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RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具. 相似文献
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目的 研究含有登革病毒Ⅱ型NS1基因的重组质粒肌内注射小鼠后在其体内诱导的细胞和体液免疫。方法 用含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2 NS1于小鼠胫前肌注射并加强免疫 2次。然后定期处死 ,采集血液标本以及小鼠脾细胞 ,检测小鼠的体液和细胞免疫。结果 在末次免疫后 4周检测到小鼠抗NS1抗体 ,并且检测到小鼠CD4 、CD8 亚群的变化。结论 含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1免疫小鼠后 ,可以诱导小鼠产生针对NS1的稳定特异性体液、细胞免疫 相似文献
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探讨人脐血单核细胞在髓系树突状细胞(DC)体外诱导体系中获得的CD123^+髓系DC的生物学特性。分离脐血单核细胞,用人重组的粒/单核细胞集落刺激因子(GMCSF)和IL-4将其诱导为IX2。用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子、CD123和CDllc的表达,并用间接免疫磁珠法将其中CD123^+ DC加以分离纯化;激光共聚焦显微镜、扫描电镜和倒置显微镜观察CD123^+ DC形态;^3H-TdR渗入法检测CD123^+ DC对同种异体T细胞的刺激能力。脐血单核细胞经GM-CSF和IL4诱导7d后,细胞表面高度表达HLA-DR、CD86、CDllc和CD123,低表达CD83,丧失CD14的表达,其中CD123和CDllc均匀分布于DC表面。免疫磁珠纯化后的CD123^+ DC呈现不成熟DC形态,除细胞体积较小外,其表面突起类似于CD123DC。CD123^+ DC能明显刺激同种异体T细胞增殖,但其刺激能力较CD123 DC组低(P〈0.05)。GM-CSF和IL-4培养体系中的CD123^+DC可能是DC分化发育过程中更早期的未成熟髓系DC,具有独特的生物学特性。 相似文献
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A群溶血性链球菌胞壁多糖抗体的检测方法 总被引:1,自引:0,他引:1
A群溶血性链球菌胞壁多糖抗体的检测方法彭朝权余步云陈国庆梁慧设计了新的提取和纯化多糖抗原技术,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定A群溶血性链球菌胞壁多糖抗体(ASP),以探讨ASP测定应用于临床诊断风湿性心瓣膜炎的可能性。首先采用亚硝酸法提取A群... 相似文献
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本文作者用诊断剂量的超声波辐照活体家兔肝脏,喂养3d致死后取材,经处理后用电子显微镜观察其超微结构的变化情况。实验结果表明超声波辐照20min的家兔肝脏的超檄结构无明显变化,而辐照30min及60min的家兔肝脏,除细胞质内粗面内质网有程度不同的扩张外,肝组织及肝细胞的其它结构均无明显改变。由于热效应与辐照时间有关,而本实验辐照30min及60min的家兔肝脏的超微结构的变化是相同的。且本实验所用超声强度小而不致引起机械效应。因此作者认为本实验出现的兔肝细胞粗面内质网扩张的现象不会是热效应和机械效应引起,而只可能是空化效应所致,这说明诊断超声可能在动物组织中引起空化效应。 相似文献
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采用细胞因子活性检测,Northern blot及RT-PCR等方法,在体外研究了抗细菌核心糖脂域McAb(EL1,EL3和3H4)对LPS诱导人外周血单核细胞释放IL-1及其mRNA表达水平的影响。结果表明,EL1,EL3和3H4在体外有抑制LPS诱导细胞释放IL-1的作用;Northern blot及RT-PCR结果证实,这3株McAb能降低IL-1 mRNA表达的水平;提示抗细菌核心糖脂域M 相似文献
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登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位,并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体随机12肽库,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导,通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比,初步确定E蛋白的抗原表位;用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验,确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS,其展示肽与DEN2E蛋白390~398 AA序列有3~5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390~399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应,并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390~398AA)线性序列为免疫优势表位,其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。 相似文献