蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤功能修复的时效作用研究

目的 :研究蛇毒神经生长因子 (SNGF)对大鼠坐骨神经损伤修复的时效作用。方法 :建立大鼠坐骨神经钳夹模型 ,局部滴加药物和术后肌注 90 0Bu/kg的SNGF ,分别给药 14、2 1和 2 8d。通过展爪反射、趾间距、脊髓诱发电位(SEP)、运动诱发电位 (MEP)观察 ,评定蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复的时效作用。结果 :蛇毒NGF以90 0Bu/kg剂量 ,每天于伤侧肌肉注射一次 ,分别给药 14、2 1、2 8d均有促进伤侧神经功能恢复的作用 ,且具有一定的时效关系 ,给药 2 1、2 8d组治疗效果较给药 14d组效果好 (P <0 .0 5 )。 2 1d组与 2 8d组间无明显差别。结论 :SNGF对大鼠坐骨神经损伤的修复作用具有一定的时效作用。     

神经生长因子对失神经肌肉及其运动终板的作用

目的：探讨失神经后，神经生长因子（nerver growth factor,NGF)对运动终板（motor end plate,MEP)和肌肉的营养作用。方法：用硅胶管桥接大鼠坐骨神经10mm长的缺损，管内注入生理盐水稀释NGF（5ng/μl，20μl/只），对照组注入等量的生理盐水（NS），于术后不同时相点取腌肠肌组织作乙酰胆碱酯酶（AchE)染色和常规HE切片，并检测肌纤维横截面积的变化。结果：术后各时相点，NGF组AchE反应明显强于NS对照组，肌纤维截面积也明显较NS对照组粗。结论：周围神经损伤后，局部应用NGF可明显减轻运动终板和肌肉的变化程度，促进终板和肌肉的再生。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养4周膜电流研究

目的:研究未经诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)培养4周(4～6代)膜电流特性,为移植细胞的选取和细胞移植后心肌电生理研究奠定基础.方法:按文献方法获得和培养MSCs至第4周,利用全细胞膜片钳技术对培养4周的MSCs膜电流进行检测,以各种钾钠钙通道阻滞剂对电流成分进行分析鉴定.结果:本实验成功封接并有电流表达细胞共39例,所有检测到的电流均以相应阻滞剂证实.共有4种钾电流表达即缓慢激活延迟整流钾电流、瞬时外向钾电流、超速激活延迟整流钾电流和内向整流钾电流(Ikir),3种外向钾电流在+60 mV时电流峰值均值分别为(0.3894±0.1230)nA、(0.4135±0.1029)nA、(0.2570±0.1135)nA;Ikir在-120mV 时电流大小为(0.9613±0.1484)nA;此外在极少数MSCs上检测到河豚毒素敏感的内向钠电流(ITTX.Na),未检测到内向钙电流.结论:培养4周后的MSCs存在钾钠电流的复合表达,从电生理角度看,MSCs有分化成功能性心肌样细胞的离子基础,其可作为体内移植较理想细胞选择.     

带血运的组织并胚胎脊髓移植对损伤脊髓的修复作用

目的 探讨带蒂的大网膜、椎旁肌并胚胎脊髓移植对损伤脊髓的修复作用。方法 采用大鼠脊髓半切洞损伤模型,将动物分为胚胎脊髓移植 大网膜组、胚胎脊髓移植 椎旁肌组、胚胎脊髓移植组、损伤对照组。移植后1、2、4、8、12周,进行HE、Nissl、嗜银染色、电镜检查和免疫细胞化学检查,观察移植存活、分化及其宿主之间的关系。结果 提供血运的胚胎脊髓移植到损伤的脊髓后,移植物膛逐渐增大,充满损伤的洞腔,并可在宿主脊髓内继续分化发育,与宿主脊髓形成部分纤维和血管联系。结论 带蒂的大网膜和胚胎脊髓组织联合移植能较好地修复损伤的脊髓。     

骨髓间充质干细胞移植对低龄扩张型心肌病模型鼠心功能及心室肌钠通道的影响

目的 观察阿霉素诱导的低龄扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)模型鼠心功能和心室肌细胞钠通道的情况,以及骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)移植后低龄DCM鼠心功能和钠通道的改变,探讨BMMSCs移植后钠通道对心功能改善的作用.方法 75只14 d龄的雌性SD鼠分为5组:正常组、正常+BMMSCs移植组(正常鼠左室前壁注射BMMSCs)、DCM组、DCM+ PBS移植组(DCM鼠左室前壁注射PBS)、DCM+BMMSCs移植组(DCM鼠左室前壁注射BMMSCs),以腹腔注射阿霉素来诱导低龄DCM模型鼠;移植后4周以荧光显微镜观察心肌组织冰冻切片评价BMMSCs植入情况,通过超声心动图和全细胞膜片钳技术对各组大鼠心功能和钠通道功能的变化情况进行检测.结果 荧光干细胞示踪检查显示植入的BMMSCs在注射点附近呈团分布或沿进针路径分布,生长良好;超声心动图检查显示DCM组心功能较正常组及正常+BMMSCs移植组降低(P＜0.05),DCM+ BMMSCs移植组心功能较DCM组及DCM+ PBS移植组提高(P＜0.05),DCM+BMMSCs移植组移植4周后心功能较移植前提高(P＜0.05);膜片钳检查显示DCM组钠电流(sodium channel current,INa)的电流密度峰值较正常组及正常+BMMSCs移植组降低,电流-电压(I-V)曲线上移,激活减慢,激活曲线右移,失活加快,失活曲线左移,差异具有统计学意义(P＜0.05);而DCM+BMMSCs移植组的INa电流密度峰值较DCM组及DCM+PBS移植组提高,I-V曲线下移,激活加快,激活曲线左移,失活减慢,失活曲线右移,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 BMMSCs移植能改善低龄DCM鼠的心功能,其机制可能与BMMSCs移植后钠通道功能增强有关.     

家兔脊髓缺血再灌流皮层体感诱发电位的变化及其意义

观察缺血再灌流损伤脊髓感觉传导功能的变化规律。方法２４只家兔随机化方法分为对照组,缺血３０ｍｉｎ组,缺血６０ｍｉｎ组和缺血９０ｍｉｎ组,以选择性腰动脉阻断法模拟脊髓缺血再灌流损伤,记录各组在伤前,缺血及再灌注对皮层体感诱发电位的变化。结论脊髓缺血时间越长,再灌流损伤越得 ,脊髓的感觉传导功能损害越明显。     

Eeffect of nerve growth factor on changes of myelin basic protein and functional repair of peripheral nerve following sciatic nerve injury in rats

OBJECTIVE: To investigate the therapeutic effect of nerve growth factor (NGF) on changes of myelin basic protein (MBP) and functional repair of sensory and motor nerve following sciatic nerve injury. METHODS: The sciatic nerves of rats were injured by sectioning with shaver,and divided into 3 groups: NGF group (Group A), group of normal saline solution (Group B), untreated group (Group C). The time point of observation was at the 4th week after operation. Sensory evoked potential (SEP) and motor evoked potential (MEP) were detected by Model WD-4000 nerve potential working diagnosis system. Immunohistochemical analysis was used for identification of MBP. RESULTS: The latency of SEP in the Group A at the 4th week after operation was shorter than that in the Group B (P<0.05). The MEP was elicited in 76% of the Group A and was higher than that in the Group B. Results of immunohistochemistry showed that there were less MBP-positive cells in the Group A than in the Group B in one and four weeks respectively. CONCLUSIONS: NGF can improve the conductive function of injured peripheral nerve and facilitate regeneration of nerve.     

大鼠脊髓原发及继发损伤脊髓诱发电位与运动诱发电位的变化

本文采用改良Allen法，分别以50g／cm和100g/cm打击大鼠T13～L1脊髓．造成不同程度的脊髓损伤，分别观察伤后24小时内的脊髓诱发电位(SpEP)和运动诱发电位(MEP)的变化，以了解不同程度损伤对SpEP和MEP的影响及SpEP、MEP在继发性脊髓损伤中的变化规律。结果表明：①两种不同程度的脊髓损伤均可造成大鼠脊髓SpEP、MEP的明显变化，尤以SpEP变化明显。损伤程度越重，电位变化越明显。②在脊髓损伤后1～24小时内．SpEP、MEP波幅降低，峰措伏时延长，以4～8小时电位变化最明显，表明原发损伤后在受损部位存在自身因索引起的继发性损伤，提示阻止继发损伤的时间应早于伤后4小时并尽可能提前。     

离体培养大鼠海马脑片的形态学与细胞反应性研究

目的:探索离体大鼠海马脑片培养方法,观察培养脑片的形态变化和细胞反应性.方法:选择生后6～9d的Wistar鼠,分离海马,切成400ìm厚的脑片,转移至带有微孔膜插件的6孔培养板内,人37%的CO2培养箱中进行培养.通过肉眼、倒置相差显微镜观察培养海马脑片的形态学变化;用免疫组化染色检测脑片神经细胞内Fos蛋白表达变化,以判断培养脑片有无对外界伤害性刺激的应激反应能力;用膜片钳技术检测神经细胞的电生理活动,以判断培养海马脑片的活性和生理功能.结果:(1)随着体外培养时间延长,培养脑片内神经细胞数目增多,而脑片明显变薄,至培养4周时厚度约150ìm厚.(2)致癫痫样发作药物匹罗卡品作用于脑片后,导致培养海马脑片CA1区细胞内Fos蛋白表达增高.(3)利用膜片钳技术,在培养1、2、3、4周的4个时点对海马脑片CA1区锥体细胞作全细胞记录,皆记录到细胞电流变化图形.结论:本方法在体外培养的海马脑片至少可存活4周,且具备良好的活性和一定的生理功能.