宏基因组测序在微生物耐药研究中的应用进展

伴随广谱抗生素的过度使用，临床上多重耐药病原菌和超级细菌不断出现，为临床抗感染治疗带来了严峻挑战，传统微生物培养后药敏实验以及针对于特定耐药基因的基因扩增等方法已经无法满足现有需要，因而迫切需要新的研究方法的出现。宏基因组测序技术以其无偏差、高覆盖为微生物耐药研究提供了又一有利工具，本文对宏基因组测序在肠道、皮肤、组织和重症下呼吸道感染中微生物耐药研究的最新应用做一综述，以期为临床微生物耐药研究提供帮助。     

液质联用-同位素内标法测定赛马血液、尿液中茶碱残留

目的 建立液质联用-同位素内标法测定赛马血液和尿液中茶碱残留的方法。方法 采用6D-茶碱作为内标物，利用强阳离子固相萃取小柱提取茶碱。采用Poroshell 120 SB-C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm，2.7 μm），0.1%甲酸水溶液（5 mmol·L^–1甲酸铵）-0.1%甲酸乙腈为流动相，梯度洗脱；流速为0.4 mL·min^–1；电喷雾源（ESI）离子源；正离子模式；茶碱以181.1>124.1，96.0 m/z（内标物187.1>126.9，99.0 m/z）以多反应监测（MRM）扫描方式进行定性定量。结果 使用Waters Oasis PRIME MCX 3CC/60 mg固相萃取小柱最优，血清和尿液茶碱浓度在1.00~100.00 ng·mL^–1，2.50~100.00 ng·mL^–1与峰面积线性关系良好（r²分别为0.999 9和0.999 6），检测限为0.30，0.75 ng·mL^–1，定量限为1.00，2.50 ng·mL^–1，相对回收率分别为98.93%~114.49%、94.85%~116.25%，批内精密度≤3.81%，批间精密度≤15.53%，血清基质对茶碱有较强抑制作用，尿液抑制作用较弱。结论 经方法学验证，该方法操作简单、快速、准确、灵敏度高，可适用于马兴奋剂中茶碱残留量的检测。