结核分枝杆菌重组EIS蛋白血清学诊断价值的研究

目的研究结核分枝杆菌重组EIS蛋白的抗原性,观察抗结核化疗对抗EIS抗体滴度影响,初步探讨EIS蛋白作为血清诊断抗原在筛选活动性肺结核作用的可能性.方法采用基因工程方法表达纯化EIS抗原,以EIS为抗原建立酶联免疫方法,检测肺结核病人和健康对照者中抗EIS抗体的存在情况.对初次化疗的肺结核病人进行抗EIS抗体水平的随访,观察化疗对抗体反应的影响.结果肺结核病人抗EIS抗体的水平显著高于健康对照和肺部非肺结核疾病对照（P＜0.000 1）,结核化疗对抗体反应的影响不大,在整个化疗过程中抗体水平无显著差别.结论 EIS抗体的检测可能有助于活动性肺结核的筛选.     

严重急性呼吸综合征患者不同临床标本中冠状病毒基因结果分析

为了解严重急性呼吸综合征 (SARS)患者不同标本中SARS冠状病毒RNA的阳性检出率 ,对我院收治的 2 7例SARS患者的咽拭、漱喉液、血清 (浆 )、外周血单核细胞(PBMC)及粪标本SARS冠状病毒进行检测 ,现将结果报告如下。材料和方法一、样本来源2 7例SARS患者不同标本 ,采自本院 2 0 0 3年 2～ 4月住院患者 ,男 14例 ,女 13例 ,年龄最大 6 9岁 ,最小 6岁 ,平均年龄 (31.4± 10 .2 )岁。所有病例均符合广东省传染性非典型肺炎防治方案的诊断标准。 30例咽拭子对照为远离市区的植物园园工 ;粪及血清 (浆 )对照为 2 0 0 2年 6月本院职工体…     

慢性乙型肝炎患者外周血中记忆T细胞亚群分布研究

目的了解慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中CD4+、CD8+T细胞的分布,以及相应记忆细胞亚群的表达水平,为研究记忆T淋巴细胞在抗乙肝病毒感染中的作用提供基础。方法采用多色流式细胞仪检测技术,检测慢性乙肝病例和健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CCR7的表达情况。结果乙肝组CD4+、CD8+T淋巴细胞分别占外周血PBMC的(11.56±5.78)%、(13.11±6.64)%,均低于对照组,差异均有统计学意义(P值均0.05)。乙肝组和对照组外周血PBMC中,CD4+TEM的表达水平高于CD4+TCM,CD8+TEM的表达水平高于CD8+TCM,差异均有统计学意义(P值均0.05);CD4+TEM、CD4+TCM所占CD4+Tm的比例,差异均无统计学意义(P值均0.05);CD8+TEM、CD8+TCM所占CD8+Tm的比例差异无统计学意义(P值均0.05)。结论慢性乙肝病例外周血PBMC中,CD4+、CD8+T淋巴细胞均减少。对照组和乙肝组外周血PBMC中,CD4+、CD8+T记忆淋巴细胞均以TEM为主。     

飞行时间质谱与TaqMan探针技术在结核病易感性相关基因单核苷酸多态性筛选中的应用

目的 对比分析飞行时间质谱技术（MALDI-TOF）和TaqMan探针筛选与结核病易感性相关单核苷酸多态性（SNP）位点的结果,以及联合应用的方法学和效果评价.方法 选取2010年10月至2011年4月在深圳市第三人民医院收治并确诊的结核病患者400例为结核病组,对照组为同时期收集的健康体检者300名,利用MALDI-TOF对选取的7个SNP位点（rs2227476、rs1800795、rs56077270、rs1800797、rs2227484、rs2227472和rs2227473）同时进行基因分型,初步筛选易感SNP位点;与结核病易感相关的单个SNP位点,采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR对同样的标本再进行基因分型,比较两种方法的准确性与敏感度;以rs2227473位点为实例对分型结果的基因频率进行分析,确定肺结核的易感SNP.结果 MALDI-TOF分型成功率为99.7％（698/700）,TaqMan探针技术为98.4％（689/700）;在基因分型过程中,MALDI-TOF与TaqMan探针方法对1例标本的分型结果不一致,经过对此分型结果进行了测序验证,MALDI-TOF的分型结果正确,MALDI-TOF在准确性和敏感度比TaqMan法稍高.位点rs2227473基因频率分析中,结核病组G等位基因频率（90.3％,722/800）明显高于对照组（82.5％,495/600）（x2=6.911,P=0.009）.结论 上述肺结核易感基因的筛选方法是可行的;实例分析中,将两种方法联合应用,发现了IL-22基因rs2227473位点等位基因G可能与肺结核发病相关,两位点中等位基因A可能为保护性基因.     

IFNA8基因单核苷酸多态性与我国汉族人群结核分枝杆菌易感性的关联分析

目的 探讨我国汉族人群IFNA8基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）与结核分枝杆菌易感性的关系.方法 收集2010年1月至2011年12月期间深圳市第三人民医院收治的结核病患者资料,采用病例对照研究方法,应用MassARRAY飞行时间质谱生物芯片技术,分成检测结核病组（1533例）和对照组（1445名）IFNA8基因SNPs（rs1330322、rs10964982、rs4978116）的基因型,计算各SNP位点等位基因频率（allele frequency,AF）,应用“四格表”x2检验比较两组人群中候选SNP位点等位基因频率的差别,以P＜0.05为差异有统计学意义,并计算相应的比值比（odds ratio,OR）和95％置信区间（95％CI）.结果 （1）rs1330322位点A等位基因频率在结核病组、对照组中分别为30.5％（936/3066）、27.8％（804/2890）,差异有统计学意义（x2=5.277,OR=1.140,95％CI=1.019～1.275,P=0.022）.rs10964982和rs4978116位点的次要等位基因频率在结核病组中分别为17.0％（520/3066）和28.8％（882/3066）,在对照组中分别为17.0％（491/2890）和28.6％（826/2890）,两组间差异无统计学意义（x2值分别为0.001、0.025,P值分别为0.976、0.874）.（2）根据性别分层发现,结核病组女性患者中,rs1330322位点等位基因A频率为30.8％（330/1072）,对照组等位基因A频率为26.6％（300/1126）,两组间差异有统计学意义（x2=4.605,OR=1.225,95％CI=1.018～1.474,P=0.032）.男性结核病组、对照组患者等位基因A频率分别为30.4％（606/1994）、28.6％（504/1764）,两组间差异无统计学意义（x2=1.489,OR=1.091,95％CI=0.948～1.256,P=0.222）.（3）对女性患者进一步进行年龄分层发现,对于rs1330322位点,≤25岁结核病组、对照组A等位基因频率分别为33.8％（111/328）、25.2％（112/444）,两组间差异有统计学意义（x2=6.818,OR=1.516,95％CI=1.108～2.074,P=0.009）.而＞25岁人群A等位基因在两组人群中差异无统计学意义（x2=0.610,OR=1.096,95％CI=0.871～1.380,P=0.435）.结论 SNP位点rs1330322与结核分枝杆菌易感性密切相关,rs1330322位点基因型在女性、年龄≤25岁组人群具有更高的结核病患病风险预测价值.     

流式检测C1_q~+的细胞表达及在肺结核诊断中的价值

目的初步建立全血细胞中CD+16CD+68CD+14CD-3C1+q的流式检测方法,评价其在结核病诊断中的价值。方法利用流式细胞技术检测CD+16CD+68CD+14CD-3细胞表面C1+q的表达,比较其在健康照(26例),结核潜伏感染者(12例)、活动性结核患者(19例)的表达情况。结果活动性结核患者组外周血CD+14CD-3细胞显著高于健康对照(P0.05);活动性结核患者组CD+16CD+68CD+14CD-3细胞表面C1+q的表达显著高于结核潜伏感染组和健康对照组(P0.05)。结论在活动性结核病人的外周血中,C1+q在CD+16CD+68CD+14CD-3细胞表面高于潜伏感染者,为活动性肺结核患者与潜伏感染者的临床鉴别诊断技术的研究和开发,提供了一条可行的思路。     

超短波治疗结核性胸腔积液的疗效观察

目的:观察超短波理疗结合正规抗痨治疗结核性胸腔积液的临床疗效.方法60例确诊为肺结核并胸腔积液,经正规化疗和胸穿抽液治疗1个月后仍残留胸腔积液而胸腔穿刺不能再抽取的病人,随机分为治疗组(30例)和对照组(30例).     

结核性胸膜炎患者外周血miR-365a-3p、miR-29a-3p的表达及意义

目的 探讨外周血微小RNA （miRNA）在结核性胸膜炎患者和健康对照者之间的差异表达.方法 选取30例结核性胸膜炎患者为实验组,30例健康者为对照组,采集外周血,Trizol法抽提外周血总mRNA,RT-PCR合成cDNA,荧光定量PCR检测外周血miR-365a-3p、miR-29a-3p的表达.结果 结核性胸膜炎组患者外周血miR-365a-3p表达（0.66±0.60）明显高于健康对照组（0.33±0.29）,差异有统计学意义（P＜0.05）,而结核性胸膜炎组患者外周血miR-29-3p表达（0.74±0.65）与健康对照组（0.75±0.31）相似,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 外周血miR-365a-3p可能与结核性胸膜炎发生密切相关,并可能成为诊断结核性胸膜积液的靶点之一.     

外周血单核细胞miRNA表达谱在肺结核中的诊断价值

目的分析活动性肺结核患者(TB)外周血CD14+单核细胞mi RNA表达谱,筛选一组用于结核诊断及鉴别诊断的分子标志物。方法选取健康对照(HD)、结核菌潜伏感染者(LTBI)、TB各6例,采集外周抗凝血并分离外周单个核细胞(PBMC),再用免疫磁珠技术分选CD14+单核细胞,提取总RNA,利用mi RNA芯片检测CD14+单核细胞中mi RNA表达谱。筛选差异表达的mi RNA分子,利用Taq Man探针q PCR技术在大样本人群中进行验证(HD、LTBI、TB各25例)。结果基因芯片结果显示mi R-487家族可以将三组人群进行有效区分,依据其在不同人群中表达趋势共分为4个基因簇。从每个基因簇中筛选具有代表性的4个mi RNA分子进行Taq Man q PCR验证,包括mi R-487b-3p、mi R-134-5p、mi R-487a-3p、mi R-539-3p,其表达趋势与芯片结果一致。其中TB人群mi R-487b-3p表达量显著低于HD、LTBI,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01);mi R-487a-3p在LTBI、TB人群中表达水平显著低于HD(P<0.01,P<0.05);TB人群mi R-539-3p表达水平显著高于HD、LTBI(P<0.05,P<0.05)。结论 mi R-487家族与结核菌感染、发病的关系密切,其中mi R-487b-3p联合mi R-539-3p可以作为活动性结核诊断标识,而mi R-487a-3p可以作为结核菌感染诊断标识。     

卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响

目的探讨卡介苗（BCG）对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点（简称Elispot）检测影响,评价Elispot检测在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值。方法对98例某高校学生同时进行Elispot检测和PPD皮试,其中27例PPD皮试结果和Elis-pot检测均为阴性的受试者进行卡介苗接种。结果 98例受试者中,48例PPD皮试阳性,13例Elispot检测阳性,两种检测结果比较差异有统计学意义。对上述27例受试者接种BCG后PPD皮试结果全转为阳性,Elispot检测仍为阴性。在BCG接种前后,ESAT-6和PoolA作用下IFN-γ分泌水平均无差异;但在BCG作用下,BCG接种后IFN-γ分泌水平显著高于接种前。结论 Elis-pot检测体外IFN-γ应答反应不受卡介苗接种影响,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试。