用MALDI-TOF MS技术快速鉴定临床分离棒状杆菌属细菌

目的评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速鉴定临床分离的非白喉棒状杆菌的价值。方法收集本院58株非白喉棒状杆菌,用MALDI-TOF MS和16S rRNA基因测序两种方法进行鉴定和比较。用MALDI-Biotyper软件构建不同棒状杆菌MALDI-TOF MS蛋白系统发育树。结果 58株非白喉棒状杆菌中,54株MALDI-TOF MS与16S rRNA基因测序鉴定结果一致,包括34株纹带棒状杆菌(Corynebacterium straitum)、11株杰氏棒状杆菌(C.jeikeium)、3株C.resistens、2株解葡萄糖苷棒状杆菌(C.glucuronolyticum)、2株黏金色棒状杆菌(C.aurimucosum)和2株无枝菌酸棒状杆菌(C.amycolatum)。4株16S rRNA基因测序无法鉴定到种的菌株中,MALDI-TOF MS鉴定为2株产黏棒状杆菌(C.mucifaciens)、1株C.singulare和1株假白喉棒状杆菌(C.commune)。结论 MALDI-TOF MS可将棒状杆菌属细菌快速、准确地鉴定到种。     

四种碳青霉烯类抗生素筛选金属酶方法的比较

目的 以EDTA为金属酶抑制剂,比较4种碳青霉烯类抗生素对金属酶筛选的效果.方法 从浙江大学附属第二医院收集产金属β内酰胺酶革兰阴性杆菌30株(16株肠杆菌科细菌和14株非发酵菌)、产KPC肠杆菌科9株和产OXA鲍曼不动杆菌10株,用双纸片金属酶筛查试验分析IPM、MEM、PAN和ETP在加入EDTA前后抑菌环直径的变化.结果 当以抑菌环直径差值≥5 mm为假定判读标准时,PAN组的敏感度相对较高[66.7％ (20/30)],其次为MEM组[63.3％ (19/30)]和IPM组[60.0％ (18/30)],ETP组最差[43.3％ (13/30)];当以抑菌环直径差值≥4 mm为假定判读标准时,MEM组和PAN组的敏感度达到80.0％ (24/30).以抑菌环直径差值≥3 mm为假定判读标准时,IPM组和MEM组的敏感度达到90.0％ (27/30),而PAN组和ETP组的敏感度为83.3％ (25/30);在这3类假定判读标准下,4种抗生素的特异度均达到100％.用金属酶筛查试验筛选16株产金属酶的肠杆菌科细菌,当以5 mm为假定判读标准时,PAN组的敏感度最高[75.0％ (12/16)];以4mm为假定判读标准时,PAN组的敏感度高达93.8％ (15/16),远高于IPM组[75.0％ (12/16)]、MEM组[68.8％ (11/16)]和ETP组[68.8％ (11/16)].结论 以EDTA为抑制剂的金属酶筛查试验,操作简便快捷,特异性高.不推荐使用ETP来筛查金属酶,对于革兰阴性杆菌的金属酶筛选可选择以≥4 mm为判读标准的MEM或PAN纸片;对于肠杆菌科细菌的金属酶筛选试验可选择以≥4 mm为判读标准的PAN纸片;而对于非发酵菌的金属酶筛查试验,不推荐使用PAN.     

HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核杆菌的应用研究

目的 采用HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核分枝杆菌,评价其优缺点.方法 收集浙江、安徽等地74株临床非结核分枝杆菌,采用HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核分枝杆菌,并用16S rRNA基因测序方法对其进行比较和评价.结果 74株非结核分枝杆菌HAIN基因分型试剂盒鉴定结果为:31株胞内分枝杆菌,12株脓肿分枝杆菌,8株偶发分枝杆菌,6株堪萨斯分枝杆菌,5株鸟分枝杆菌,3株耻垢分枝杆菌,2株草分枝杆菌,2株瘰疬分枝杆菌,1株戈登分枝杆菌,另外有4株菌株只能鉴定为分枝杆菌属,不能鉴定到种.8株结核分枝杆菌鉴定准确.与16SrRNA基因测序相比较,HAIN基因分型试剂盒除了4株菌株只能鉴定为分枝杆菌属以外,其余70株非结核分枝杆菌均能鉴定到种,鉴定符合率为94.59％;并且它能进一步区分脓肿分枝杆菌和龟分枝杆菌,以及堪萨斯分枝杆菌和胃分枝杆菌.如果单纯鉴定HAIN基因分型试剂盒菌株范围之内的临床最常见非结核分枝杆菌菌株,鉴定符合率为100％.结论 HAIN基因分型试剂盒鉴定临床非结核分枝杆菌时间短、操作简单、结果准确,可在临床推广使用.     

金黄杆菌属β内酰胺酶基因型研究

目的了解金黄杆菌属β内酰胺酶基因型的分布。方法采用琼脂稀释法检测43株脑膜炎败血金黄杆菌、16株产吲哚金黄杆菌和10株黏金黄杆菌对15种抗生素的最低抑菌浓度；用三维试验和改良三维试验检测碳青霉烯酶；用2-巯基丙酸协同试验检测金属酶；用6对针对金黄杆菌属的特异性引物扩增金黄杆菌的β内酰胺酶基因并测序。结果喹诺酮类抗生素的MIC50和MIC50较低，其余的抗生素的MIC值均很高，黏金黄杆菌的MIC值要低于其他两种金黄杆菌。表型筛选试验脑膜炎败血金黄杆菌中共检测到26株产金属酶，阳性率为60．5％，43株全部产超广谱β内酰胺酶，阳性率为100％；产吲哚金黄杆菌和黏金黄杆菌均未检出超广谱β内酰胺酶，产吲哚金黄杆菌检出11株金属酶，阳性率为68．8％；黏金黄杆菌检出6株金属酶，阳性率为60％。脑膜炎败血金黄杆菌检出金属酶基因型Bla-B1、B2、B3、B5、B11共5种，Bla—GOB2、GOB4、GOB6、GOB8共4种；检出超广谱β内酰胺酶CME-1型1种。产吲哚金黄杆菌3株均为IND-1型金属酶基因型。黏金黄杆菌检出6株CGB金属酶基因型。同时发现产吲哚金黄杆菌有8株，黏金黄杆菌有3株没有检测到目前国内外所报道的基因型。结论金黄杆菌属基因型的研究为临床抗生素的合理应用，降低医院感染以及新型抗生素的开发提供重要的指导意义。