GeneXpert实时荧光定量PCR快速检测艰难梭菌的临床评估

目的对GeneXpert实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测临床粪便标本中艰难梭菌的应用进行评估。方法采用双拭子蘸取临床未成形粪便标本,一支拭子用于GeneXpert实时荧光定量PCR检测艰难梭菌毒素基因tcdB,另一支用于常规厌氧菌培养检测;对GeneXpert实时荧光定量PCR检测结果与常规厌氧菌培养结果的一致性进行统计学分析,并计算GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值等参数。结果临床收集到141例未成形粪便标本,GeneXpert实时荧光定量PCR检出艰难梭菌毒素基因tcdB阳性42例,其中常规厌氧菌培养阳性34例,两者一致性较好(Kappa=0.775 0,P0.01),GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为87.2%、92.2%、81.0%和94.9%。结论 GeneXpert实时荧光定量PCR直接检测粪便标本中的艰难梭菌具有检测快速、操作简便等优点,有重要的临床应用价值。     

鲍曼不动杆菌耐药性与抗菌药物使用情况的相关性分析

目的了解鲍曼不动杆菌耐药性与抗菌药物使用情况的相关性,为临床合理用药、控制感染提供依据。方法回顾性调查上海交通大学医学院附属瑞金医院2006—2叭0年住院患者抗菌药物的使用情况,计算各类药物的使用强度;同时采用K—B法检测同期住院患者送检标本中分离的鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的耐药率;应用SPSS16．0统计软件进行数据分析。结果分离自住院患者的鲍曼不动杆菌对受试抗菌药物耐药率高,仅对阿米卡星、碳青霉烯类及p内酰胺酶抑制剂复方的耐药率相对较低。临床上氟喹诺酮类及头孢菌素类抗菌药物使用强度较高。鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率与碳青霉烯类抗生素的使用强度呈正相关（r均=0．975,P均0．05）。鲍曼不动杆菌对头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类和β内酰胺酶抑制剂复方的耐药率与这些药物的使用强度无相关性（P均〉0．05）。结论鲍曼不动杆菌耐药现象严重,需引起重视,经验治疗时可选择阿米卡星和β内酰胺酶抑制剂复方类药物,碳青霉烯类抗生素的使用应严格掌握适应证。     

同时产ArmA型16S rRNA甲基化酶及KPC-2型β-内酰胺酶泛耐药阴沟肠杆菌的研究

目的 探讨上海交通大学医学院附属瑞金医院分离的5株泛耐药阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶及16S rRNA甲基化酶的情况及两者之间的相关性.方法 用E test法检测5株泛耐药阴沟肠杆菌对10种抗菌药物的MIC值.PCR扩增16S rRNA甲基化酶基因armA、mtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA,β-内酰胺酶基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、CTX-M-25、PER-1、VEB-1.鸟枪克隆法克隆碳青霉烯酶基因,并对克隆片段进行测序.质粒接合试验验证碳青霉烯酶基因及16S rRNA甲基化酶基因是否具有转移性.脉冲场凝胶电泳(PFGE)法对5株菌进行分子分型.等电聚焦电泳法检测β-内酰胺酶等电点.Southern杂交法对耐药决定因子进行定位.结果 5株阴沟肠杆菌对10种抗菌药物的MIC值均＞32 mg/L.克隆的碳青霉稀酶基因为blaKPC-2,酶编码基因上游为一转座酶基因,两侧为复制靶位,下游为ISKpn6的插入序列,该序列包括一个重复序列和tnpA转座子,酶编码基因位于54.2 kb的一个非接合性大质粒上.等电聚焦电泳显示5株菌均产4种β-内酰胺酶(TEM-1,pI5.4;KPC-2,pI6.7;SHV-12,pI8.2;CTX-M-14,pI8.4).16S rRNA甲基化酶基因位于接合性质粒上,而blaKPC-2基因则位于非接合性质粒上,5株菌PFGE型别一致.结论 5株泛耐药阴沟肠杆菌对碳青霉烯类耐药由产碳青霉烯酶KPC-2所介导.blaKPC-2与armA型16S rRNA甲基化酶基因由两条不同的质粒编码,不存在相关性.临床医院应加强监控,以防止交叉感染.     

重组溶葡萄球菌素对烧伤创面分离的金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性评估

目的 评估重组溶葡萄球菌素对烧伤创面分离的金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性.方法 收集烧伤创面分离的金黄色葡萄球菌共171株.采用琼脂稀释法测定临床烧伤常用药物万古霉素、红霉素、克林霉素、头孢西丁及磺胺甲噁唑对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC);根据头孢西丁的MIC值区分耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA);根据万古霉素、红霉素、克林霉素、磺胺甲噁唑的药物敏感试验结果对金黄色葡萄球菌进行耐药性分析.采用微量肉汤稀释法检测重组溶葡萄球菌素对金黄色葡萄球菌的MIC,计算50％最低抑菌浓度(MIC50)和90％最低抑菌浓度(MIC90).结果 根据药物敏感试验结果,收集的171株金黄色葡萄球菌对磺胺甲噁唑、红霉素、克林霉素和万古霉素的耐药率分别为99.4％、88.3％、87.1％和0,其中MRSA有146株(占85.4％).重组溶葡萄球菌素对金黄色葡萄球菌的MIC范围为0.015～0.5 U/mL,MIC50为＜0.015 U/mL,MIC90为0.03 U/mL.结论 重组溶葡萄球菌素对金黄色葡萄球菌具有较好的体外抗菌活性.在金黄色葡萄球菌耐药性日益增强的情况下,对于临床烧伤创面感染的预防和治疗,重组溶葡萄球菌素是一种极具开发潜力的新药.     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性。方法收集产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床菌株30株,应用PCR基因扩增技术及DNA测序方法,分别对其TEM、SHV、CTX-M、VEB、PER编码基因进行分析。结果在30株菌株中有26株为CTX-M型,占86.67%;其中CTX-M-9型共计16株占61.5%,CTX-M-1型8株占30.8%,CTX-M-2型7株占26.9%;同时产CTX-M-1型及CTX-M-2型共4株占15.4%,产CTX-M-2型及CTX-M-9型1株占3.8%,产CTX-M-1型及CTX-M-9型1株占3.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要临床流行基因型是CTX-M-9型。     

复方利多卡因乳膏的抗菌效果评估

目的 评估复方利多卡因乳膏对尿路感染常见细菌的抗菌效果.方法 用复方利多卡因乳膏处理6株质控标准菌株和7株临床分离菌株,在作用2h前后分组培养.结果 用复方利多卡因处理2h后有明显的抗菌效果,其对试验中的革兰阴性杆菌杀菌率可达到100.0％,对革兰阳性菌杀菌力也达到＞99.99％.结论 复方利多卡因乳膏作用2h后,对常见创伤、外科小手术及导管插入前,处理麻醉过程中的常见及耐药致病菌有明显的抗菌作用.     

抗感染领域的世界性难题:细菌耐药性

抗生素的发现是20世纪最辉煌的现代医药成果。20世纪40—70年代被称为抗生素的“黄金时代”。由于抗生素的临床应用，许多曾被认为是致命的感染性疾病得以治愈，从而显提高了人类的预期寿命。20世纪60年代末，某些医学权威冲动地宣称，感染性疾病已成为历史。但今天，在抗生素这     

PVL阴性MRSA的基因多态性研究

Objective In order to find out the epidemicological spread of MRSA in our hospital,and provide laboratory support for hospital infection control,we investigate the genetic polymorphism of PVL meticillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Methods 71 MRSA strains isolated from our hospital from December 2006 to August 2007.The genetic polymorphism a-nalysis of 16 MRSA strains were performed by using pulsed-field gel electrophoresis(PFGE)、staphylococcus cassette chromosome mec (SCCmec) typing.Results PFGE typing:7 genotype( A、B、C、D、G、I、J)were found.They were typeA(1);typeB(1);typeC2(8 subtype);typeD(3);typeG(1);typeI(1)(typeA(1);typeJ(1);SCCmec typing: the main types were SCCmec Ⅱ (50 %);SCCmec Ⅲ (50%).Conclusion By studying the genetic polymorphism of PVL-meticillin-resistant Staphylococcus aureus(MRSA) in our hospital,we get to Know the epidemiological spread of MRSA in our hospital,it provide molecular epidemiological evidence for hospital infection control of MRSA.     

产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌的基因型研究

目的明确台州地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的表型和基因型的流行特征以及医院感染的发生率。方法对87株肠杆菌科细菌采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)规定的标准进行ESBLs表型筛选和确定,并用聚合酶链反应(PCR)和序列分析确定ESBLs的基因型。结果肠杆菌科细菌产ESBLs菌株头胞噻肟的耐药率明显高于头胞他啶;经序列分析后ESBLs基因型别确定为CTX-M-9、CTX-M-1,而CTX-M-2测序结果不理想。结论产ESBLs的肠杆菌科细菌在台州地区较普遍,以CTX-M-9最为常见。     

上海地区大环内酯类抗生素耐药肺炎链球菌的遗传学分析

目的 了解上海地区肺炎链球菌中大环内酯类抗生素高耐药菌株的同源性.方法 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对47株临床分离大环内酯类抗生素耐药肺炎链球菌(MRSP)进行同源性分析,并运用多位点序列分型(MIST)对其中6株多重耐药MRSP进行分子遗传学分析,结合血清分型推测其与国际流行克隆株的关系.结果 上海地区ermB和mefE基因阳性大环内酯类抗生素高耐肺炎链球菌中存在流行克隆A型(45%)、B型(17%).PFGE图谱A型的6株多重耐药MRSP菌株都属于亚洲流行克隆CC236(Taiwan19F-14 clone).上海地区发现一个新的MIST型别ST2116(15-16-19-15-6-20-125),推测其由CC236经基因水平交换进化而来.结论上海地区大环内酯类高耐肺炎链球菌的快速增加部分是由于耐药克隆株的播散所致.