肝癌单克隆抗体HAb18及其碘标记物的质控研究与应用

肝癌单克隆抗体ＨＡｂ１８及其碘标记物的质控研究与应用陈志南，刘智广，米力，仇凯，隋延仿，刘彦仿，刘成刚，徐力青，曲萍（病理学教研室８６３肝癌导向药物课题组）关键词肝肿瘤，抗体，单克隆；ＨＡｂ１８，质量控制中图号Ｒ３９２近年单克隆抗体在人类疾病的治疗和...     

抗人肝癌细胞相关抗原的单克隆抗体

 用人体肝癌培养细胞株SMMC—7721免疫Balb/c小鼠,融合得到六株抗人肝癌细胞单克隆抗体的杂交瘤,选其中一株（B1）连续克隆化培养5次。用间接免疫荧光测定并鉴定抗体,此株杂交瘤能在体外稳定分泌抗体,腹水效价（ELISA）为10^-8。所染色的肝癌以外的组织细胞无明确的反应,仅部分胚胎组织有交叉,说明该单克隆抗体有较好的肝癌细胞相关性。抗体亚型为小鼠IgM型。染色体核型分析,其数量是亲本细胞之和,计2n=80～106,有1～2条中部着丝点标记染色体。该杂交瘤命名为FP-4。     

浅谈多媒体技术在医学细胞生物学教学中的应用

目前,我国高等医学教育既面临着新的挑战也肩负着重大的历史使命,这就要求进行教学改革,不仅进行教学内容的改革,教学方法也需要进行改革,而多媒体技术的引用,不仅使教学手段发生变革,其教学思想、教材内容和形式都发生了变化,尤其对医学细胞生物学这个微观领域的教学研究,注入了新的生命力。作为教师应熟练掌握多媒体技术,使教学信息更加逼真、生动、具体,进一步提高初学者对于知识的长期记忆;同时,合理进行教学设计,适当应用多媒体技术,使其成为形象、可视的教学工具,而不是转型的黑板,以尽快完善多媒体技术在医学细胞生物学教学中的运用。     

肝癌单克隆抗体HAb18-1血清学诊断肝癌的应用

单克隆抗体技术的发展提供了一个有效的手段去发现一些新的肿瘤相关抗原(TA-A)或肿瘤抗原新的位点,并可检测这些抗原的表达。 本文报告应用本室制备的肝癌单抗H-Ab 18-1与郑州搏赛生物试剂实验研究所国     

铁蛋白单克隆抗体IRMA法测定人血清铁蛋白及其初步临床应用

自1972年Addison等建立了铁蛋白免疫放射分析法以来,血清铁蛋白的研究得到了迅速的发展,普遍认为血清铁蛋白的含量反映了机体的铁贮和营养状态,在铁的代谢过程中,铁蛋白是极重要的一环。人们还发现某些恶性肿瘤血清铁蛋白明显增高,这种增高与体内铁的贮备量无关,因此可以作为肿瘤的标记物协助临床诊断。我们在提纯铁蛋白、制备抗铁蛋白单克隆抗体的基础上建立了血清铁蛋白固相免疫放射分析法(IRMA),并初步应用于临床,现报道如下:     

人源噬菌体Fab抗体库构建过程中引物的优化和初步鉴定

目的 优化设计一套引物，扩增全套人抗体Fd片段和L链基因，改善扩增效率，益于人源噬菌体抗体库的构建。方法 根据V-BASE数据库提供的人抗体可变区胚系基因，在其家族分类基础上，根据FR1区5’端保守序列重新分组，设计特异性的5’端扩增引物。同时对设计引物的匹配情况进行分析，并应用PCR扩增和测序反应对其扩增效果进行鉴定。结果 Fd链5’端扩增引物有5条，κ轻链有6条5’端扩增引物，而λ轻链5’和3’扩增引物有10条。分析表明，人抗体可变区胚系基因与5’引物有较好的匹配率，数目较少，匹配率较高。PCR结果显示，全部的重链及轻链引物对均能高效扩增出特异性较高的目的片段。测序结果表明PCR扩增产物具有较好的亚类和可变区家族分布。结论 优化了一套扩增全套人抗体Fd片段和L基因的引物，为人源噬菌体抗体库的构建奠定了良好的基础。     

肝癌单克隆抗体亲和常数测定及其在体内的导向意义

单克隆抗体的亲和常数反映了抗体的亲和力及其靶抗原分布的位点和密度,是选择具有导向意义的抗肿瘤单抗的重要依据。本文报告肝癌单抗HAb18亲和常数的测定及其在导向诊断中的意义。 取HAb18 IgG单抗,采用高效碘标法,参照Hayes DF等法,取标记抗体起始浓度     

99Tcm-标记肝癌单抗片段HAb18F(ab')2方法改进及放免显像实验研究

目的　改进９９Ｔｃｍ 直接标记抗人肝癌单克隆抗体片段ＨＡｂ１８ Ｆ（ａｂ′）２ 的方法,进行９９ＴｃｍＨＡｂ１８ Ｆ（ａｂ′）２ 在荷人肝癌裸鼠模型中的放射免疫显像。方法　用ＳｎＣｌ２·２Ｈ２Ｏ 为还原剂,葡庚糖酸钠（ＧＨ）作转换络合剂和稳定剂,直接法标记抗体片段。Ｅｌｌｍａｎ 法测巯基数。用纸层析法、ＳＤＳＰＡＧＥ及放射自显影法进行标记物的质控。荷瘤裸鼠尾静脉注入标记抗体７－４ ＭＢｑ 后,于不同时间显像;在最佳显像时间点研究生物学分布。结果　整个标记过程可在１－５ ｈ 内完成,最佳标记率为８４－２％ 。该方法条件温和,没有导致标记抗体分子的降解。标记物５ ｈ 内的解离率＜０－５％ 。荷瘤裸鼠注射标记抗体后,２４ ｈ 肿瘤放射性浓聚最明显,除双肾区有浓聚外,胃肠道和甲状腺未见放射性浓聚;在该时间点,瘤／血和瘤／ 肝比值分别为１１－７ ±２－４ 和４－６ ±０－３ 。结论　９９ＴｃｍＨＡｂ１８ Ｆ（ａｂ′）２ 有望用于肝癌的放射免疫显像     

抗人肝癌单抗HBb18F（ab‘）2片段的制备及纯化

目的：制备抗人肝癌单抗（McAb)HAb18F(ab')2片段。方法：用二硫苏糖醇（DTT）激活木瓜蛋白酶,pH5.5环境下消化HAb18McAb(IgG1),然后用快速蛋白液相色谱（FPLC）DEAE－Sepharose-FF柱（2cm×18cm)纯化,对所获F(ab')2段的纯度,免疫活性,热原质,细菌,产率等方面进行质量检测。结果：在酶：抗体为1：20,消化HAb182h,95%以上IgG裂解为F（ab')2段,纯化后F(ab')2段的纯度为＞96．1％,纯化周期60min,一次制备量可达500mg产率为53％,免疫尖性1：8000,细菌,热原检测结果为阴性。结论：该法是一种快速,大量制备高产率,高质量McAb IgG1亚类F（ab')2段的有效方法。     

菌落PCR快速分析抗体库重组率时的假阳性现象

目的　评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性。方法　鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后 ,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点 ,电转化XL1 blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库。比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶切法鉴定转化菌阳性重组率的一致性。同时用空菌、空载体、空载体菌等作模板为对照PCR ,以排除相关组分的干扰。结果　建立的Lc库的库容为 1.175×10 6CFU ,Fab库的库容为 1.0 2×10 6CFU。 3种方法鉴定的阳性重组率不同 (Lc的重组率依次为 10 0 %、78%、78% ,Fd的重组率依次为 90 %、6 6 %、6 6 % ,Lc与Fd同时插入的重组率依次为 90 %、5 0 %、5 0 % )。菌落PCR法鉴定的重组率偏高 ,存在假阳性现象。对照PCR提示 ,XL1 blue菌本身可能是导致假阳性扩增的原因。结论　用菌落PCR法不能准确鉴定噬菌体抗体库的重组率 ,用质粒PCR法或质粒酶切法鉴定更为可靠