电泳和免疫电泳方法学的发展——在分析血清蛋白方面的应用

情性介质电泳目前,最广泛使用的支持介质是醋酸纤维素薄膜和琼脂糖凝胶,这两种介质无分子筛效应,鉴别蛋白质分子的机制仅根据蛋白质分子的有效表面电荷。醋酸纤维素薄膜电泳是由Kohn于1957年首先介绍的,与纸上电泳相比,它有许多优点,如泳动时间短(45-60分钟),蛋白质染色后,醋酸纤维素薄膜可完全透明。选择胶化的醋酸纤维素薄膜是因为它能吸收足量待分析的蛋白质样品。琼脂糖凝胶电泳:琼脂为海藻的提取物,     

DNA疫苗的安全性研究

DNA疫苗作为第三代疫苗与传统疫苗相比具有很多优越性，对其安全性的评价主要包括DNA疫苗与宿主细胞基因整合的可能性，接种后诱导宿主免疫耐受和自身免疫病的可能性，以及临床试验中受试者的耐受性等方面。本文就DNA疫苗安全性研究进展和相应法规的制定情况作一综述。     

血管内皮细胞生长抑制因子angiostatin系列的分子结构、作用机制及应用前景

血管内皮细胞生长抑制因子angiostatin系列是血浆纤维蛋白溶酶原(plasminogen Pgn)的内部片段,正常生理状态下并不产生。原发肿瘤存在时,弹性蛋白酶水解活性增高,通过不同的切断方式,水解Pgn或者血浆纤维蛋白溶酶(plasmin,Plm)产生angiostatin系列片断。体外和动物实验已显示出angiostatin及其类似物在体外能有效地抑制毛细血管内皮细胞的生长、移行,体内显著退缩和停滞原发瘤和转移瘤的生长,是迄今为止最有效的内源性血管生长抑制剂之一,并且无毒副作用报道。在肿瘤的长期休眠和抗转移治疗中,将是一种应用前景看好的药物。     

苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎细胞因子IL-10表达的影响

目的观察苦豆子总碱对大鼠溃疡性结肠炎(UC)的外周血和结肠组织中IL-10表达的影响。方法将SD大鼠随机分成6组(正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)、苦豆子总碱高剂量组、中剂量组、低剂量组),采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法,制备结肠炎大鼠模型。第2天开始灌胃,在第3周杀鼠后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10在结肠黏膜组织和外周血清中的表达水平;同时分析结肠黏膜组织IL-10与DAI(疾病活动指数评分)/组织学损伤的相关性。结果(1)结肠部位和外周血清中IL-10的表达较对照组均显著降低,其中以结肠部位降低的幅度最大(P<0.01)。(2)苦豆子总碱高、中、低3个剂量组和SASP组都能显著性上调结肠部位和外周血清的IL-10的表达(P<0.05),且结肠部位的变化与外周血的相比差异明显。(3)结肠部位的DAI与结肠IL-10之间存在的负相关性(Pearsonr=-0.828,P<0.01),结肠部位的组织学损伤与结肠IL-10之间存在负相关性(Pearsonr=-0.819,P<0.01);所有检测为双侧,样本容量n=60。结论苦豆子总碱通过上调IL-10的表达减轻或改善实验性结肠炎大鼠的组织学损伤和症状。     

HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定

目的　探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法　分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果　P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论　HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 ,可用于HIV基础研究和临床检验     

人粒系巨噬系克隆刺激因子基因导入真核细胞及其表达

目的：获得带糖链、近天然的重组人粒系巨噬系克隆刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ），以期为临床提供更安全、稳定的细胞因子。方法：采用基因重组技术，构建编码ｈＧＭ－ＣＳＦ的稳转载体ｐＭＥｎｅｏ－ｈＧＭ－ＣＳＦ，以酶切和猴肾细胞ＣＯＳ瞬时转染鉴定后，用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法将重组质粒导入中国仓鼠卵细胞（ＣＨＯ）。结果：经Ｇ４１８加压筛选（８００μｇ／ｍｌ～１ｍｇ／ｍｌ），获得可表达ｈＧＭ－ＣＳＦ的细胞株。常规或载体培养ＣＨＯ－ｈＧＭ－ＣＳＦ细胞株上清可直接刺激ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株的增殖，ＭＴＴ测定活性单位可达１×１０７ｕ／Ｌ原液。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析显示ｒｈＧＭ－ＣＳＦ主带在２８ＫＤ位左右，为２Ｎ糖链型。结论：此ＣＨＯ－ｈＧＭ－ＣＳＦ细胞株表达稳定，活性较高，具有开发价值。     

两步法分析RhD阴性及D变异体分子机制(附1例新等位基因的发现)

目的建立用于RhD阴性及RhD变异体大标本量的快速准确的筛查方法。方法采用血清学常规试管法初筛后,对初筛阴性标本以序列特异性引物多聚酶链反应(SSP-PCR)作两步法(第一步检测出阴性,Del1227突变,以及其他变异体;第二步检定出其他变异体的具体类型)基因检测分型,并用INNO-TRAIN试剂盒作检测结果的比较,对有突变位点的变异体进行基因测序。结果在235例初筛RhD阴性标本中,检测到1~10外显子全缺失137例,2~9外显子缺失20例,1 227G>A突变63例,845G>A突变4例,3~6外显子缺失2例,3G>A突变1例,8~9外显子缺失1例,首次发现1例3~10外显子缺失;INNO-TRAIN试剂检测及基因测序结果与之完全符合。结论所建立的两步法基因检测分型,方法经济实用、简洁可靠,适用于大标本量筛查RhD阴性及D变异体。     

对医院病案统计工作存在的问题的探讨

医院病案统计是医院管理的重要组成部分,医院科学管理、经营决策、教育科研和防病治病都需要病案统计数据的支持.目前医院病案统计工作存在很多问题,如工病案统计人员队伍建设滞后、工作方式落后、病案统计方法程式化、统计手段落后以及病案统计人员编制不足,严重阻碍了病案统计工作的发展.为提高病案管理的科学性和时效性,应大力加强人员队伍建设,加强专业学习和培训,不断提高病案统计人员素质,并建立健全各项制度,以进一步提高病案统计工作质量和服务水平,更好地为医院发展服务.     

40例80岁以上老年人急性左心衰的诊治体会

目的:总结老年人急性左心衰的诊治体会。方法:经采取各种方法积极救治,40例患者中,38例救治成功,2例死亡,均死于多脏器功能衰竭。结论:及时准确评估病情,合理应用强心、利尿及皮质激素类药物是提高抢救成功率的关键。