因的5株(9.8%);有aac(3)-Ⅱ和aac(6′)Ⅰ-基因的1株(1.9%)。结论南京地区鲍曼不动杆菌所带基因以aac(3)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ为主,其与氨基糖苷类药物耐药有一定的关系。     

抑制DLK1表达对食管癌细胞放射敏感度的影响

目的 探讨抑制DLK1的表达对食管癌细胞放射敏感度的影响。方法 采用克隆形成实验验证KYSE-R与KYSE细胞的放射敏感度差异,RT-PCR和Western blot检测DLK1的表达。选用最佳DLK1干扰序列转染KYSE-R细胞,4 Gy射线处理后克隆形成实验检测KYSE-R细胞放射敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 KYSE-R细胞表现出比KYSE细胞更强的放射抗拒性,DLK1在KYSE-R中的表达显著高于KYSE,且siDLK1-3干扰效果最佳（均P<0.05）。4 Gy射线照射后DLK1干扰组细胞存活力显著低于对照组,而DLK1干扰组细胞凋亡率和G₂/M期细胞比例明显高于对照组（均P<0.05）。结论 抑制DLK1表达可通过降低细胞存活、促进细胞凋亡和增加G₂/M期细胞比例、增强放射敏感度,为食管癌放射增敏研究提供新的靶点。     

头孢曲松-舒巴坦复方制剂对产ESBLs大肠埃希菌持续效应的研究

目的测定头孢曲松-舒巴坦复方制剂（2：1）对产ESBLs大肠埃希菌的MIC和持续效应。后者包括抗生素后效应（PAE）、内酰胺酶抑制剂后效应（PLIE）和亚抑菌浓度后效应（PASME）。方法以肉汤试管稀释法测定MIC。将大肠埃希菌与一定冲击浓度的头孢曲松-舒巴坦作用2h后，在不同药物浓度条件下继续培养，用倾皿培养法进行菌落计数（CFU／mL），以log（CFU／mL）对培养时间（h）绘制生长曲线，计算PAE、PLIE和PASME。结果①头孢曲松和头孢曲松-舒巴坦对大肠埃希菌的MIC分别为8／4mg／L和大于256mg／L。②头孢曲松和头孢曲松-舒巴坦对大肠埃希菌的PAE为负值或很短。③舒巴坦对大肠埃希菌的PLIE在低冲击浓度（2MIC、4MIC）时为负值或很短，当浓度增加至10MIC时，其PLIE〉6．5h。结论时间依赖的头孢曲松-舒巴坦对产ESBLs大肠埃希菌的PLIE存在明显的浓度依赖效应，为了提高头孢曲松-舒巴坦的临床疗效，其给药方法的设计除了要延长T〉MIC外，适当提高给药的峰浓度或许亦有利于疗效的发挥。     

改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的性能评估

目的 评估改良Hodge试验在碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌中检测碳青霉烯酶的效能.方法 收集2004-2008年我国16家教学医院的49株碳青霉烯类药物敏感性降低(亚胺培南、美罗培由或厄他培南的MIC≥2μg/ml)的肠杆菌科细菌;采用对倍琼脂稀释法测定其对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的MIC;通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;利用加苯硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验区分碳青霉烯酶或AmpCs/ESBLs导致的阳性结果 ;采用PCR检测包括NDM-1型碳青霉烯酶基因在内的多种β内酰胺酶基因,并对PCR阳性产物测序鉴定.结果 49株菌中,36株菌对亚胺培南不敏感(MIC>4μg/ml),31株菌对美罗培由不敏感(MIC>4μg/ml),47株菌对厄他培南不敏感(MIC>2μg/ml).49株临床分离菌中23株菌改良Hodge试验刚性,包括9株弱阳性和14株强阳性.经过对菌株进行β内酰胺酶基因PCR和测序,发现9株Hodge弱阳性菌株中2株携带blaKPC-2,7株不携带碳青霉烯酶基因,但携带blaampC/blaESBL;14株强阳性菌株中4株携带blaKPC-2,8株携带blaIMP-4,2株携带blaIMP-8;26株改良Hodge试验阴性菌株均未携带碳青霉烯酶基因.所有49株菌均未检测到blaNDM-1.以碳青霉烯酶基因检测为标准,则改良Hodge试验对检测碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌中碳青霉烯酶的敏感度为100%,特异度为79%,阳性预测值为70%,阴性预测值为100%,准确性为86%.结论 改良Hodge试验具有很好的敏感性,但存在一些假阳性结果 .利用苯硼酸和苯唑西林可有效区分改良Hodge试验的假阳性和真阳性.     

苯妥英钠致大鼠骨质疏松模型的建立及维生素D预防作用的观察

目的：研究苯妥英钠致骨质疏松作用及维生素D的预防作用。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为4组(苯妥英钠模型组、D–半乳糖模型组、维生素D预防组、正常对照组),每组10只。其中,用苯妥英钠对苯妥英钠模型组及维生素D预防组大鼠连续灌胃60 d [54 mg/(kg?d)]。60 d后,对苯妥英钠模型组、D–半乳糖模型组、维生素D预防组和正常对照组的相关指标进行检测及比较组间差异。结果：苯妥英钠模型组骨钙[(592.87±120.89)μg]、磷[(173.88±15.98)μg]及血清钙[(2.65±0.09) mmol/L]、磷[(2.13±0.29) mmol/L]、超氧化物歧化酶[(104.40±3.58) NU/mgPro]含量均比正常对照组显著降低(P<0.01),血清碱性磷酸转移酶[(136.00±1.82) U/L]与正常对照组相比有显著升高(P<0.01),骨羟脯氨酸含量[(1128.974±460.77)μg],虽缺乏统计意义但相比于正常对照组仍有所降低,上述变化与D–半乳糖模型组的变化趋势相同,并比后者的变化更加显著。结论：长期大量摄入苯妥英钠可以导致大鼠发生骨质疏松的可能性增加,维生素D可以阻止或减缓这种变化趋势。     

2012~2014年鲍曼不动杆菌临床分布及耐药性分析

目的：了解南京医科大学第一附属医院2012~2014年鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumanmii,AB)的临床分布特点及耐药性变迁。方法：细菌鉴定采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪;药物敏感试验采用纸片琼脂扩散法(K-B法);耐药率比较运用SPSS 19.0软件处理;菌株分布及药敏结果以WHONET5.6软件进行分析。结果：2012~2014年,AB临床分离率分别为13.7%、11.5%、12.2%,分离率超过铜绿假单胞菌,仅次于大肠埃希菌。AB主要来源于呼吸道标本(79.2%),专业分布主要为重症监护病房(intensive care unit,ICU,44.6%)、外科(28.4%)、内科(22.5%)。AB对临床常用抗菌药物均呈现了很高的耐药性,大多数药物耐药率在70.0%以上,耐药率较低的药物有米诺环素(43.4%~55.8%)、阿米卡星(50.1%~58.4%),2013、2014年AB耐药率较2012年及以往资料有下降趋势。不同标本及专业来源的AB耐药性存在差异。结论：AB已成为引起临床感染的最常见非发酵菌,多引起呼吸系统感染,对常用抗菌药物耐药率高,但已有下降趋势,应继续规范抗菌药物的使用。     

绿脓假单胞菌多重耐药机制的研究

目的调查我院2003-2005年临床分离多重耐药绿脓假单胞菌的氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因存在状况；并研究整合子参与绿脓假单胞菌多重耐药的机制。方法纸片扩散法测定绿脓假单胞菌对14种抗菌药物的药物敏感性，并筛选出14株多重耐药菌株；聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因；聚合酶链反应检测整合子5’保守区的整合酶基因和3’保守区的qacE△1-sulI基因。对整合酶基因的阳性扩增产物的限制性片段长度多态性分析进行整合子分类，整合子可变区扩增并测序。结果14株绿脓假单胞菌对14种抗菌药（哌拉西林等）的耐药率为14．3％-100．0％；氨基糖苷类修饰酶基因ant（2”）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰ、ant（3”）-Ⅰ和aac（3）-Ⅰ检出率分别为78．6％、57．1％、57．1％、14．3％、7．1％、0；β内酰胺酶编码基因TEM和IMP的检出率分别为92．9％和42．9％，未检出VIM、OXA、PER、GES和SHV基因，1株外膜通道蛋白oprD2基因缺失；整合酶基因及qacE△1-sulI基因检出率分别为85．7％和78．6％，整合子可变区扩增有3种片段：1000、1300和1700，测序证实分别为aadA2、aadA6．odD和dfrⅫ-orfF-aadA2，其中aadA2是首次在绿脓假单胞菌的整合子中检出，aadA6-odD是一种新型的整合子可变区基因盒组合形式。Genbank号分别为DQ091178和DQ091179。结论我院多重耐药绿脓假单胞菌对B内酰胺类抗生素的耐药主要与TEM和IMP型耐药基因有关，对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant（2”）-Ⅰ、8aC（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅱ有关；整合子参与了绿脓假单胞菌的耐药和多重耐药。     

铕标记基因探针半定量检测丙型肝炎病毒RNA

目的 利用自行设计的引物、探针和新型铕螯合物BHHCT,建立一种半定量丙型肝炎病毒(HCV)RNA的检测方法。方法 收集44份丙型肝炎病人血清,20份正常人血清。利用中山大学达安基因有限公司RNA提取试剂提取HCV RNA,用自行设计的引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。扩增产物cDNA与微孔板上的捕捉探针杂交后,借助于其上游引物5′端带有的生物素,与标记有铕的链霉亲合素特异性结合,将铕连接到微孔板上,在特定波长激发光激发下,发出荧光,进行检测。结果 铕标记HCV RNA检测法的线性范围为102-106cDNA拷贝,敏感性、特异性均为100％。结论 铕标记RT-PCR检测HCV RNA法的线性范围宽,敏感性、特异性好,检测时间短,无放射性污染,有推广应用的价值。