基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱仪检测KPC型碳青霉烯酶的研究

目的 用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱仪(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)比较产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌在不同药物浓度下水解厄他培南的能力.方法 收集浙江大学医学院附属第二医院临床分离的19株单产KPC肠杆菌科细菌,包括10株奇异变形杆菌,3株产气肠杆菌,2株黏质沙雷菌,2株弗劳地柠檬酸杆菌,1株肺炎克雷伯菌,1株阴沟肠杆菌；杭州市中医院分离的7株产KPC摩根摩根菌,以及上述7株摩根摩根菌和部分奇异变形杆菌(4株)的大肠埃希菌转移接合子.用MALDI-TOF MS检测产KPC肠杆菌科细菌水解厄他培南的能力.结果 当厄他培南浓度为0.1 g/L时,37株单产KPC型碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌在1.5h内全部水解厄他培南,质谱图显示厄他培南所呈现的3个峰全部消失,灵敏度高达100％；当厄他培南浓度为0.3 g/L时,1.5h组水解厄他培南的灵敏度为70.3％ (26/37),2.5h组为89.2％ (33/37),3.5h组为94.6％ (35/37)；当厄他培南浓度为0.5 g/L时,1.5h组水解厄他培南的灵敏度为48.6％ (18/37),2.5h组为83.8％ (31/37),3.5h组为94.6％( 35/37).两独立样本非参数检验统计显示:厄他培南0.1 g/L组与0.3 g/L、0.5 g/L组之间的水解时间差异有统计学意义,而0.3 g/L与0.5 g/L组之间的水解时间差异无统计学意义；细菌组内数据统计显示,除奇异变形杆菌组与大肠埃希菌组之间差异有统计学意义外,其他各细菌组之间差异没有统计学意义.结论 MALDI-TOF MS操作简便,可快速检测产KPC型碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,敏感率高,假阳性率低,适合微生物检验中用于产KPC型碳青霉烯酶的检测,推荐使用0.1 g/L的厄他培南作为水解底物来检测产KPC型肠杆菌科细菌.     

金黄杆菌属连续5年耐药性监测与β-内酰胺酶的检测

目的了解医院金黄杆菌属的分离和耐药情况,并探索其产生耐药的机制。方法对医院5年间分离的金黄杆菌属进行鉴定和K-B法药敏试验;同时选择43株脑膜脓毒金黄杆菌、16株产吲哚金黄杆菌和10株黏金黄杆菌共69株,用琼脂稀释法检测14种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）;用三维试验和协同试验筛选超广谱β-内酰胺酶及碳青酶烯酶。结果2001年1月-2005年12月5年间共检出金黄杆菌属1128株,其中脑膜脓毒金黄杆菌占88.3%、产吲哚金黄杆菌占8.0%、黏金黄杆菌占2.9%,其他金黄杆菌占0.8%;金黄杆菌属除了喹诺酮类抗菌药物的MIC50和MIC90较低外,其余的抗菌药物均很高;脑膜脓毒金黄杆菌金属酶阳性率为60.5%,产吲哚金黄杆菌阳性率为68.8%,黏金黄杆菌阳性率为90.0%。结论金黄杆菌属对多种抗菌药物耐药,不同种类的金黄杆菌属对不同的抗菌药物耐药性有很大的差异,金黄杆菌属的耐药机制主要是产生了以金属酶为主的β-内酰胺酶。     

免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体检测结核分枝杆菌菌群方法学评价

目的 用免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体快速检测和诊断结核分枝杆菌结核菌群的方法学评价。方法 共收集20株临床标本分离菌株、11株参考菌株和1株结核分枝杆菌标准菌株，应用免疫色谱法检测在培养基上生长的细菌，并和传统鉴定方法、实时荧光探针定量PCR法（FQ-PCR）作比较研究。结果 用免疫色谱法检测1株标准菌株为阳性，检测11株参考菌株发现用该法能完全区分结核和非结核分枝杆菌。对20株临床分离的标本用免疫色谱检出11株结核菌菌群，检出率为55％；用传统鉴定方法检出10株，其中未能检出的一株为混合菌感染；用FQ-PCR法检出10株，其中未能检出的一株为牛结核菌。免疫色谱法能检测到的最低菌浓度为10^5CFU／ml。免疫色谱法、FQ-PCR法和传统鉴定方法的平均耗时分别为15min，1～2d和30d。结论 免疫色谱法是一种简便、快速、准确、敏感和特异性鉴别结核和非结核分枝杆菌的方法，适合在临床推广使用。     

在一株弗劳地柠檬酸杆菌中发现KPC-2型碳青霉烯酶

柠檬酸杆菌为条件致病菌，机体抵抗力下降时可引起腹泻和肠道外感染如败血症、脑膜炎、泌尿道、呼吸道及创伤感染等。根据中国医院内病原菌耐药监测网（NPRS）数据，1994-2001年分离到的革兰阴性致病菌中，柠檬酸杆菌属占第10位。     

不同分子生物学方法快速鉴别非结核分枝杆菌的应用评价

目的 评价3种分子生物学方法快速鉴定非结核分枝杆菌的优缺点.方法 收集41株临床分离的非结核分枝杆菌,以16S rRNA基因测序方法为标准,同时以hsp65基因测序方法及PCR-RFLP方法鉴定菌株,与16S rRNA基因测序结果进行比较.结果 41株非结核分枝杆菌16SrRNA基因测序结果:9株龟分枝杆菌复合群,7株偶发分枝杆菌,7株胞内分枝杆菌,3株鸟分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌复合群,3株耻垢分枝杆菌,3株土分枝杆菌,2株草分枝杆菌,2株无色分枝杆菌,1株瘰疬分枝杆菌,1株M.arupense.与16S rRNA基因测序相比较,hs65 PCR-RFLP能鉴定9株龟分枝杆菌复合群至亚种脓肿分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌复合群鉴定至亚种堪萨斯分枝杆菌;1株偶发分枝杆菌及1株无色分枝杆菌与其不符;其余菌株鉴定结果一致,符合率为95.1%(39/41).hsp65基因测序结果显示,1株爱尔兰分枝杆菌与16S rRNA测序结果不符,其余菌株鉴定结果与其一致,符合率为97.6%(40/41),并且能进一步将9株龟分枝杆菌复合群鉴定至亚种脓肿分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌复合群鉴定至亚种堪萨斯分枝杆菌.结论 3种方法均能快速鉴定非结核分枝杆菌.与16S rRNA基因测序相比,hsp65基因测序及hsp65 PCR-RFLP更容易鉴定临床最常见非结核分枝杆菌(如堪萨斯分枝杆菌和脓肿分枝杆菌),可在临床推广使用.     

多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素耐药状况分析

目的 了解多重耐药鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素及新药替加环素的耐药状况.方法 收集2008-2009年浙江省4所教学医院的602株临床分离鲍曼不动杆菌,采用琼脂稀释法检测其对13种临床常用抗生素的敏感性,以及对多黏菌素B和替加环素的敏感性.同时,采用PFGE技术对24株多重耐药鲍曼不动杆菌进行同源性分析,以确定菌株间的亲缘关系.结果 浙江省4家教学医院2008-2009年分离的鲍曼不动杆菌主要来自于呼吸道标本,2009年达到277株(86.0%),血液标本数量从2008年的15株(5.4%)下降到2009年的5株(1.5%),而其他标本无明显变化.鲍曼不动杆菌对临床常用的13种抗生素均有不同程度的耐药,耐药率35.0%～85.0%.与2008年相比,除左氧氟沙星和妥布霉素耐药率分别下降0.9%和9.0%以外,2009年其余抗生素耐药率均有不同程度地上升,头孢曲松和头孢吡肟耐药率增加了近10.0%,对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达到74.2%(239/602)和70.8%(228/602).鲍曼不动杆菌对替加环素显示了很高的耐药率,耐药率达到78.9%(475/602),而多黏菌素B耐药率仅为3.7%(22/602).PFGE分型显示2008-2009年24株鲍曼不动杆菌有6个克隆型,其中A型最常见,占50%.结论 鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药加大了院内感染控制的难度,临床应加强控制,防止多重耐药菌的传播.

Abstract：

Objective To investigate the resistance of Acinetobacter baumannii to clinical common antibiotics and new drug tigecycline. Methods Six hundred and two Acinetobacter baumannii isolates were collected from 2008 to 2009 in four teaching hospitals in Zhejiang province. Agar dilution method was used to detect the resistance of 13 clinical commom antibiotics, polymyxin B and tigecycline. Homology analysis of 24 multi-drug resistant Acinetobacter baumannii strains was used to investigate the relationship of each strain with the method of pulsed field gel electrophoresis. Results From 2008 to 2009, the Acinetobacter baumannii isolates of four teaching hospitals in Zhejiang province were mainly isolated from respiratory specimens with the number of 277 (86.0%) strains in 2009, the number of blood samples decreased from 15 (5.4%) strains in 2008 to 5 ( 1.5% ) strains in 2009, and there were no obvious change in other specimens. Acinetobacter baumannii strains were resistant to 13 clinical common antibiotics at different degree, fluctuated from 35.0% to 85.0%. Compared with the resistance in 2008, levofloxacin and tobramyxin decreased 0. 9% and 9.0% in 2009, respectively. However, the resistance of other antibiotics increased at different degree, the resistance of ceftriaxone and cefepime increased about 10.0%, and the resistance of imipenem and meropenem increased to 74.2% (239/602) and 70.8% (228/602) in 2009,respectively. Acinetobacter baumannii showed high resistance to tigecycline with the percent of 78.9% (475/602), while it was only 3.7% (22/602) for polymyxin B. There were six cloning types among the 24 Acinetobacter baumannii isolates, and the most common type was type A with the percent of 50%.Conclusions The resistance of tigecycline makes the situation of nosocomial infectious more serious. It is necessary to control the transmission of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii immediately.     

gyrB基因和16S rRNA基因序列分析在沙门菌属细菌鉴别中的临床应用评价

最近研究发现，gyrB基因是16S rRNA基因以外适合细菌鉴别的又一理想靶基因。gyrB基因是编码DNA解旋酶B亚单位的基因，其显著优点是基因进化率较快，碱基替换频率较高，在相似细菌的检测和鉴别方面比16S rRNA基因更具优越性。本实验以10株沙门菌为受试对象，     

念珠菌对唑类药物耐药性及耐药机制的研究进展

由于广泛性使用抗真菌药预防和治疗真菌病,念珠菌属对抗真菌药尤其是唑类药物的耐药性大量增加。目前研究较多的是白色念珠菌的耐药方面的机制,然而近年来非白色念珠菌的耐药有增加趋势。本文就国内外目前对念珠菌属的耐药方面研究进行综述。     

水环境分离细菌及临床分离弗劳地柠檬酸杆菌中喹诺酮耐药基因qnr及aac(6')-Ⅰ b-cr的检测

目的 调查水环境分离细菌及临床分离弗劳地柠檬酸杆菌中喹诺酮耐药基因qnr和aac(6')-Ⅰ b-cr的流行情况及qnr基因型分布.方法 从杭州10个不同的水域中分离细菌,从4个城市的多家医院收集弗劳地柠檬酸杆菌临床菌株.琼脂稀释法测定环丙沙星、左氧氟沙星和萘啶酸对细菌的最低抑菌浓度(MIC).PCR方法检测细菌中qnrA、qnrB、qnrS及aac(6')-Ⅰ b-cr基因.对PCR产物进行测序及序列分析,确定各基因型别.结果 从水环境分离到78株革兰阴性杆菌(包括33株肠杆菌科细菌、21株气单胞菌属、10株不动杆菌属、10株假单胞菌属、2株产碱杆菌属和2株邻单胞菌属细菌).10株弗劳地柠檬酸杆菌中有8株qnrB基因阳性;9株大肠埃希菌中qnrS1和aac(6')-Ⅰb-cr基因阳性各1株;1株斑点气单胞菌(Aeromonas punctata)qnrS2阳性.临床分离的103株弗劳地柠檬酸杆菌中,qnr基因检出75株(72.8%),其中qnrA1有3株(2.9%),qnrB有65株(63.1%),qnrS2有1株(1.0%),qnrA1合并qnrB阳性5株(4.8%),qnrS1合并qnrB阳性1株;aa47(6')一Ⅰ b检出33株(32.0%),其中12株(11.6%)存在-cr变异体.qnrB的基因型以qnrB9、qnrB8和qnrB6为主.结论 首次在欧洲以外地区分离到携带qnrS2基因的气单胞菌属细菌.水环境及临床分离的弗劳地柠檬酸杆菌中qnrB基因的携带率非常高,后者同时有较高的aac(6')-Ⅰ b-cr携带率.弗劳地柠檬酸杆菌中qnrB基因的亚型以qnrB9、qnrB8和qnrB6最为常见.     

临床常见革兰阴性杆菌对替加环素的药敏情况分析

目的 了解临床常见革兰阴性杆菌对替加环素的耐药情况。方法 收集2012年9月～10月浙江省9个城市15家医院的393株鲍曼不动杆菌复合群以及2012年1月～12月浙江大学医学院附属第二医院的115株大肠埃希菌,110株肺炎克雷伯菌和99株鲍曼不动杆菌复合群。用Vitek-2 Compact全自动微生物鉴定仪对细菌做鉴定及药物敏感性试验。393株分离自全省的鲍曼不动杆菌复合群用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱仪(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometr,MALDI-TOF MS)进行鉴定。另外挑取393株鲍曼不动杆菌复合群中GN-AST16药敏卡MIC值≥8 μg/ml或4 μg/ml的所有菌株以及少部分MIC值在≤0.5 μg/ml～2 μg/ml之间的不动杆菌159株,这些菌株同时采用Etest法和GN-AST16药敏卡对替加环素的药敏情况进行比较。结果 393株鲍曼不动杆菌复合群经MALDI-TOF MS鉴定为317株鲍曼不动杆菌,32株皮氏不动杆菌和44株医院不动杆菌。采用FDA标准,115株大肠埃希菌对替加环素的耐药率为0.0%; 110株肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药率为7.3%; 99株鲍曼不动杆菌复合群对替加环素的耐药率为6.1%。替加环素耐药革兰阴性杆菌中,85.7%(12/14)对碳青霉烯类耐药; 而碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌中,仅10.0%(12/120)对替加环素耐药。结论 替加环素对临床常见的多重耐药甚至泛耐药革兰阴性杆菌有较好的抗菌活性。不管采用FDA还是EUCAST判读标准,Etest方法的耐药率比GN-AST16药敏卡方法稍低。