检测莱姆病McAb-ELISA竞争法的建立及初步应用

用自制的莱姆病单克隆抗体VLG2 F9株,建立了检测血清中莱姆病抗体的ELISA非限制性竞争法。用超声波粉碎、高速离心相结合制备可溶性抗原;用羟基磷灰石层析法对单克隆抗体进行纯化均获得了满意结果。实验结果表明,ELISA竞争法特异性高、稳定性和可重复性好,操作简便,可用于不同种动物血清的检测,用该方法检测92份人血清阳性率22.8％,同时测定101份牛血清阳性率为69.9％,该法用于莱姆病的实验诊断尚属首次。该法的建立对莱姆病实验诊断的标准化以及流行病学调查具有重要的实际意义。     

抗MS_2多聚酶单克隆抗体的制备及鉴定

应用MS_2-X蛋白(含MS_2多聚酶的98个氨基酸,乙型肝炎X抗原的145个氨基酸)免疫小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合后,经阳性克隆检测,克隆化及体外传代培养,共筛选出了2株抗MS_2多聚酶的单克隆抗体,这在国内尚未见报道。经ELISA及Western Blot实验证实,此2株单克隆抗体只能与MS_2多聚酶发生反应,而不能与乙型肝炎X抗原和正常细菌蛋白发生反应,其抗体亚类为IgG_1,腹水效价为1∶32000～1∶64000。应用抗MS_2单克隆抗体,可以建立亲和层析技术,高效快速地将基因工程表达的MS_2多聚酶—目的蛋白融合蛋白,从大量的细菌蛋白中纯化出来,这对深入研究目的蛋白的结构与功能具有十分重要的作用。     

抗HBx IgM的检测及临床应用

利用羊抗人IgM,基因工程表达的乙型肝炎X抗原和酶标抗-HBx单克隆抗体,建立了检测血清中抗-HBx IgM充体的ELISA双夹心法,并进行了初步应用。实验结果表明,此方法的特异性强,稳定性及重复性好(批内变异系数8.64％,批间变异系数10.60％,重复率为100％),且不受血清中抗-HBc IgM、抗-HAV IgM及类风湿因子的影响。由于目前国内外都没有抗-HBx IgM标准品,故对方法的敏感性没有报道。     

RESEARCH ON THE LOCATION OF THROMBIN RECEPTOR IN THE ATHEROSCLEROTIC CARDIOVASCULAR TISSUES

凝血酶（ｔｈｒｏｍｂｉｎ，Ｉａ）是血管内皮细胞受损部位产生的一种多功能丝氨酸蛋白酶，是参与凝血全过程中的关键酶。Ｉａ激活凝血酶受体（ｔｈｒｏｍｂｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴＲ）并催化水解纤维蛋白原转化成不溶性纤维蛋白而形成血凝块是引发以动脉粥样硬化为病理基础的人类心脑血管疾病的重要原因。我们注意到了ＴＲ胞外Ｎ－末端精氨酸４１／丝氨酸４２被Ｉａ切下的４１个氨基酸多肽（ＴＲ１－４１多肽），是否具有特殊功效？为此，在成功地制备了该多肽的单克隆抗体－ＴＲ１－４１－ＭｃＡｂ基础上，建立了检测ＴＲ的免疫组织化学方法，并在人的心肌和主动脉弓等动脉粥样硬化斑组织中进行了免疫组化定位研究，除了发现在动脉粥样硬化斑血管处的内皮细胞和平滑肌细胞中观察到ＴＲ的广泛表达之外，还首次发现：在心肌梗塞病人的心肌细胞中存在着ＴＲ广泛表达。这为ＴＲ１－４１多肽和其单克隆抗体用于冠心病心肌梗塞病人的临床检测及治疗提供了组织学依据     

抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

目的：表达具有中和活性的抗基孔肯亚病毒人．鼠嵌舍抗体。方法：用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗基孔肯亚病毒鼠源单克隆抗体CHIK-IF1的轻重链可变区基因，克隆人IgG1恒定区基因组基因，构建了轻重链嵌舍基因和表达质粒pCdhfrlL，pcDNA3、1H，共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞，用ELISA检测培养上清中嵌舍抗体的表达，MTX加压筛选表达量高的克隆，扩大培养收集上清并纯化，纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western印迹检测和抗原结合活性的检测。结果与结论：在CHO细胞中成功表达了抗基孔肯亚病毒的嵌舍抗体，为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础。     

用空斑中和试验鉴定登革病毒

登革热是主要虫媒病毒传染病之一,自1978年以来,在我国不断有暴发流行,且已分离病毒成功。但由于黄病毒属病毒之间及登革4个型之间的抗原性交叉比较明显,登革热的病原诊断往往需要几种方法相互参照才能确定。     

中国北方斑点热群立克次体病原学和分子流行病学研究

斑点热是由斑点热群立克次体引起的一系列疾病的总称,包括:落矶山斑点热、钮扣热、北亚热、昆士兰热、立克次体痘和日本红斑热。该病是自然疫源性疾病,人群易感性高且难于消灭。随着资源开发、人们社会实践活动的增加及旅游事业的发展,斑点热在西方和欧洲发病率逐年增高。据报道,美国落矶山斑点热的年发病率为5％,欧洲钮     

利用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法检测凝血酶受体

凝血酶受体被凝血酶激活时，凝血酶受体结合于细胞膜处氨基末端精氨酸41／丝氨酸42被裂解，释放出一个包含有41个氨基酸残基的多肽（TR1－41）。根据TR1－41的氨基酸序列，对其进行合成，并对小鼠进行免疫，筛选得到了4个产生抗TR1－41单克隆抗体的细胞株。利用抗TR1-41单克隆抗体建立了一种检测凝血酶受休的免疫酶组织化学方法-碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法，并成功地检测了心肌细胞凝血酶受体，该方法可以用于组织器官凝血酶受体的检测。     

LETMD1单克隆抗体的鉴定及其在肝细胞癌临床诊断研究中的初步应用

目的:对制备的LETMD1-C末端单克隆抗体进行免疫特性鉴定,并将其应用于肝细胞癌的临床诊断研究。方法:使用ELISA,细胞免疫荧光及Western blot等免疫学技术对所制备的单克隆抗体进行免疫特性鉴定;以鉴定的抗体为工具,检测肝癌组织中LETMD1编码产物表达情况。结果:免疫学鉴定结果验证了制备的单克隆抗体具有较高的使用效价和良好的特异性。检测肝组织标本中LETMD1编码产物表达情况,发现其在正常组织中不表达,在肝癌组织表达明显高于癌旁组织。结论:制备了抗-LETMD1-C末端的单克隆抗体,经鉴定具有较高的效价和良好的特异性,可以应用于LETMD1癌基因的功能研究和肝细胞癌的临床诊断研究,为深入研究LETMD1蛋白的生物学功能和建立新的肝细胞癌早期诊断方法奠定了可靠基础。     

颊黏膜中分化鳞状细胞癌角蛋白谱的分析

目的：研究口腔颊黏膜鳞状细胞癌角蛋白谱的特点.方法：颊黏膜中分化鳞状细胞癌活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹（Western-blot）杂交方法,研究颊黏膜中分化鳞状细胞癌中角蛋白谱的表达.结果：颊黏膜中分化鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如CK18、19,而CK10表达缺失.结论：变异性表达的CK18、19以及不表达CK10,是颊黏膜中分化鳞状细胞癌的一个较为普遍的现象.