重组分泌型内皮抑素腺相关病毒的包装及在膀胱癌EJ细胞系中的表达

目的:包装重组分泌型内皮抑素腺相关病毒(rAAV-Endostatin)制备内皮抑素原位基因治疗膀胱癌的基因载体药物。方法:采用分子生物学方法构建腺相关病毒质粒载体(pAAV-IgG-Endostatin),酶切、测序鉴定;经质粒共转染方法包装rAAV-Endostatin,测定病毒颗粒滴度并电镜下鉴定;转染膀胱癌EJ细胞后,ELISA法测定重组内皮抑素的浓度。结果:pAAV-IgG-Endostatin的构建和rAAV-Endostatin的包装均获成功,病毒滴度达1.0×1012v.p/ml。感染EJ细胞后内皮抑素成功表达并分泌,上清液中浓度达54.09ng/ml。结论:rAAV-Endostatin载体的构建、包装与表达的成功为rAAV-Endostatin原位基因治疗膀胱癌的实验研究奠定了基础。     

超氧化物歧化酶与膀胱癌分级分期关系的研究

为了解ＳＯＤ活性与膀胱癌生物学行为的关系，采用肾上腺素自体氧化法分析了２７例膀胱移行细胞癌病人肿瘤组织及非肿瘤粘膜，以及１０例非肿瘤病人膀胱粘膜的ＳＯＤ活性。结果显示：肿瘤组织ＳＯＤ活性低于正常组织，并与分级分期有关；复发及多发膀胱癌病人非瘤粘膜ＳＯＤ活性低于非肿瘤病人的膀胱粘膜（Ｐ＜０．０１）。ＳＯＤ活性的降低可能是膀胱癌的早期表现，并与生物学行为有关     

前列腺癌MDR－PGP170与突变P53表达

应用单克隆抗体（ＭＤＲ－Ｃ２１９、ＰＡｂ－ＤＯ－１）免疫组化技术对３８例石蜡包埋的前列腺癌与１５例良性前列腺增生（ＢＰＨ）组织切片中的ＭＤＲ－ＰＧＰ与突变Ｐ５３的表达进行了比较研究。结果显示：在３８例前列腺癌切片中ＭＤＲ－ＰＧＰ与突变Ｐ５３蛋白的阳性表达率为７１．０％和６０．５％，１５例ＢＰＨ组织中仅３例（２０．０％）显示ＭＤＲ－ＰＧＰ阳性染色，突变Ｐ５３在所有ＢＰＨ中未见阳性染色。在高分化、中等分化和低分化前列腺癌中ＭＤＲ－ＰＧＰ的阳性表达率为５３．８％、７８．５％和８１．１％。突变Ｐ５３的阳性表达率为３０．８％、７１．４％和７２．７％。结果提示：（１）ＭＤＲ－ＰＧＰ的过度表达是前列腺癌产生抗药的主要机制；（２）ＭＤＲ－ＰＧＰ与突变Ｐ５３的过度表达可能是前列腺癌细胞适存、转化、增殖与进展的重要方式；（３）突变Ｐ５３的过度表达对ＭＤＲ－１基因可能具有调节与增强效应。     

膀胱癌组织P~(53)基因表达的研究

本文采用免疫组织化学技术对32例膀胱癌组织P~(53)基因表达进行了检测,试图探讨抑癌基因(P~(53))与膀胱癌组织病理分级及生物学行为的相互关系。结果显示,32例膀胱癌组织P~(53)基因蛋白总阳性表达率为50％,G_1期为30％,G_2期为44.4％,G_3期为69.2％。化疗后复发的12例膀胱癌组织P~(53)阳性表达率为75％。实验结果提示P~(53)基因表达水平与膀胱癌的生物行为及病理学分级密切相关。     

基因重组腺相关病毒内皮抑素基因治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨基因重组腺相关病毒(rAAV)内皮抑素(ES)基因治疗膀胱癌的效果.方法 通过rAAV增强绿色荧光蛋白(EGFP)转染膀胱肿瘤T24细胞株确定rAAV对细胞的转染效率;rAAV-ES体外转染T24细胞及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),偶氮唑盐法、流式细胞仪检测其对T24细胞及HUVEC细胞凋亡的诱导作用;构建裸鼠膀胱癌模型,观察肿瘤生长情况及测量微血管密度(MVD),分析rAAV-ES基因治疗膀胱癌的体内效果.结果 rAAV-EGFP转染T24细胞后可以稳定表达EGFP;rAAV-ES转染T24细胞72 h后.细胞凋亡率37.02%,明显高于空病毒转染组(7.90%)和空白对照组(0.30%).差异均有统计学意义(均P＜0.05).荷瘤裸鼠瘤内注射rAAV-ES9 d后,肿瘤生长受到明显抑制;治疗4周结束后rAAV-ES组、rAAV-MCS组和空白对照组肿瘤体积分别为(0.75±0.08)、(1.27±0.13)、(1.24±0.17)cm~3,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体内外实验表明rAAV-ES可有效抑制膀胱癌的血管生成和肿瘤生长.     

重组hIFN-α-2b-BCG对小鼠原位膀胱肿瘤免疫效应的研究

目的 探讨重组hIFN-α-2b-BCG对原位膀胱肿瘤小鼠体内抗肿瘤免疫反应及其作用机制.方法 构建C57BL/6原位膀胱肿瘤小鼠模型,采用流式细胞仪对小鼠膀胱灌注治疗后的淋巴细胞亚群进行分析,并测定小鼠血清中mTNF-α和mIL-12的水平,了解小鼠全身免疫状况.肿瘤组织冰冻切片进行T细胞亚群的免疫组织化学分析,免疫组化检测肿瘤Fas表达,了解膀胱局部免疫反应. 结果 重组BCG灌注治疗后小鼠外周血CD4+ T细胞比例明显增高,CD8+ T细胞比例无明显变化,CD4+ /CD8+比例为2.63,与野生BCG组(2.10)比较差异有统计学意义(P＜0.05).荷瘤小鼠外周血中Th1型细胞因子mTNF-α和mIL-12灌注治疗后比PBS对照组大幅提高,重组BCG组mTNF-α为806 pg/ml,mIL-12为860 pg/ml,与野生BCG组及野生BCG联合IFN组比较差异无统计学意义(P＞0.05).重组BCG组瘤组织内CD3、CD4和CD5检测强阳性,显著高于PBS对照组(P＜0.05),重组BCG组和野生BCG加IFN组瘤组织CD4+、重组BCG组CD8+检测值显著高于野生BCG组(P＜0.05).BCG灌注后荷瘤小鼠膀胱肿瘤表达Fas明显高于PBS对照组(P＜0.05). 结论 重组hIFN-α-2b-BCG具有在小鼠体内调节系统及局部免疫能力的作用,纠正荷瘤小鼠淋巴细胞亚群的比例失调,增强局部淋巴细胞浸润,具有增强Th1型细胞因子产生作用,上调荷瘤小鼠Fas的表达,诱导对膀胱肿瘤细胞的免疫攻击.

Abstract：

Objective To study local and systemic immune response in an animal model treated with recombinant hIFN-α-2b-BCG instillation. Methods The MB49 orthotopic bladder cancer model in C57BL/6 mice was established and treated separately with rBCG, wild BCG, wild BCG combined with IFN-α-2b and PBS as the control. The changes of lymphocyte subgroups in peripheral blood were analyzed with FCM, and mTNF-α and mIL-12 in peripheral blood of mice were detected with ELISA.Immunohistochemistry was carried out to detect the local immune reaction, T cell subsets and FAS, in bladder cancer after being treated with rBCG or wBCG. Results The content of CD4+ T lymphocyte was up-regulated in the rBCG group. The CD4+/CD8+ ratio of 2. 63 was up-regulated than pretreatment, significantly different than that of wBCG group(P＜0.05). ELISA assay showed that BCG significantly up-regulated the level of mTNF-α and mIL-12 in serum of orthotopie murine bladder cancer mice. The mTNF-α 806 pg/ml, mIL-12 860 pg/ml in rBCG group, was not significantly higher than those in wBCG group and combination group. The immunocompetent cell numbers with CD3, CD4,CD8 phenotype increased significantly in the tumor tissue of BCG treated group than the control(P＜0.05). The results of CD4+ in rBCG group and the combination group, and CD8+ in rBCG group were significantly higher than that of the wBCG(P＜0.05). The expression of Fas in tumor tissues treated with intravesical BCG was increased(P＜0. 05). Conclusions The recombinant IFN-α-2b-BCG can retrieve the disproportion of systemic lymphocyte subgroups, and increases Th1-type factors and local Fas expression in orthotopic murine bladder cancer. The recombinant IFN-α-2b-BCG is effective in regulating local and systemic immune reaction in orthotopic murine bladder cancer model.     

雄激素非依赖型前列腺癌发生机制的研究进展

自从20世纪40年代Huggins确立了剥夺雄激素治疗前列腺癌和转移癌以来,剥夺雄激素疗法已经成为治疗前列腺癌和转移癌的有效经典方法.然而,这一经典疗法并非对所有前列腺癌患者都有效.因为在临床实践中发现几乎所有剥夺雄激素治疗的患者最终都将发展成雄激素非依赖性前列腺癌.因此,雄激素非依赖性前列腺癌不仅是目前临床治疗的难点,也是基础与临床研究的热点问题.     

宫内节育器异位膀胱形成结石二例

宫内节育器（IUD）一直是育龄妇女的主要避孕措施。目前，对放置IUD后异位于膀胱形成结石的报道较少，2005年以来我院收治2例此类患者，现将诊治过程报告如下。     

间质性膀胱炎膀胱黏膜组织病理和超微病理的相关研究

目的:探讨间质性膀胱炎(IC)膀胱黏膜上皮组织病理学与超微病理的改变与特征.方法:收集16例女性IC患者的膀胱黏膜标本为IC组,16例女性输尿管结石患者标本为对照组.IC患者临床表现主要为尿频、尿急、膀胱充盈后疼痛及排尿后疼痛减轻,尿常规与尿培养阴性,盆腔症状评分(PUF)均在15分以上,钾离子试验阳性,膀胱镜检查可见膀胱黏膜多发性球状出血点.采用普通光镜和透射电镜的方法观察膀胱黏膜上皮和黏膜肥大细胞浸润及脱颗粒情况.结果:光镜下IC患者膀胱黏膜上皮发生断裂或缺失,黏膜有大量肥大细胞浸润,肥大细胞计数同正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);电镜下IC患者膀胱黏膜伞状细胞发生缺失或者相邻伞状细胞间连接缺失,肥大细胞大部分呈脱颗粒状态,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:膀胱黏膜上皮通透性增加及膀胱黏膜肥大细胞增多和激活在IC的发病中起着重要的作用.     

NM23基因相关信号通路在肿瘤转移中作用机制的研究进展

浸润和转移是恶性肿瘤的重要特征,也给肿瘤的治疗带来困难,是预后不良的重要因素.转移抑制因子23(non-metastasis,NM23)基因是最早发现的抗肿瘤转移基因之一.现在已经发现NM23是一个基因家族,包括NM23-H1、NM23-H2等重要的基因家族成员.研究表明NM23基因表达与实体瘤转移抑制有关,在很多实体瘤中可以作为进展和预后的分子标记.随着对NM23基因调控肿瘤转移的分子机制的研究的进一步开展,已经发现了一些NM23肿瘤转移抑制通路上下游的相关调控分子,为进一步的信号通路研究创造了条件.本文概述了近年来对NM23基因转移抑制通路研究的新近展,提出了以后可能的研究方向和需要解决的关键问题.