化学发光法检测CYP1A1基因多态性

目的　建立增强化学发光法 (enhancedchemiluminescence,ECL)检测CYP1A1基因多态性的方法。方法　实验方法同ELISA法 ,鲁米诺过氧化氢增强化学发光体系加入酶标板的每一个孔中 ,用单光子计数器检测其发光强度 ,即可鉴定样本基因型。结果　 30个标本的检测结果与ELISA相同 ,其灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高 10 0 0倍 ,比ELISA法高 10倍 ,辣根过氧化物酶标记DIG抗体的量为0 .2mU ,比ASA ELISA法少 ,1h杂交便可以判断标本的基因型 ,最佳杂交时间为 1.5～ 2h ,杂交温度为4 0～ 5 5℃。结论　该方法是一种更加灵敏和简便 ,极具发展前景的检测基因多态性的方法。     

大理市白族的掌纹

掌指皮纹学已被广泛用于遗传学、人类学、民族学、优生学等学科,是医学领域重要组成部分。我们对300名正常白族人的部分掌纹进行了调查,推算了其参数。1材料和方法     

金雀异黄酮对去卵巢大鼠脑抗氧化作用的影响

目的研究金雀异黄酮对去卵巢大鼠大脑抗氧化作用的影响,为使用植物雌激素防治女性更年期后老年性痴呆提供依据。方法40只3月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组、去卵巢对照组、金雀异黄酮组和苯甲酸雌二醇组,给予相应手术和治疗。术后6周分析大鼠额叶、颞叶、海马和基底前脑的SOD和MDA值。结果假手术组颞叶和海马的SOD值低于基底前脑(P<0.05);额叶和颞叶的MDA值高于海马和基底前脑(P<0.05);去卵巢对照组基底前脑的SOD值显著低于假手术组、金雀异黄酮组和苯甲酸雌二醇组(P<0.05),MDA值显著高于假手术组、金雀异黄酮组和苯甲酸雌二醇组(P<0.05);假手术组、金雀异黄酮组及苯甲酸雌二醇组之间SOD值和MDA值差异无统计学意义(P>0.05)。结论去卵巢对照组大鼠基底前脑抗氧化能力显著降低,氧化损伤程度显著升高,金雀异黄酮替代治疗可增加去卵巢大鼠基底前脑的抗氧化能力,降低基底前脑的氧化损伤,可用于女性更年期后老年性痴呆的防治。     

安体舒通改善自发性高血压大鼠心肌纤维化

目的：观察安体舒通对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌纤维化的影响及可能机制。方法:将16只14周龄雄性SHR随机分为安体舒通组和对照组,每组8只，分别以安体舒通30 mg·kg-1·d-1 及等量生理盐水灌胃12周，同时取8只同龄雄性SD大鼠作为正常对照组，用免疫组化的方法对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、转化生长因子β1（transforming growth factors beta-1,TGFβ1）、 胶原Ⅰ和 Ⅲ（collagenⅠand Ⅲ）在大鼠左室心肌的分布及表达进行半定量分析；用RT-PCR的方法检测TGFβ1、CTGF mRNA在心肌表达水平；用Masson染色法观察左室心肌胶原形态，图像分析测量胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）；用碱水解法测定左室心肌羟脯氨酸(hydroxyproline,Hypro)含量。结果:（1）SHR对照组左室重量指数（left ventricular index,LVI）、CVF、Hypro、collagenⅠ和Ⅲ、CTGF、TGFβ1蛋白及mRNA表达明显高于SD大鼠组（P<0.01）；相对于SHR对照组，安体舒通组则显著降低（P<0.05）；（2）相关分析表明：CTGF与TGFβ1、CVF、Hypro和LVI呈高度正相关（P<0.01）。结论:安体舒通能明显改善SHR心肌纤维化，其作用可能是通过阻断盐皮质激素受体和抑制CTGF的表达而实现的。     

经肛门乙直肠切除术中直肠毗邻的应用解剖

目的　以直肠中下段为中心解剖观察其毗邻结构,为临床经肛门切除直肠提供解剖学导向。 方法　 结合28例成人盆部CT扫描资料,对14具成人盆部标本进行解剖观察,用游标卡尺测量直肠阴道（尿道）隔的厚度和肛门括约肌及肛提肌的宽度和厚度,结果进行统计学分析。 结果　直肠中下段及肛管毗邻的诸多肌性部分均分别有自己的筋膜包绕,结构易于辨认;在盆部标本和盆部CT扫描片上,测得直肠尿道隔的厚度分别为（1.65±0.19）cm和（1.26±0.05）cm、直肠阴道隔的厚度分别为（0.89±　0.11）cm和（0.75±0.04）cm,在不同材料间的测得值差异有统计学意义（P＜0.05）,而该结构的厚度在性别间差异有显著性（P＜0.01）,直肠尿道隔的厚度大于直肠阴道隔的厚度。 结论　直肠下段毗邻结构复杂,特别是直肠阴道隔菲薄,应避免手术操作中引起的损伤。     

先天性肾上腺皮质增生症患者21-羟化酶基因启动子区域突变的初步研究

目的研究先天性肾上腺皮质增生症（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌａｄｒｅｎａｌｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ,ＣＡＨ）患者２１－羟化酶基因启动子区域的突变。方法用ＰＣＲ、ＳＳＣＰ、内切酶酶谱分析及测序分析方法对１２例ＣＡＨ患者的２１－羟化酶基因启动子区域进行研究。结果１２例患者中有６例出现异常ＳＳＣＰ条带,其中１例在ＣＫ－２（－１０１）结合区域内的ＫｐｎⅠ内切酶识别位点及其－２０１处的ＴａｑⅠ内切酶识别位点存在突变,并经测序证实。结论在ＣＡＨ患者－２１羟化酶基因启动子区域存在突变,可能为ＣＡＨ发病机理之一。     

I-Ad / IgG2b Fc 二聚体融合蛋白的构建表达及鉴定

目的:构建I-Ad / IgG2b Fc 杆状病毒表达载体,使其在Sf9 昆虫细胞内表达。方法:利用RT-PCR 从BALB/ c小鼠淋巴细胞中扩增出I鄄Ad α、I-Ad 茁和IgG2b Fc 目的基因序列,运用重叠PCR 将I-Adα和I-Ad β分别与Fos 和Jun 的亮氨酸拉链序列相连,形成I-Adα和I-Ad βJun;利用酶切位点Xba玉将I-Ad -Fos 与IgG2b Fc 段相连,形成I-Ad –Fos-IgG2bFc 重组序列;分别将I-Ad 琢-Fos-IgG2b Fc 和I-Ad 茁-Jun 插入杆状病毒表达载体pFastBacTM Dual 的PPH 和PP10 两个启动子的下游,构建出重组载体pFastBacTM Dual+[I-Ad / IgG2b Fc];采用PCR 及限制性内切酶对所构建的载体进行鉴定并测序;将pFastBacTMDual+[I-Ad / IgG2b Fc]转入DH10Bac 感受态,使其在转座子的作用下形成重组杆粒病毒Bacmid+[I-Ad / IgG2b Fc],利用脂质体转染试剂将重组表达载体转染至Sf9 昆虫细胞,P4 后大量感染Sf9 昆虫细胞,收集上清通过PEG20000 浓缩可得到I-Ad / IgG2b Fc 二聚体融合蛋白,通过双抗体夹心ELISA 及Western blot 对表达的蛋白进行检测。结果:PCR 及酶切鉴定以及测序结果证实所构建的pFastBacTMDual+[I-Ad / IgG2b Fc]重组载体具有正确的序列;双抗体夹心ELISA 和Western blot 结果表明重组杆粒能成功感染Sf9 昆虫细胞,并且表达的融合蛋白具有正确构象。结论:成功构建pFastBacTM Dual+[I-Ad / IgG2b Fc]杆状病毒表达载体,并在Sf9 昆虫细胞中表达,为研究I-Ad 限制性的T 细胞奠定了基础。     

64层螺旋CT三维重建活体肝静脉的研究及临床意义

目的:探讨64层螺旋CT应用于正常人活体体肝静脉研究的可行性,观察三维重建肝静脉的一般形态及走行规律.方法:153例正常受试者经肘正中静脉注射造影剂后,使用64层螺旋CT进行上腹部扫描,图像采集后经容积再现(volume rendering,VR)技术重建肝静脉.结果:重建图像清晰,可显示出6～8级血管及与周围组织间的关系.其中153例肝静脉的分型结果如下:①3分支型,占35.3%(54例);②中左共干型,占41.8%(64例);③中左合干型,占20.9%(32例);④中右共干型,占2.0%(3例).结论:64层螺旋CT可以作为研究活体肝静脉形态的有效手段,三维重建能更准确、全方位地显示肝静脉的正常解剖类型和发现变异,而且图像清晰,对于活体肝静脉的研究有较好的临床应用价值.     

大鼠心肌细胞结缔组织生长因子的诱导表达及RNA干扰研究

目的： 探讨心肌细胞对结缔组织生长因子（CTGF）的基础表达及转化生长因子β1（TGF-β1）对其分泌的诱导作用,并进一步研究以RNA干扰(RNAi)技术靶向抑制CTGF对下游纤维化因子的影响。方法: 实验分为以下5组： 组Ⅰ：单纯心肌细胞组;组Ⅱ：TGF-β1诱导组;组Ⅲ：阴性质粒组;组Ⅳ：RNAi组;组Ⅴ：脂质体组。分离培养Sprague Dawley（SD）大鼠乳鼠心肌细胞,以5 μg/L终浓度的TGF-β1对培养的心肌细胞进行诱导,再通过脂质体法将靶向大鼠CTGF的短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染入心肌细胞,流式细胞技术分选出成功转染的细胞。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹（Western blotting）技术进一步研究各实验组心肌细胞CTGF、纤维连接蛋白（FN）mRNA及蛋白的表达水平。结果: 单纯心肌细胞组对CTGF、FN均有低水平的基础分泌,在予以TGF-β1诱导后表达水平显著升高（P＜0.01）;而在靶向特异性RNAi后,上述因子的表达均被显著抑制（P＜0.01）;并且纤维化因子FN的表达水平与促纤维化因子CTGF的表达显著相关。结论: 心肌细胞可自主低水平分泌或诱导后高表达CTGF及下游纤维化因子FN,提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化及心脏重塑过程;而通过RNAi靶向抑制CTGF后可阻抑心肌细胞分泌下游纤维化因子,进一步提示CTGF是促心肌纤维化的关键性细胞因子,而RNAi是一种特异高效的很有前途的干预手段。     

老年骨质疏松性髋部骨折的优化治疗方案

背景：目前国内外学者对于老年性髋部骨折越来趋向于积极的手术治疗。手术治疗首先要根据不同骨折部位、骨折类型、不同年龄和是否合并有内科基础疾病从而选择不同的固定方式,对于老年性髋部骨折治疗的成败起到非常重要的作用。 目的：探讨老年骨质疏松性髋部骨折的优化治疗方案。 方法：2000年1月至2012年1月根据具体情况采用不同方法治疗老年骨质疏松性髋部骨折176例,年龄(76.7±6.3)岁。股骨转子间骨折84例,其中保守治疗7例,动力髋螺钉内固定34例,空心加压螺钉固定18例,解剖钢板内固定7例,人工股骨头置换12例,人工全髋关节置换6例。股骨颈骨折92例,其中双极人工股骨头置换40例,人工全髋关节置换37例,空心加压螺钉固定15例。不同治疗方法的治疗效果按Harris髋关节功能评分标准评定,并观察患者并发症发生情况。 结果与结论：股骨转子间骨折76例,股骨颈骨折85例获随访,随访时间8-26个月。内固定治疗的平均愈合时间为(5.7±1.3)个月。3例发生治疗后感染,1例治疗后10 d并发心肺功能衰竭死亡。不同治疗方法的并发症包括股骨头切割、围术期骨折,内固定或假体松动、术后骨折、股骨头缺血坏死、髋内翻、下肢短缩、骨折延期愈合及对髋再骨折等。双极人工股骨头置换与人工全髋关节置换患者的并发症发生率显著低于保守治疗、空心加压螺钉、解剖钢板及动力髋螺钉置入内固定患者(P < 0.05)。双极人工股骨头置换与人工全髋关节置换患者的Harris评分优良率显著高于保守治疗、空心加压螺钉、解剖钢板及动力髋螺钉置入内固定患者(P < 0.05)。而保守治疗、空心加压螺钉、解剖钢板及动力髋螺钉置入内固定患者相互之间的并发症发生率、Harris评分优良率比较,双极人工股骨头置换与人工全髋关节置换患者的并发症发生率、Harris评分优良率比较,差异无显著性意义(P > 0.05),提示老年骨质疏松性髋部骨折需要积极的综合治疗,对于高龄股骨颈骨折患者最好采用双极人工股骨头置换或人工全髋关节置换治疗为宜。