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61.
目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性.方法:经常规RT-PCR法从HCV RNA阳性病人的血清中扩增出HCV E1区的基因片段,经EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体P cDNA3中,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析.结果:RT-PCR扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3连接,阳性克隆经Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切后产生了预期大小的144bp的片段 .测序后其核苷酸序列与已经报道的HCV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为72.8%、93.25% 、61.96%和56.44%;其推定的氨基酸序列的同源性分别为77.3%、95.7%、54.6%和51.35%;与已经报道的中国株的同源性为95.06%和93.25%;属HCV Ⅱ型; 经计算机辅助分析表明该片段内含有4个可能的糖基化位点,1个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有2个和1个抗原决定簇, 而每一个抗原决定簇内均含有1个糖基化位点,该片段内还含有2个T细胞识别位点.结论:本实验克隆的HCV E1基因属Ⅱ型,为我国流行的基因型,其基因的一级结构具备进行有关HCV核酸免疫的研究条件,其真核表达载体的构建,为进一步研究HCV E1基因的功能及HCV基因免疫的研究创造了条件. 相似文献
62.
63.
64.
为观察庚型肝炎病毒在急性病毒性肝炎中感染情况,对239例急性肝炎患者的血清,采用两步法筛选进行HGV RNA的检测,并经HGV RNA确证试验,结果显示:HGV RNA阳性者9例,其中合并乙肝1例,合并丙肝3例,合并戊肝1例,非甲-戊型肝炎中占4例。提示:①HGV与其它型肝炎病毒重叠感染较多。②6例患者无输血史,而HGV RNA仍为阳性,提示HGV的输血外传播。③NA-E急性肝炎患者中,HGV的阳性率为23.5%,证实HGV为其病原之一,同时提示还可能存在其它的致病因子。 相似文献
65.
乙型肝炎病毒pX相关蛋白研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
目前已知在乙型肝炎病毒(HBV)的致癌过程中,HBV X基因及其产物X蛋白(pX)具有重要意义.虽然X基因的转基因小鼠可诱发肝癌(HCC)的发生[1],pX对多种癌基因均具反式激活作用[2],且pX有与p53蛋白结合的作用,在蛋白水平使靶细胞中抑癌基因及其产物的功能发生改变,但迄今为止pX的确切致癌机制仍不清楚.由于DNA的复制与转录、蛋白质的翻译和信号的传导等诸多代谢过程都是各种蛋白相互作用的结果,因此,寻找鉴定细胞内能与HBV pX相互作用的X相关蛋白(X-associated protein XAP,或X-interacting protein XIP)成为目前探讨HCC与pX关系研究的热点之一,并已取得初步结果. 相似文献
66.
目的 :用酵母双杂合体系筛选肝细胞cDNA文库 ,寻找与丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)胞膜蛋白 2 (E2 )相作用蛋白的基因 ,探讨HCV与肝细胞的相互作用 ,寻找HCV进入细胞的受体。方法 :以HCVE2蛋白胞外区片段 ,构建酵母双杂合体系中“饵”载体 ,从成人肝细胞cDNA文库筛选与HCVE2相作用蛋白的基因。结果 :筛出的阳性克隆基因序列分析后 ,经GenBank查询 ,与人的apoCⅢ同源 ,同源性为 98%。 结论 :HCVE2蛋白能与人的apoCⅢ在酵母双杂合体系中结合 ,但其相互作用与HCV进入细胞间的关系待进一步研究 相似文献
67.
目的 :用丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (hepatitisCvirus,HCV)胞膜蛋白 2 (envelopeprotein 2 ,E2 )胞外区片段 ,构建酵母双杂交体系中“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,验证其能否用于酵母双杂交体系筛选cDNA文库。方法 :设计引物 ,从本室构建的含中国株Ⅲ型HCVE2片段的载体上 ,扩增出不包含C末端跨膜区的E2片段E2 6 6 1,经EcoRI和PstI双酶切后 ,克隆到酵母双杂交的“饵”载体pAS2 1质粒上 ,构建成载体pAS2 1 E2 6 6 1。阳性克隆经EcoRI和PstI双酶切鉴定后 ,转入酵母中 ,用酵母蛋白抽提物作Western杂交 ,证实其表达 ;滤膜印记杂交验证其有无自身激活作用。结果 :所构建的载体 pAS2 1 E2 6 6 1双酶切后 ,片段大小正确 ;转入酵母后 ,提取酵母质粒 ,PCR扩增出预期大小的片段 ,Western杂交出现阳性条带 ;滤膜杂交 ,转有 pAS2 1 E2 6 6 1和阴性对照pLAM5 ' 1的酵母菌落没有激活报告基因 ,而GAL4全长的阳性对照菌落变为蓝色。结论 :含有HCVE2 6 6 1的“饵”载体构建正确 ,在酵母细胞中能表达出E2蛋白 ,并且没有自身激活报告基因的功能 ,能够应用于酵母双杂交体系。 相似文献
68.
丙型肝炎病毒NS5b区与5'-非编码区不同基因区RNA检测结果的比较 总被引:2,自引:1,他引:1
为探讨丙型肝炎病毒(HCV)NS5b区与5’-非编码区(5’-NCR)不同基因区RNA检测结果的区别及临床应用价值。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测148例肝炎患者血清HCV NS 5b基因的cDNA,并与5’-NCR基因区cDNA检测技术进行了比较。结果 HCV NS 5b基因区RNA检出率为24.3%(34/148),5’-NCR基因区RNA检出率为31.1%(47/148)。H 相似文献
69.
丙型肝炎研究进展(续) 总被引:1,自引:0,他引:1
<正> 丙型肝炎流行病学与预防丙型肝炎呈世界性分布。美国和欧洲正常献血者抗-HCV 阳性率为0.25~1.2%;长畸以供血者血液抗-HCV 阳性为基础,参考各年份人口构成,推算抗-HCV 阳性率为1.41%,并发现与年龄相关,年龄越大阳性率越高。某医院546名医务人员,抗-HCV 阳性者10例,占1.8%;与血库供血者抗-HCV 阳性率相比,两 相似文献
70.
TT病毒核酸的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的初步测定献血员、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及慢性非甲~戊型,非庚型肝炎患者中TT病毒的感染情况,分析不同TT病毒感染者血清中TT病毒开放读码框架2区部分基因序列。方法以套式聚合酶链反应测定TT病毒核酸,取献血员(TX2)、慢性乙型肝炎(TX3)、慢性丙型肝炎(TX4)及慢性非甲~戊型,非庚型肝炎患者(TX1)各1例TT病毒PCR阳性产物,以双脱氧核苷酸链终止法测定核苷酸序列。结果检测20例献血员、29例慢性乙型肝炎、31例慢性丙型肝炎及32份慢性非甲~戊型,非庚型肝炎标本,TT病毒核酸阳性者分别占5.0%(1/20)、6.9%(2/29)、29.0%(9/31)和34.4%(11/32)。与N22克隆相比,TX1、TX2、TX3与TX4在核苷酸水平的同源性分别为95.41%、98.47%、97.45%和97.96%。结论本组献血员、慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及慢性非甲~戊型,非庚型肝炎患者中均存在TT病毒感染者。从本组不同TT病毒感染者血清中分离出4株TT病毒序列,其开放读码框架2区部分基因序列高度保守 相似文献