HIV感染者急性期血浆CXCL13水平与疾病进展的关系

目的 探究HIV感染者急性期血浆CXCL13水平与病毒载量及CD4细胞数量间的关系,评估其预测疾病进展及ART后免疫重建的能力。方法 选取中国医科大学附属第一医院急性期HIV感染者54例,对标本CXCL13水平、病毒载量和CD4细胞数量进行检测。结果 以set-point高低分组,set-point高组（lgVL≥3.5拷贝/mL）CXCL13水平明显高于set-point低组（lgVL<3.5拷贝/mL,P=0.013 5）,以感染一年的CD4细胞数量高低分组,CD4细胞高组（≥500个/μL）CXCL13水平明显低于CD4细胞低组（<500个/μL,P=0.005 7）,以ART一年的CD4细胞数量高低分组,CD4细胞高组（≥500个/μL）CXCL13水平明显低于CD4细胞低组（<500个/μL,P=0.025 7）,Kaplan-Meier生存分析显示急性期血浆CXCL13水平高的HIV感染者,其疾病进展更快,ART后免疫恢复更差（P=0.035 1;P=0.000 5）。结论 急性期血浆CXCL13水平可以预测HIV感染的疾病进展及ART后的免疫恢复。     

HIV感染后CD8~+T细胞表面NK相关受体表达的变化

目的深入了解人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后CD8+T细胞表面NK相关受体表达的变化。方法选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染者、11例AIDS患者、15例进行高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)者和13例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血CD8+T细胞表面NKG2D、NKG2A和KIR3DL1的表达。结果 HIV感染后CD8+T细胞表面NKG2D表达的百分比显著低于健康对照,NKG2D+NKG2A-表达的百分比随疾病进展逐渐下降,且NKG2D+NKG2A-表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈正相关。AIDS患者CD8+T细胞表达NKG2A显著高于其它各组,随着疾病的进展CD8+T细胞表达NKG2A+NKG2D-百分比逐渐上升,AIDS患者显著高于其它各组,经抗逆转录病毒治疗后下降至健康对照的水平,且NKG2A+NKG2D-表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关。HIV感染后CD8+T细胞KIR3DL1+表达的百分比较健康对照并无显著差异。结论 HIV感染机体后,CD8+T细胞NK相关受体表达变化与疾病进展相关,抗病毒治疗后可恢复其变化。     

HIV-1原发感染者病毒辅助受体特征分析

目的 观察HIV-1感染者在原发感染早期的不同阶段,体内病毒对CCR5和CXCR4辅助受体利用特点及演变情况.方法 以高危人群前瞻性队列研究的方式随访发现12例HIV-1原发感染者,分别收集感染最早期和病毒载量稳定期(病毒调定点)的血浆,提取病毒RNA,反转录(RT)-PCR,套式PCR扩增env gp160基因,连接到TA克隆载体,测序分析,以Geno2pheno、PSSMx4r5PSSMsinsi、SVM、Charge Rule 5种在线生物信息学工具预测病毒株CCB5和CXCR4辅助受体利用情况.结果 12例原发感染者感染早期病毒利用CCR5嗜性者有11例,利用CXCR4辅助受体1例;1例在随访10个月时检出辅助受体的转换;不同基因型预测方法的结果一致性88.3%.结论 HIV-1原发感染者早期病毒主要利用CCR5受体,也有利用CXCR4受体,原发感染者在感染1年内可能发生辅助受体的转换;以基因型预测CCB3或CXCR4辅助受体宜选用多种不同的分析方法.     

HIV/AIDS患者外周血B细胞数量以及TLR9 mRNA表达水平的研究

目的 探讨HIV-1感染后外周血B细胞数量的变化,以及B细胞TLR9 mRNA表达水平与HIV-1感染疾病进展的关系.方法 采集HIV/AIDS患者EDTA抗凝静脉血,荧光抗体染色后用流式细胞仪检测HIV/AIDS患者B细胞数量.密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,应用MACS磁珠分选系统分选CD19+B细胞,并采用荧光定量实时PCR技术检测B细胞TLR9 mRNA水平.结果 HIV/AIDS患者B细胞数量显著低于健康对照组(P＜0.01),与CD4+T细胞数量呈正相关(r=0.534,P=0.006).HIV/AIDS患者外周血B细胞TIR9 mRNA的表达明显低于健康对照组(P=0.023),与CD4+T细胞数量呈正相关(r=0.390,P=0.040).结论 HIV感染可降低HIV/AIDS患者外周血B细胞数量以及B细胞TLR9 mRNA的表达量,B细胞数量和B细胞TLR9 mRNA的表达量均可能与疾病进展相关.     

中国HIV-1 B'亚型毒株nef基因多态性及其对疾病进展影响的研究

目的 研究我国北方地区B'亚型HIV-1感染者病毒基因组中nef基因多态性、重要功能区的保守程度,探索其与疾病进展的关系.方法 HIV-1 B'亚型感染长期不进展者(LTNP)30例,典型进展者(TP)42例,从全血标本中提取全前病毒DNA,经nested-PCR扩增nef基因全长,扩增产物纯化后直接测序,对测得的序列进行系统进化和氨基酸变异分析,并计算比较LTNP组与TP的HIV/AIDS组氨基酸突变位置和频率的差异.结果 nef氨基酸序列长度可变区R21K/E/H/I/Q取代,TP组突变频率(59.52%)低于LTNP组(93.33%,P<0.005,OR=0.11).功能区外S15R/K/N取代,TP组突变频率(64.29%)高于LTNP组(33.33%,P<0.01,OR=3.60);K39R/E/N取代,TP组突变频率高于LTNP组(P<0.005).其他功能区内有少数序列发生变异,但在两组间无差异.结论 未发现中国北方地区HIV-1 B'亚型nef基因与疾病长期不进展相关联的明显缺失或缺陷,但nef基因序列长度可变区R21位K/E/H/I/Q取代R可能与疾病缓慢进展有关,S15R/K/N取代、K39R/E/N取代可能与疾病进展相关.nfe氨基酸序列的重要功能区较为保守.     

中国部分地区HIV阳性男男性行为者合并HCV感染状况及其自然清除率调查

目的分析中国部分城市HIV阳性男男性行为者(MSM)中丙型肝炎病毒(HCV)感染状况及自然清除能力。方法以沈阳、北京、长沙和昆明市HIV确证阳性的MSM为研究对象,收集基本人口学资料及CD₄⁺T细胞淋巴细胞计数、HIV病毒载量、肝脏相关生化指标等临床信息,并进行HCV抗体和HCV RNA检测,并将HCV抗体阳性标本分为病毒自然清除(RNA-/Ab+)和慢性感染(RNA+/Ab+)两种感染状态。结果在513例HIV阳性MSM中,检出HCV抗体阳性10例(阳性率为1.94% ),其中4例HCV RNA阳性(阳性率为0.77% ),除1例HCV感染者正在接受抗病毒治疗HCV核酸检测阴性外,共5例感染者能够自然清除HCV RNAo HCV自然清除者相对于慢性感染(病毒血症)者具有较低的氨基转移酶水平和较高CD₄⁺T细胞淋巴细胞水平。结论目前调查地区HIV阳性的MSM中HCV感染率处于较低水平,但仍需定期监测。     

沈阳市新诊断HIV感染者整合酶抑制剂原发耐药分析

目的明确沈阳市新诊断的HIV-1感染者整合酶抑制剂(integrase inhibitors, InIs)耐药株的传播情况。方法回顾性收集2018年6月至2019年3月沈阳市新诊断的HIV感染者80例,扩增血浆病毒RNA的整合酶编码基因,系统进化分析病毒基因型,以Stanford HIV耐药数据库解读耐药基因突变,计算原发耐药率并分析不同亚型毒株耐药相关自然多态性。结果 80例HIV-1感染者中共检出CRF01_AE感染者51例,占63.8%;CRF07_BC感染者14例,占17.5%,B亚型感染者6例,占7.5%;其他不典型重组9例,占11.3%。2例CRF01_AE感染者检出R263K突变,1例B亚型感染者检出E138A突变,总体耐药率为3.8%。CRF01_AE感染者在整合酶耐药相关位点50、74、119、153位氨基酸具有多态性,频率分别为5.9%、2.0%、13.7%和4.0%;而CRF07_BC感染者在整合酶耐药相关位点50、74、157位上氨基酸具有多态性,频率均为7.1%。结论沈阳市新诊断HIV感染者InIs原发耐药率较低,但部分感染者在HIV整合酶耐药相关位点具有氨基酸多态性。需要加强HIV整合酶耐药监测及对我国常见HIV流行株的耐药基因型和表型研究,更好地解读HIV整合酶耐药突变的意义。     

流感病毒反向遗传技术合成rH5/PR8融合病毒的生物学活性

目的 探讨用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合病毒株的生物学活性,对人工合成的融合流感病毒株进行全面、系统地研究,对其作为疫苗株的可行性、有效性提供科学依据,方法用流感病毒反向遗传技术合成rH5/PR8减毒病毒株,测定5代病毒与原代病毒HA基因序列,确认外来基因的遗传稳定性;用细胞实验确认其增殖性,用动物实验确认其致病性的强弱.结果 人工合成的rH5/PR8融合病毒株除HA外,均来自A/PR/8/34(PR8),HA来自H5N1型强致病性禽流感病毒,第1050碱基从G定点突变成C,导致344号氨基酸从精氨酸变为苏氨酸,并剪除第1054～1065碱基,致使第346～349的碱性氨基酸(RKKR)部位被去除.该病毒的增殖能力可以达到109 PFU/ml,外来基因HA5基因遗传稳定、不易变异,达到疫苗株的要求;鸡脑内即静脉接种活病毒实验证实病毒呈现弱毒性结论用流感病毒反向遗传技术合成的人工融合病毒株有良好的增殖性及基因遗传稳定性,用基因剪切技术对HA的碱性氨基酸连续序列的敲除可以减低病毒的致病性.对鸡呈现弱毒性.     

HIV感染者、发病者及HAART治疗者NK细胞亚群变化研究

目的探讨HIV感染者、发病者和进行高效抗逆转录病毒疗法(HAART)的治疗者NK细胞亚群的变化情况。方法取新鲜外周全血,用荧光标记的单克隆抗体进行染色,经流式细胞仪检测分析HIV感染者、发病者和HAART治疗者NK细胞亚群的变化。结果 HIV感染者、发病者CD56dimCD16+NK细胞的百分比显著低于HIV抗体阴性健康对照;CD56-CD16+、CD56briCD16-/+NK细胞的百分比显著高于HIV抗体阴性健康对照;HAART治疗者CD56dimCD16+、CD56-CD16+和CD56briCD16-/+NK细胞亚群的百分比与HIV抗体阴性健康对照相比不再有显著差异。结论 HIV感染改变了NK细胞亚群的构成,HAART治疗后NK细胞亚群的比例可得到部分恢复。     

中国HIV感染长期不进展者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞变化研究

目的 对中国HIV感染长期不进展者(LTNP)CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平及其与疾病进展相关性进行研究,探讨CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T细胞在LTNP保护机制中发挥的作用.方法 选取74名HIV-1感染者(LTNP、典型进展HIV组、AIDS组)及16名健康对照,应用流式细胞仪胞内染色技术在单细胞水平检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达水平,分析其与CD4+ T细胞数量、病毒载量、淋巴细胞活化、凋亡水平的相关性.结果 中国HIV感染LTNP CD4+CD25+Foxp3+ T细胞百分率明显低于典型进展HIV、AIDS组及健康对照组(P<0.05).HIV/AIDS患者CD4+CD25+Foxp3+ T细胞百分率与CD4+ T细胞显著负相关(r=-0.509,P<0.001),与病毒载量明显正相关(r=0.414,P<0.01),与CD4、CD8+ T细胞表面CD38、CD95表达水平明显正相关(P<0.05),与CD4、CD8+ T细胞表面HLA-DR表达无显著相关性.结论 中国HIV感染LTNP CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T细胞百分率明显低于典型进展者,提示调节性T细胞与LTNP保护机制相关.