大鼠肌源性干细胞的分离、纯化和培养☆

背景：要获得满足临床需要的肌源性干细胞,体外筛选和扩增已成为关键环节。 目的：拟建立稳定高效的成年大鼠肌源性干细胞的分离培养、纯化方法。 方法：成年SD大鼠麻醉后,无菌条件下取骨骼肌,采用XI型胶原酶、Dispase和胰酶消化法获得肌源性干细胞,以密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化。记录细胞生长曲线,MTT比色法观察不同接种密度对细胞生长的影响,采用免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定。 结果与结论：原代肌源性干细胞体积较小,贴壁缓慢,折光性较好,多呈球形、梭形或纺锤形,增殖缓慢。传代培养后,加入含体积分数为20%血清浓度的完全培养基,以1×109 L-1密度接种时活细胞数量最多,为适宜接种密度,传1~4代细胞生长状态良好。免疫细胞化学染色结果为desmin(+),CD34(+),CD45(-),Sca-1(+),证实通过体外原代培养获得了高纯度的肌源性干细胞,并成功扩增。     

抗凝患者合并输尿管结石采用双频双脉冲激光碎石术的安全性观察

目的 探讨输尿管镜下双频双脉冲u一100掺钕钇铝石榴石(Nd:YAG)激光碎石术治疗服用抗凝剂患者榆尿管结石的安全性及有效性.方法 回顾分析该院2005年4月～2008年6月532例输尿管结石患者,其中,37例输尿管结石合并其他器官疾病而需长期口服抗凝剂(西洛他唑,氯吡格雷,华法林)治疗.采用双频双脉冲U-100掺钕钇铝石榴石(Nd:YAG)激光碎石器碎石术.术前5d停服华法林,改为低分子肝素,术后5d恢复口服华法林;术前10d停服氯吡格雷或西洛他唑,改为静脉低分子肝素抗凝,术后5d再恢复口服氯吡格雷或西洛他唑.检测手术前后血红蛋白、肌酐、凝血参数的变化,密切检测有无围手术期出血或血栓性并发症出现.结果 平均手术时间35 min,术中估计失血量平均46 mL,无术中输血.术后无石率91.9%(34/37),术后1个月无石率100%.术后患者出现较重出血1例(2.7%),出血量约600 mL,出血3 d后停止;无血栓性疾病发生.余36例(97.3%)患者术后恢复原来口服抗凝剂治疗,无后遗症出现.结论 合理应用抗凝剂情况下,输尿管镜下U-100激光碎石治疗口服抗凝剂患者的输尿管结石安全、有效.     

肾移植术后超延迟肾功能恢复15例治疗体会

背景：肾脏移植患者急性排斥反应已不再成为术后的主要并发症,延迟肾功能恢复和慢性移植肾肾病仍然是移植患者术后需要面对的问题。目的：总结分析15例术后发生超延迟肾功能恢复的肾移植患者资料,探讨临床经验及治疗对策。方法：对肾移植后发生超延迟肾功能恢复患者15例进行回顾性分析。15例患者移植后均采用常规剂量的半量（环孢素A3.0～4.0mg/kg,他克莫司0.5～1mg/kg）,并定期监测血药浓度,随时调整免疫用药剂量,采用血液透析/连续性肾脏替代治疗。分析超延迟肾功能恢复诱因,患者观察患者肾功能恢复情况。结果与结论：术中低血压、供肾热缺血时间过长、早期急性排斥反应、环孢素中毒、外科并发症、动脉粥样硬化致移植肾血液灌流不足可能为患者超延迟肾功能恢复的诱因。患者术后由少尿期开始进入多尿期时间最长者为108d,平均32～108d。肾功能正常8例（血清肌酐78～135μmol/L）,肾功能轻度异常5例（血清肌酐135～300μmol/L）,血清肌酐〉300μmol/L者2例。随访时间最长1例11年,至今移植肾功能正常。结果提示,肾移植后尽早行移植肾穿刺活检及移植肾彩超,根据结果采取综合治疗并制订个体化治疗方案可以使大多数的患者移植肾功能恢复正常。     

分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究

目的 探讨分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠膀胱癌的抑癌效应.方法 采用小鼠T739可移植性膀胱癌模型,共80只分为10组,于移植瘤处局部注射分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白,并用Ag85B蛋白、BCG、IL-2和生理盐水作对照,观察治疗后各组的肿瘤质量、体积和存活期.光镜和电镜下观察肿瘤的形态改变.结果 分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组小鼠肿瘤瘤质量(2.49±0.60) g,非常显著低于Ag85B蛋白组、BCG组、IL-2组和生理盐水组(P《0.01);Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组小鼠肿瘤瘤体积(3.01±0.95) cm3,显著低于Ag85B蛋白组、BCG组、IL-2组和生理盐水组(P《0.05,P《0.01);Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组小鼠存活天数(35.50±2.60) d,显著长于Ag85B蛋白组,BCG组、IL-2组和生理盐水组(P《0.05,P《0.01);Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠的肿瘤质量抑制率为64.50%,肿瘤体积抑制率为62.24%,存活延率为48.66%.光镜下观察Ag85B/IL-2融合蛋白治疗组肿瘤细胞有明显的炎性细胞浸润、肿瘤细胞坏死、出血等改变;透射电镜下观察,可见细胞膜破裂,细胞器破坏,细胞质固缩,细胞核破坏,核染色质聚集,凋亡小体出现,巨噬细胞吞噬增多等现象.结论 分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白对小鼠膀胱癌具有抑制作用,并能延长膀胱癌荷瘤鼠的生存期.     

双侧供肾大鼠肾移植模型的建立☆

目的：大鼠肾移植动物模型是免疫和移植相关研究的重要实验工具，但即往的大鼠肾移植模型大多以单侧肾脏为供肾，手术时间较长，实验经济性不高。拟建立双侧供肾大鼠肾移植模型，并进行改良，以期缩短手术时间及实验费用。 方法：①实验于2007-05/08于大坪医院实验动物中心完成，实验方法符合医学伦理学要求。②共选用大鼠90只，按随机数字表法分为2组，双侧供肾组Wistar供体大鼠18只，SD受体大鼠36只，采用原位低温灌洗，同时取供者双肾作为供肾；单侧供肾组Wistar供体大鼠18只，SD受体大鼠18只，取供者左侧肾脏为供肾。③以硬膜外导管为支架行供肾静脉与受者肾静脉端端吻合，供肾动脉带腹主脉瓣与受者腹主动脉行端侧吻合，供肾输尿管膀胱瓣与受者的膀胱吻合。受者术中预置右侧肾脏血管体外结扎线，术后3 d结扎。④术后1，5，7 d由受体大鼠尾静脉分别抽取静脉血1 mL测肌酐。 结果：①双侧供肾组手术成功率为91.7%，大鼠死亡的原因主要为血管吻合口出血、感染、休克、血栓形成以及膀胱漏尿致弥漫性腹膜炎等；单侧供肾组手术成功率为88.9%。②除取肾时间外两组其余手术耗时差异无显著性意义(P > 0.05)。③两组受体大鼠组内比较术后血肌酐含量均持续升高（P < 0.01），两组差异无显著性意义（P > 0.05）。 结论：双侧供肾大鼠同种异体肾移植模型建立方法可靠、稳定，并能降低实验成本，缩短手术时间。     

盆底肌电刺激在女性尿失禁治疗中的应用

目的 探讨盆底肌电刺激对女性尿失禁的作用机制及疗效。方法 对43例女性尿失禁患者应用盆底肌电刺激治疗，电极探头置于阴道中部，在不同的电流状态下，间歇刺激阴部神经。结果 尿失禁患者渗、漏尿事件减少46％，尿频次数减少49％，24h内排尿次数在10～12次之间；患者的总主观改善率为68％，总客观改善率为74％。结论 盆底肌电刺激对女性尿失禁有明显疗效，能提高患者生活质量。     

肾上腺囊肿的误诊分析

目的提高对肾上腺囊肿的诊断水平。方法回顾性分析9例经手术和病理证实被误诊的肾上腺囊肿的临床资料,复习文献并讨论肾上腺囊肿的误诊原因。结果误诊原因主要有四点：①对肾上腺囊肿的认识和重视程度不足;②B超作为初步诊断对术前诊断的影响较大;③B超和CT本身的局限性,对病灶来源判断不清;④部分肾上腺囊肿CT值较高,使得对病灶性质造成误判。结论提高对肾上腺囊肿的认识和重视程度对减少误诊率非常重要,合理地联合应用B超、CT、MRI能显著提高肾上腺囊肿的诊断正确率。     

鼠受精素β亚单位胞外区的真核表达质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD的构建与表达

目的构建表达鼠受精素β（Fβ）胞外区的真核表达重组质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD并对其表达进行检测。方法应用PCR方法获得鼠Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术对Fβ的表达进行检测。结果构建成功后的pSG.SS.YL-Fβ.ECD在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。     

成年大鼠肌源性干细胞的培养和鉴定

目的探讨成年大鼠肌源性干细胞分离及纯化方法。方法采用消化法分离肌源性干细胞,然后用密度梯度离心法和差速贴壁法纯化干细胞;结蛋白(desmin)、CD34、CD45、Sca1免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定。结果成功培养出高纯度的肌源性干细胞,免疫细胞化学染色结果为desmin( ),CD34( ),CD45(-),Sca1( )。结论可通过体外原代培养获得高纯度肌源性干细胞,为组织工程的临床应用提供种子细胞。     

认知伪装甄别测验在智力残疾评定中的应用

目的探讨认知伪装甄别测验在智力残疾评定中的应用价值。方法在接受智力残疾评定者中选择具有伪装倾向者57例,以同期接受智残评定的非伪装者55例作对照,分别进行韦氏成人智力测验及认知伪装甄别测验。结果伪装组在韦氏智力测验的语言智商数、操作智商数、总智商数均低于非伪装组但差异未达到显著性水平t值分别为0.162,0.931,0.603,均P〉0.05。伪装组在认知甄别测验的各条目上的均分均接近或低于机遇水平,与非伪装组相比差异非常显著,其中数字迫选总分、容易条目分、中等难度条目分、困难条目分t值分别为4.587,4.440,3.069,2.603,均P〈0.01。图符迫选总分、容易条目分、中等难度条目及困难条目分t值分别为4.690,3.226,4.215,3.216,均P〈0.01。相关分析显示伪装组的韦氏智力测验与认知甄别测验的相关性明显低于对照组。结论认知伪装甄别测验在一定程度上可以反映被试者韦氏智测成绩的真实程度,在智力残疾等级的评定中具有一定的应用价值。