瑞金医院烧伤中心甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌同源性分析

目的从分子生物学水平分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)在上海瑞金医院烧伤中心院内感染的流行状况。方法用 WHONET5统计软件分析2003—2005年瑞金医院烧伤中心 MRSA 的分布状况;用随机扩增多态 DNA(RAPD)技术对本中心住院患者临床标本中分离的17株 MRSA 进行同源性分析。结果分离的17株 MRSA 为同一 RAPD 型(引物为 ERIC2、RAPD7)。结论本中心多年来持续存在和流行的 MRSA 为同一个型别,应成为瑞金医院烧伤中心抗感染治疗和院内感染控制的重点菌株。     

显色培养基联合简单生化试验鉴定常见氧化酶阴性革兰阴性杆菌的能力验证

目的对显色培养基联合简单生化反应鉴定常见氧化酶阴性革兰阴性杆菌的方案进行能力验证。方法以VITEK 2Compact全自动微生物分析系统鉴定细菌作为参考方法,计算联合应用科玛嘉定位显色培养基、吲哚试验、鸟氨酸脱羧酶试验、赖氨酸脱羧酶试验鉴定临床标本中常见氧化酶阴性革兰阴性杆菌的敏感度、特异性、似然比、约登指数、Kappa值等参数并进行McNemar检验,分析这一方案的真实性、与参考方法的一致性并比较经济成本。结果通过对8个属10个种共318株氧化酶阴性革兰阴性杆菌鉴定结果的分析表明,黏质沙雷菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌的敏感度和特异性均为100％,大肠埃希菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌的敏感度和特异性均大于90％,阴沟肠杆菌、产酸克雷伯杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌和奇异变形杆菌的特异性均大于90％,但灵敏度为75％～90％;除了弗劳地枸橼酸杆菌的Kappa值为0．5947外,其余均大于0．85;McNemar检验P值均大于0．05;本研究方案成本只有参考方法的10％。结论显色培养基联合简单生化试验可快速经济有效地鉴定数种常见氧化酶阴性革兰阴性杆菌。     

革兰阴性杆菌中VEB-1型超广谱β-内酰胺酶的分布情况调查

目的分析上海第二医科大学附属瑞金医院(以下简称瑞金医院)和上海交通大学附属第六人民医院(简称市六医院)分离的340株革兰阴性杆菌中VEB-1型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的分布，并分析瑞金医院灼伤科患者标本中分离的产VEB-1型ESBL铜绿假单胞菌是否有同源性。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增细菌的veb-1基因，用PCR-RFLP检测并分型整合子，以ERIC2为引物，采用随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)对瑞金医院灼伤科分离到的16株产VEB-1型ESBL的铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果市六医院分离的菌株中未检测到veb-1基因，瑞金医院仅在灼伤科来源的铜绿假单胞菌中检出VEB-1型ESBL，且这些菌株用RAPD分析具有同源性。结论瑞金医院灼伤科流行携带veb-1型ESBL基因的铜绿假单胞菌。     

154例深静脉置管相关的院内感染分析

目的分析临床深静脉导管（DVC）培养的病原学特征和耐药性。方法回顾性分析瑞金医院2010年全年送检的深静脉导管的病原学及其耐药性。结果991份送检导管病原学阳性154例（15．54％）,检出病原菌176株,其中G^＋菌、G^-菌和真菌各占41．47％、36．36％和22．17％;五种常见病原菌分别是表皮葡萄球菌（20．45％）、鲍曼不动杆菌（15．34％）、金黄色葡萄球菌（11．93％）、白色假丝酵母菌（11．36％）和铜绿假单胞菌（6．25％）。金黄色葡萄球菌中MRSA占94．12％,凝固酶阴性葡萄球菌中MRSen占69．44％;鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌普遍存在多重耐药现象,鲍曼不动杆菌（26．92％）和铜绿假单胞菌（9．09％）甚至出现全耐药。结论深静脉导管感染为院内感染,检出的病原菌多为耐药菌,无菌置管、加强导管的护理和加强病原学监测是控制DVC感染的关键。     

中心静脉导管病原菌污染调查

目的探讨中心静脉导管（CVC）的病原学特征。方法回顾分析近5年临床各科送检的CVC病原学结果及细菌耐药性。结果3189份CVC标本中471份（14.77%）检出致病菌514株,G＋球菌、G-杆菌和真菌分别占42.41%、40.66%和16.93%;最常见的致病菌分别为表皮葡萄球菌（15.56%）、金黄色葡萄球菌（13.81%）、铜绿假单胞菌（13.23%）、肺炎克雷伯菌（7.59%）和鲍氏不动杆菌（6.23%）;91.18%为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,88.57%为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）,12.00%肠杆菌科产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）;44.12%铜绿假单胞菌和34.38%鲍氏不动杆菌全部耐药。结论CVC检出病原菌以耐药菌为主,应加强病原学监测及导管护理,是控制导管相关性感染的关键。     

大肠埃希菌产PER-1型超广谱β-内酰胺酶的研究

目的检测大肠埃希菌产PER-1型超广谱β-内酰胺酶的发生率及其耐药特点。方法采用双纸片增效确证试验进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的表型检测，对表型阳性菌株用聚合酶链反应（PCR）和PCR产物测序方法确定超广谱β-内酰胺酶的基因型。结果167株大肠埃希菌中有50株产ESBLs，占29．9oA（50／167）；6株产PER-1型ESBLs，占3．6oA（6／167）。6株产PER-1型ESBLs大肠埃希菌均对头孢他啶和头孢噻肟耐药．5株对头孢西丁耐药，4株对阿米卡星敏感．全部菌株对亚胺培南敏感。结论大肠埃希菌中检测到产PER-1型超广谱β-内酰胺酶，且其耐药和多重耐药性严重，应引起重视。     

错配PCR对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecI基因点突变的分析

目的建立用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)上mecI常见突变位点的错配聚合酶链反应(PCR),并用该方法分析上海地区分离MRSA中mecI G→T突变的发生情况。方法用头孢西丁纸片扩散法、mecA基因PCR法检测MRSA,用琼脂稀释法检测细菌的最低抑菌浓度(MIC),用PCR检测mecI基因,建立错配PCR并用20株mecI基因和mec启动子区分析清楚的菌株对该方法进行评价,用错配PCR分析111株MRSA中mecI基因的突变情况。结果111株mecI阳性的MRSA中,mecI43位突变的5株,mecI202位突变的102株,另有4株MRSA的mecI43位和202位碱基均无突变。结论就其简便易行和准确性而言,错配PCR可用于检测mecI上已知的突变。     

产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌的基因型研究

目的明确台州地区产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肠杆菌科细菌的表型和基因型的流行特征以及医院感染的发生率。方法对87株肠杆菌科细菌采用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）规定的标准进行ESBLs表型筛选和确定,并用聚合酶链反应（PCR）和序列分析确定ESBLs的基因型。结果肠杆菌科细菌产ESBLs菌株头胞噻肟的耐药率明显高于头胞他啶;经序列分析后ESBLs基因型别确定为CTX-M-9、CTX-M-1,而CTX-M-2测序结果不理想。结论产ESBLs的肠杆菌科细菌在台州地区较普遍,以CTX-M-9最为常见。     

上海地区五所医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学调查

目的 了解上海地区甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学特点.方法 从上海5所医院收集140株MRSA,采用琼脂稀释法和肉汤稀释法检测其耐药性;利用PCR方法检测MRSA的PVL基因和SCCmec型别;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对MRSA做同源性分析并且将主要流行型别的39株MRSA进行spa分型.结果 140株MRSA对庆大霉素、磺胺甲嚼唑和克林霉素的耐药率分别为98.6%(138/140)、98.6%(138/140)和97.9%(137/140);对红霉素、环丙沙星和四环素的耐药率均在80%以上,对利福平的耐药率为10.7%(15/140);未发现对达托霉素、替考拉宁和万古霉素耐药的菌株.菌株MRSA PvL均为阴性,以SCCmecⅢ为主,达45.7%(64/140);其他型别依次为SCCmecⅢ a 25.0%(35/140)、SCCmecⅢb 14.3%(20/140)、SCCmecⅢ10.7%(15/140).SCCmecⅣ最少,占4.3%(6/140).PFGE图谱有16种类型(A～P型),以C型[30.7%(43/140)]、B型[13.6%(191140)]和Ⅰ型[10.7%(15/140)]为主;对主要流行克隆的39株MRSA进行spa分型,共得到t002[33.33%(13/39)]、t030[12.82%(5/39)]、t037[51.28%(20/39)]、t459[2.57%(1/39)]4种类型.结论 上海地区5所医院MRSA共有16种流行克隆株和4种spa型,其中PVL阴性、SCCmecⅢ对红霉素、环丙沙星、克林霉素、四环素、庆大霉素、磺胺甲唑耐药的MRSA克隆可能是上海地区HA-MRSA主要流行克隆株,是医院感染控制的重点,因此临床医生在治疗HA-MRSA感染患者时,要谨慎使用抗菌药物.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产质粒介导AmpC酶的耐药分布及基因型研究

质粒介导的AmpC β内酰胺酶对第三代头孢菌素、头霉素类、单环类等β内酰胺类抗牛素不同程度的耐药,它与超广谱β内酰胺酶(ESBLs)最主要的表型区别是耐药谱的扩大,且不能被克拉维酸抑制.这类酶的出现使得临床对革兰阴性致病菌所能使用的备选抗生索范围进一步缩小.