中国HIV感染者细胞毒性淋巴细胞内穿孔素的差异性表达

目的 了解中国HIV感染者细胞毒性相关的NK细胞及CD8^＋T细胞内穿孔素表达水平，探讨HIV感染过程中穿孔素表达与机体免疫功能的关系。方法 采集31例未经抗病毒治疗的HIV感染者和经过高效抗逆转录病毒疗法（HAAS）治疗的17例HIV／AIDS患者以及15例健康对照的抗凝全血，应用流式细胞仪胞内染色法检测CD56^＋／CD3^-、CD3^-／CD16^＋NK细胞及CD8^＋／CD3^＋内穿孔素表达的百分数，分析其与NK细胞绝对值、NK细胞百分数、CD4^＋T、CD8^＋T淋巴细胞绝对值及血浆病毒载量的相关性。结果 中国HIV感染者的NK细胞CD56^＋／CD3^-及CD3^-／CD16^＋亚群穿孔素表达百分数（平均13．17％，平均24．05％）高于CD8^＋T细胞穿孔素表达百分数（平均9．03％）；NK细胞内穿孔素表达低于健康对照（P〈0．05，P〈0．05），CD8^＋T细胞内穿孔素表达高于健康对照（P〈0．05）；NK细胞及CD8^＋T细胞内穿孔素表达水平与其绝对计数显著相关，与疾病进展不相关。HAART治疗组NK细胞内穿孔素表达升高，CD8T^＋细胞内穿孔素表达无显著变化。结论 中国HIV感染者NK细胞内穿孔素表达降低，抗病毒治疗后升高；CD8^＋T细胞内穿孔素表达升高，抗病毒治疗后无显著变化。     

中国HIV-1感染疾病长期不进展者CCR2-64I、SDF1-3′A和CCR5△32的基因变异研究

目的探讨CCR2-64I、SDF1-3′A、CCR5△32基因变异对中国HIV-1感染疾病长期不进展者(long-term nonprogressors,LTNPs)疾病进程的影响.方法收集17例中国HIV-1感染LTNPs和39例中国HIV-1感染疾病典型进展者(typical progressors,TPs)的抗凝全血标本,用全自动核酸提取仪提取基因组DNA,采用PCR/RFLP技术对CCR2、SDF1、CCR5基因进行检测分析.结果LTNP组的CCR2-64I、SDF1-3′A基因突变率分别为50%和62.5%,TP组的CCR2-64I和SDF1-3′A基因突变率分别为23.08%、33.33%,LTNP组CCR2-64I、SDF1-3′A基因突变率明显高于TP组(P＜0.05);LTNP组有1例CCR5△32杂合突变,未发现纯合变异,而TP组未发现CCR5△32突变.结论CCR2-64I、SDF1-3′A和CCR5△32基因突变可能是中国HIV-1感染者疾病长期不进展的保护性因素之一.     

利用电泳滴定曲线选择多核苷酸磷酸化酶快速离子交换层析的最佳条件

目的：选择多核苷酸磷酸化酶快速离子交换层析的最佳条件,方法：制备大肠杆菌提取物的电泳滴定曲线,根据该曲线选择快速离子交换怪析ＭｏｎｏＳＩ柱的洗脱缓冲液的ｐＨ。结果：根据该滴定曲线选择ｐＨ８．０作为快速离子交换层析ＭｏｎｏＳＩ柱的洗脱缓冲液的ｐＨ,在该条件下只一步层析,得到的多核苷酸酸化酶的比活性提高２５００倍,结论：电泳滴定曲线法能够用于离子交换层析的最佳条件的选择。     

HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～C4区中和抗体保守表位氨基酸变异研究

目的：研究HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～CA区中和抗体保守表位氨基酸变异特征，探讨中和抗体表位变异与疾病进展关系，为开展中和抗体免疫治疗及疫苗设计奠定理论基础。方法：RT-PCR及nest-PCR扩增无症状HIV感染者、AIDS患者及疾病长期不进展者HIV-1 gp120 env C3～CA区基因，双脱氧终止法进行核酸序列测定，翻译为氨基酸序列，与HIV-1 Sequence Database参考毒株比对识别中和抗体保守表位氨基酸的变异。结果：HIVgp120 C3～CA区，无症状HIV感染者／AIDS患者CD4结合位点（CD4BS）、CD4诱导（CD4i）、2G12中和抗体保守表位氨基酸均存在变异，长期不进展者2G12中和抗体表位氨基酸存在变异，三组病例表位突变率差异未达显著性（P〉0．05）；CD4BS、CD4i．2G12变异表位构成比分别为15．8％、31．6％、52．6％，2G12表位变异高于CD4BS和CD4i表位，差异具有显著性（P〈0．05）；CD4BS表位变异见于K421R，CIMi表位变异见于R419S／K，K421R，均为单位点氨基酸变异，2G12表位变异见于S334N，N332E／Q，N386D，N392S／T，N448K／I，单、双位点氨基酸变异各半。结论：HIV-1包膜糖蛋白gp120 C3～CA区，无症状HIV感染者／AIDS患者CD4BS、CD4i、2G12中和抗体保守表位氨基酸均存在变异，长期不进展者表位氨基酸相对稳定，目前发现2G12表位存在变异。中和抗体表位中，2G12表位变异较CD4BS和CD4i表位多见。不同类型中和抗体保守表位氨基酸位点变异程度存在差异。     

中国HIV/AIDS典型进展者与疾病长期不进展者中和抗体保守表位氨基酸变异比较研究

目的 研究中国HIV/AIDS典型进展者及疾病长期不进展者(LTNP)中和抗体保守表位氨基酸变异,探讨中和抗体表位变异与疾病进展关系,为开展中和抗体免疫治疗和疫苗设计奠定理论基础.方法 RT-PCR及巢式PCR扩增HIV/AIDS典型进展者及LTNP的HIV-1 gp120 C2～C3区基因,双脱氧终止法进行核酸序列测定,翻译为氨基酸序列,与HIV-1 Sequence Database参考毒株比对识别中和抗体保守表位氨基酸变异.结果 HIV/AIDS典型进展者CD4结合位点(CD4BS)、CD4诱导(CD4i)、2G12中和抗体保守表位氨基酸均存在变异,LTNP 2G12中和抗体保守表位氨基酸存在变异;LTNP各表位突变率较典型进展的HIV感染者/AIDS患者有降低趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);CD4BS、CD4i、2G12变异表位构成比分别为25.0%、22.9%、52.1%,2G12表位变异明显高于CD4BS和CD4i表位,差异有统计学意义(P＜0.01);CD4BS和CD4i保守表位变异多见于E370Q(10.8%),2G12保守表位变异多见于N295V(18.9%)和T297I(9.5%).结论 中国HIV感染人群中,LTNP中和抗体保守表位氨基酸构成相对稳定,变异较典型进展的HIV感染者/AIDS患者少见,目前发现2G12中和抗体表位存在较低水平变异.中和抗体表位中,2G12表位变异较CD4BS和CD4i表位多见,各类型中和抗体保守表位氨基酸位点的变异程度存在差异.     

HAART治疗后不同免疫应答人群T细胞特征研究

目的探讨HIV感染者经高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后不同免疫应答情况下T细胞的免疫特征。方法选取中国医科大学附属第一医院经HAART治疗的HIV感染者27例,按照免疫应答情况将其分为免疫无应答者(INR,14例)和免疫应答者(RES,13例),另有健康对照者(NC)25例。利用流式细胞仪对上述人群CD4~+T细胞数量、胸腺输出功能、活化及凋亡情况进行分析比较。结果 HIV感染者在HAART治疗后CD4~+T细胞数量持续增长,RES组CD4~+T细胞数量明显高于INR组。感染者治疗后的胸腺输出功能与CD4~+T细胞数量呈正相关(r=0.503 7,P=0.012 1),INR的胸腺输出功能显著低于RES(P0.05)。感染者CD4~+T细胞活化水平与CD4~+T细胞数量呈负相关(r=-0.469 7,P=0.017 8),INR的活化水平显著高于RES(P0.01)。感染者细胞凋亡水平与CD4~+T细胞数量呈反比(r=-0.547 2,P=0.018 7),INR的CD4~+T细胞凋亡水平明显高于RES(P0.01)。结论较低的胸腺输出功能、过度的活化及凋亡水平对抗病毒治疗后的免疫重建都将产生不利的影响。     

中国HIV-1感染人群中和抗体水平与疾病进展关系研究

目的 研究中国HIV感染者、AIDS患者及疾病长期不进展者（LTNP）HIV-1中和抗体水平,探讨中和抗体对HIV-1感染疾病进程的影响.方法 提取正常人外周血单个核细胞（PBMC）,应用HIV-1 SF33毒株进行Single-Round PBMC中和试验,流式细胞仪分析CD4＋T细胞内p24-Ag表达.Aleast-squares regression计算中和抗体滴度.结果 HIV感染者、AIDS患者及LTNP中和抗体平均滴度分别为1：29.09、1：22.07、1：154.37.LTNP中和抗体滴度显著高于HIV感染者（t=-2.220,P＜0.05）及AIDS患者（t=-3.812,P＜0.01）;HIV感染者与AIDS患者中和抗体滴度差异无统计学意义（t=0.424,P＞0.05）.结论 中和抗体水平影响中国HIV感染者疾病进展,高水平中和抗体有利于延缓病情进展.     

HIV/AIDS患者特异性细胞毒性T细胞功能的研究

目的 了解中国HIV／AIDS患者HIV特异性细胞毒性T细胞(CTL)功能。方法 将覆盖HIV-1 P15、P17和P24 Gag全长的94个重叠多肽作为抗原，用IFN-γ ELISPOT方法检测HIV／AIDS患者HIV-1特异性CTL功能。结果 HIV-1抗原多肽P17-15、P17-16、P24-7、P17-8，P24-28最易被HIV／AIDS患者特异性CTL识别。HIV感染者识别HIV-1多肽的数量和强度均高于AIDS患者。结论 我国HTV／AIDS患者体内存在识别不同HIV-1 Gag多肽的特异性CTL，且HIV特异性CTL功能与疾病进展相关。     

三、四代酶联免疫吸附试验应用于HIV-1早期感染者的比较

目的 评价三代ELISA及四代ELISA对于HIV早期感染血样的灵敏度、窗口期和一致率.方法 收集2008至2010年在沈阳市的男男同性恋人群随访中发现HIV抗体阳转及中国医科大学附属第一医院就诊患者中发现的蛋白印迹试验(WB)确认带型不全患者HIV早期感染者血浆67份,进行三代ELISA、四代ELISA、WB确认试验及HIV-1 RNA检测.比较三代ELISA、四代ELISA对阳转期标本的检测灵敏度、一致率并动态观察血清阳转过程分析窗口期.三代与四代ELISA试剂灵敏度比较卡方检验进行统计学分析.结果 67份早期HIV-1感染者血清标本中,三代ELISA检出56份阳性,11份阴性,灵敏度83.6％(95％ CI72.5％～91.5％),四代ELISA检出63份阳性,1份灰区,3份阴性,灵敏度94.0％(95％ CI 85.4％～98.3％),四代ELISA灵敏度高于三代ELISA(x2=16.1,P＜0.01).三代ELISA与四代ELISA一致率86.6％(95％ CI76.0％～93.7％).三代ELISA阳性者感染时间最早为16 d,四代ELISA阳性者感染时间最早为9d.三、四代ELISA窗口期存在明显的个体差异.结论 四代ELISA对于HIV早期感染标本的检测灵敏度明显高于三代ELISA,窗口期更短.四代ELISA更适用于高危人群中的HIV早期感染的筛查.     

HIV感染的血清学检测技术与应用研究进展

HIV感染是全球公共卫生事业面临的严峻挑战。及时准确的早期诊断和尽早启动抗反转录病毒治疗, 能够有效遏制病毒传播并改善患者免疫功能, 从而改善患者预后, 降低患者的住院及死亡率。高效敏感的检测是实现HIV感染早期诊断的前提, 也是艾滋病疫情防控工作中的重点。血清学检测一直以来是应用最为广泛的HIV感染检测技术, 但由于传统的抗体检测技术难以及时准确的检测HIV急性感染, 限制了HIV感染的早期诊断。近年来, 新型HIV抗原抗体联合检测、生物传感器等多种新型检测技术灵敏度高, 显著缩短了HIV感染诊断的窗口期, 为HIV早期诊断带来新的希望。本文对HIV感染的血清学检测技术原理、适用范围及应用前景进行综述, 以期为发展HIV感染的新型检测策略提供参考。