胆固醇转运相关基因NPC1、NPC2调节造血前体细胞的增殖和分化

目的 采用NPC1、NPC2基因敲低的造血前体细胞(erythroid myeloid lymphoid,EML)作为模型,探讨NPC1、NPC2对EML细胞增殖、分化的影响.方法 通过NPC1 shRNA、NPC2 shRNA重组慢病毒感染EML细胞获得NPC1、NPC2基因有效沉默的EML细胞模型.利用该模型以Filipin染色检测NPC1、NPC2基因敲低后对EML细胞内胆固醇分布的影响,采用CCK-8和台盼蓝染色检测细胞增殖,采用流式细胞仪检测NPC1、NPC2基因沉默后EML细胞干性标志物CD34、sca-1、c-kit及TER-119、CD11b、B220的变化,采用Western blot检测造血干细胞因子(stem cell factor,SCF)刺激细胞后c-kit磷酸化的改变.结果 成功构建NPC1、NPC2基因沉默的EML细胞模型,NPC1、NPC2基因在mRNA和蛋白表达均显著降低(P＜0.01).NPC1、NPC2敲低的EML细胞中出现胆固醇蓄积,且在NPC1敲低的EML细胞模型中胆固醇蓄积更显著.沉默NPC1、NPC2基因后使得EML细胞增殖减慢(P＜0.01),并且能够降低EML细胞CD34、sca-1和TER-119、B220的阳性率(P＜0.01).经SCF刺激后NPC1基因沉默的EML细胞中c-kit的磷酸化降低显著(P＜0.01),但在NPC2基因沉默的EML细胞中c-kit磷酸化的改变差异无统计学意义.结论 胆固醇转运相关基因NPC1通过调节细胞胆固醇流动参与了EML细胞的增殖和分化调控.     

子宫内膜异位症切除术后激素替代治疗疗效分析

目的探讨激素替代治疗Ⅲ-Ⅳ期子宫内膜异位症切除术后(全子宫及双侧附件切除术后)的临床疗效与安全性.方法2002年1月至2005年1月将40例患者,随机分成两组,(各20例):观察组口服倍美力0.3-0.625mg,每日1次.对照组口服利维爱1.25mg,每日或隔日1次.治疗前后检查盆腔情况,肝肾功能,体内血清FSH(卵泡刺激素)血清E2(雌二醇)水平,记录治疗期间盆腔痛,性交痛等子宫内膜异位症相关症状和乳房胀痛等不良反应,Kupperman评分(K评分)每月1次.结果两组用药后围绝经期症状均明显改善,无子宫内膜异位症复发表现,血浆E2水平上升,治疗前后比较差异有显著性意义(P＜0.01).治疗后E2水平观察组高于对照组,两组比较差异有显著性意义(P＜0.01),但均在安全范围内.结论小剂量倍美力和利维爱用于Ⅲ-Ⅳ期子宫内膜异位症切除术后患者,均能安全,有效地控制围绝经期症状.     

三氧化二砷诱导人宫颈癌细胞凋亡及bcl-2高表达对其影响

采用脂染素（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）介导的ＤＮＡ 转染,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹, ＭＴＴ和克隆形成实验,流式细胞术和细胞凋亡原位检测法探讨Ａｓ２Ｏ３ 对人宫颈癌ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞的生物学效应和ｂｃｌ－２ 高表达对这一效应的影响． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 处理的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞,存活率和克隆形成能力明显降低,细胞周期的Ｇ１ 期前有低于２ 倍体的凋亡峰,细胞被阻滞在Ｇ２／Ｍ 期,有细胞凋亡时出现的ＤＮＡ 断裂． 而Ａｓ２Ｏ３ 处理的ｂｃｌ－２ 高表达的ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞存活率和克隆形成能力增加,凋亡率减少,Ｇ２／Ｍ 期阻滞程度显著降低． 结果表明,Ａｓ２Ｏ３ 可诱导ＳｉＨａ 和ＨｅＬａ 细胞凋亡,Ｇ２／Ｍ 期阻滞可能是其诱导凋亡的原因之一;ｂｃｌ－２ 高表达可能通过减轻Ｇ２／Ｍ 期阻滞的程度而部分阻止Ａｓ２Ｏ３ 诱导的细胞凋亡．     

c-myb表达变化在造血定型、分化及造血相关基因表达中的作用

目的 通过基因打靶建立c-myb / 和c-myb /-胚胎干细胞(ES)模型,了解转录因子c-myb在造血定型和分化中的作用.方法 采用去除白血病抑制因子的甲基纤维素体外ES细胞诱导分化体系进行造血分化,收获c-myb / 和c-myb /-(表达55%的c-myb)胚胎体进行甲基纤维素克隆形成分析.运用实时定量PCR比较分析c-myb) / 和Pmyb /-造血分化过程的造血相关基因表达.结果 c-myb / 和c-myb /-ES细胞胚胎体形成相似,但c-myb /-组胚胎体体积小于c-myb / 组.两组红系克隆形成单位(CFU-E)克隆形成相似,但c-myb /-组CFU-E克隆小于c-myb / 组.两组红系爆式克隆形成单(BFU-E)均出现于第7天,高峰在第10天.两组巨噬系克隆形成单位(CFU-M)形成相似,但c-myb /-组CFU-M数目多于c-myb / 组.c-myb /-组粒-单系克隆形成单位(CFU-GM)形成数目少于c-myb / 组.PCR分析显示c-myb / 和c-myb /-组β-globin、ζ-globin、GATA 3,CD34、Lys、c-fms和c-mpl基因表达没有明显差异.结论 亚表达水平的c-myb可以满足祖细胞扩增的需要,但却影响其终末分化.亚表达水平c-myb影响前体细胞向红系和粒系的分化,但不影响巨噬细胞的分化.c-myb表达水平不影响β-globin、ζ-globin、GATA 3、CDB4、Lys、c-fms和c-mpl基因的表达.     

骨髓基质细胞支持CD34+细胞扩增的实验研究

目的体外模拟造血微环境，观察CD34^ 细胞在骨髓基质细胞支持下的扩增效应。方法将免疫磁珠阳性选择分选的骨髓CD34^ 细胞接种于构建的基质细胞层培养，通过骨髓基质细胞支持CD34^ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数(Colonyforming Cell。CFC)的变化，评价骨髓基质细胞支持CD34^ 细胞扩增的功能。结果 扩增后细胞总数及CFC数分别增加，表示骨髓基质细胞能很好地支持CD34^ 细胞扩增。结论 体外证实了骨髓基质细胞在造血干细胞更新、增殖中具有重要作用。     

三氧化二砷(As2O3)诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡及分子机制的研究

目的:探讨As2O3对人肺腺癌GLC-82细胞系抑制生长、诱导凋亡的生物学效应及作用机制.方法:通过MTT还原法检测As2O3对该细胞系生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪、DNA凝胶电泳和细胞凋亡原位检测(TUNEL)研究As2O3诱导细胞凋亡的情况;用RT-PCR、Northern blot或Western blot分析As2O3对c-myc、p53、p16和bcl-X等基因表达的影响.结果:As2O3能抑制GLC-82细胞的生长.As2O3处理GLC-82细胞后,光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞,细胞周期的G1期前有低于2倍体的凋亡峰,DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征:DNA有规律断裂形成的梯状图谱,蛋白水平的检测表明As2O3可使细胞c-myc基因表达下降,p16和p53表达升高.结论:As2O3能显著抑制GLC-82细胞生长、诱导细胞凋亡,并主要通过调节c-myc,p16和p53等基因的表达来实现.     

阴道转移性肾癌1例报告并文献复习

肾癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,临床表现多样,超过半数患者无原发症状[1]。自1906年首例阴道转移的肾癌病例报道以来,罕有报道。这类患者的预后差,中位生存期仅19个月[2]。我院2014年1月收治1例阴道转移性肾癌,靶向治疗后无瘤生存达23月余,现结合文献复习报告如下。     

浅谈星级预防接种门诊的建设

<正>随着人们生活水平的日益提高,对接种服务质量的要求也相应提高。通过提供优美的接种环境,人性化的布局和优质的服务来满足群众的需求已成为各级卫生部门需要思考的问题,宁波市在门诊规范化建设方面做了一些尝试,现简要介绍如下。     

cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响

目的：研究cagA^ 幽门螺杆菌（Hp）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）的作用及机制。方法：制备Hp培养滤液，PCR鉴定cagA基因。采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等，观察Hp (cagA^ ）培养滤液对GES－1细胞的作用。结果：经Hp(cagA^ )培养滤液处理GES－1细胞，细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。生长曲线可见细胞增生活跃，增殖率195％。克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强，增殖率达到337．5％。流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组。Hp(cagA^ ）培养滤液可使GES－1细胞形成彗星现象。结论：Hp(cagA^ )培养滤液可以导致GES－1细胞的生长特性改变，呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征。DNA损伤可能是cagA诱导GES－1细胞生长特性改变的机制之一。