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31.
用对应于戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)开读框架ORF1、ORF2和ORF3部分氨基酸序列的三段多肽为抗原,以鼠伤寒沙门菌体为载体,经静脉免疫家兔和经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备出抗-HEV免疫血清。两次加强免疫后,经本室研制的抗-HEV IgGELISA试剂盒检测,1:10稀释血清A值达1.50~2.00。用沙门菌和HEV多肽分别做中和试验,HEV多肽的中和抑制率大于50%,而沙门菌不能中和血清中的抗体。用此免疫血清与抗-HEVIgC阳性的病人血清做阻断试验,阻断率大于50%。上述结果证明家兔和小鼠产生的抗体为特异性抗-HEV抗体。 相似文献
32.
实验证明钴-60照射(2.5 Mrad)对微量细胞培养板有良好的灭菌作用,较紫外线灭菌处理者保存期为长,对细胞无明显毒性,并可反复灭菌使用。 相似文献
33.
采用Bac-to-Bac系统,分别将Fd、轻链连同其信号肽基因克隆于pFastBac Dual不同启动子下,转化DH10Bac后,快捷方便地获得重组病毒,并且在sf9细胞中表达出具有HAV抗原结合活性的Fab。 1.材料和方法:(1)质粒、细胞株:pBSFdS:含重链及其信号序列基因的质粒,pBSLS:含轻链及其信号序列基因的质粒,由本室构建;pFastBac Dual质粒购自美国Gibco公司。草地贪夜蛾细胞(sf9),购自美国Invitrogen公司。(2)重组Bacmid的筛选:重组转座载体pFBFab转化DH10Bac,涂布于X-gal和IPTG的平板,挑选较大的白色菌落,提取质粒,即为重组的Bacmid。(3)转染sf9细胞:用Lipofectamine Plus转染,27℃培养过夜,次日换液,继续培养72h。收集上清液,500×g离心10min,将上清液分成小份作病毒原种。(4)重组蛋白的表达及检测:每瓶加入含适量重组杆状病毒毒种的完全培养基2ml,加入 相似文献
34.
35.
本文以普氏斑疹伤寒立克次体和斑点热立克次体为参照,对我国斑点热立克次体分离株的代表株 DNA 的 G+C mol%含量进行了分析比较,结果指出,斑疹伤寒群与斑点热群立克次体的 G+C mol%含量不同,分别为29.1和32.05;国内分离的精河株和内-01株分别为32.7和32.4,与参照的斑点热立克次体 Barbash 株(32.5)基本一致,054株的 G+C mol%是30.6,低于斑点热群的 G+C mol%数值,高于斑疹伤寒群的含量,揭示了该株 DNA 的 G+C 含量的特殊性,这是否意味着054株的特殊分类地位或是否是新种有待深入研究。 相似文献
36.
杀菌蛋白DNA改组的初步研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:运用DNA家族改组方法提高杀菌蛋白(BPI23)的杀菌活性。方法:首先将人、猴、兔BPI23基因的PCR产物等量混合,用DNAase I消化,回收50bp左右的片段,再经无引物和有引物2步PCR反应获得与原基因大小相同的改组分子,将其与载体连接获得改组文库。应用Flp-In^TM定点整合表达系统,将BPI23改组文库插入CHO细胞基因组中1个单拷贝位点,分别检测各个细胞克隆的杀菌活性,从中筛选高活性的BPI23改组分子。结果:经过2轮改组和筛选,共获得4个活性高于人BPI23约4倍的克隆,它们与人BPI23基因有7-13个氨基酸的变化。结论:探索了CHO系统中进行DNA改组和筛选的方法与技术路线,成功进行了杀菌蛋白的改组,并为其它分子的改组提供了借鉴。 相似文献
37.
庚型肝炎肝脏免疫组化研究 总被引:15,自引:0,他引:15
目的探讨庚型肝炎病毒(HGV)抗原在肝组织中定位,进一步研究HGV引起肝脏损害的机制。方法采用HGVNS5区抗原制备单克隆抗体(McAb),对4例经临床和病理确诊的血清HGVRNA阳性的慢性庚型肝炎患者肝活检标本,进行免疫组化观察。结果1例呈阳性染色,光镜观察显示:特异染色大部分定位于肝细胞胞浆中,部分有核着色和膜型染色,呈黄色或棕黄色颗粒状,阳性细胞数量少,大多散在分布,部分呈灶性分布;阳性细胞周围可见较多淋巴细胞浸润。结论HGV抗原可在肝细胞中定位,大多呈胞浆型,部分呈核型和膜型,HGV属嗜肝病毒;免疫损伤可能参与了庚型肝炎的肝脏损伤机制 相似文献
38.
39.
颊癌及转移淋巴结角蛋白谱的分析研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨口腔颊黏膜鳞状细胞癌及转移淋巴结角蛋白谱的特点。方法颊部鳞状细胞癌活检标本及转移淋巴结活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹(Western Blot)杂交方法研究转移角蛋白谱的表达。结果颊黏膜化鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如CK18、19,而CK10表达缺失;淋巴结转移鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如19等,并且出现了大量角蛋白片段。结论颊黏膜鳞状细胞癌变异性表达CK18、19,不表达CK 10。转移淋巴结和原发鳞状细胞癌的角蛋白谱是不同的,在口腔鳞状细胞癌淋巴结转移过程中,角蛋白谱发生了变化。 相似文献
40.
目的构建人源靶向补体抑制物CR2-CD59,并筛选中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)高效表达细胞株。方法运用FuGENE6转染试剂,将含有人CR2-CD59的重组PEE14.1质粒转入CHO细胞,蛋氨酸亚氨基代砜(MSX)筛选出阳性克隆,并利用无血清培养基对CHO细胞表达株进行培养获得重组蛋白,以ELISA、SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定。结果成功构建PEE14.1-CR2-CD59重组质粒,获得CHO细胞稳定表达株。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CR2-CD59的相对分子质量同预期结果一致。ELISA和Western blot鉴定重组蛋白CR2-CD59可与CR2、CD59多克隆抗体特异性结合。且与含血清培养基相比,无血清培养基能明显提高CHO细胞的蛋白表达量(P0.05)。结论在CHO细胞中成功表达人源靶向补体抑制物CR2-CD59。 相似文献