干细胞因子动员骨髓干细胞归巢梗死心肌的特性变化

目的：观察应用干细胞因子动员后骨髓干细胞归巢于梗死心肌组织及其进一步分化的能力，以及激素干预后其归巢特性的变化。方法：实验于2003—09／2004—09在汕头大学医学院第一附属医院心血管病研究室完成。选用10～12周龄的雄性Wistar大鼠60只。随机分为3组，每组20只，分别为心肌梗死＋动员组、心肌梗死＋激素＋动员组以及心肌梗死组。①结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死模型。②动物分组干预：心肌梗死＋激素＋动员组大鼠于造模后即刻按30mg／kg剂量经尾静脉注射甲基强的松龙注射液。心肌梗死＋动员组和心肌梗死＋激素＋动员组大鼠在造模3h后按30μg／（kg&;#183;d）剂量皮下注射重组人干细胞因子，共5d，心肌梗死组大鼠则于造模后，不作任何处理。③于造模前和造模后24h和4周应用流式细胞仪计数各组大鼠制模前后外周血中CD34阳性细胞（骨髓干细胞表面标记）表达百分率。④随后杀死大鼠，取出心脏，免疫组织化学染色法鉴定检测造模后24h各组大鼠心肌梗死区、边缘区组织中是否存在CD34阳性细胞；检测造模后24h、4周各组大鼠梗死心肌组织中基质细胞衍生因子1的表达。⑤采用BI-2000医学图像分析系统分析造模后24h和4周各组大鼠梗死心肌组织中基质细胞衍生因了1的表达量。对图像进行平均灰度值测定，以此代表该组织切片内基质细胞衍生因子1的相对含量。灰度值的高低与表达量成反比关系。⑥苏木精-伊红染色观察造模后24h和4周各组大鼠心肌细胞形态特征及细胞排列方向等组织学变化。结果：大鼠60只均进入结果分析。①造模后24h和4周大鼠外周血单个核细胞中CD34表达百分率：心肌梗死＋动员组和心肌梗死＋激素＋动员组明显高于造模前【（0．919&;#177;0．187）％，（0．834&;#177;0．110）％；（0．886&;#177;0．104）％，（0．794&;#177;0．296）％；（0．043&;#177;0．023）％，（0．041&;#177;0．028）％，t=2．679，2．3．54．2．413．2．208,P〈0．051。②造模后24h大鼠归巢于梗死灶内心肌组织中CD34阳性细胞数量：心肌梗死＋动员组明显多于心肌梗死＋激素＋动员组和心肌梗死组（t=2．607，2．816，P〈0．05）。（3）造模后24h大鼠梗死灶内基质细胞衍生因子1表达量：心肌梗死＋动员组明显大于心肌梗死＋激素＋动员组和心肌梗死组（t=2．82．5，2．341，P〈0．05），心肌梗死＋激素＋动员组最少。④心肌组织学变化：心肌梗死＋动员组大鼠心肌梗死程度轻，可见CD34阳性的幼稚心肌细胞样细胞，缺血心肌基本结构得到保护。在动员干细胞24h后，心肌梗死＋动员组大鼠心肌梗死灶中有大量CD34阳性单个核细胞浸润，为骨髓源干细胞（包括造血干细胞、内皮干细胞等），同时还发现有与浸润的单个核细胞的胞核相似，但较大而圆，位于细胞中央，胞浆少而深染的细胞，其免疫组化检测CD34也呈阳性，考虑可能是浸润的骨髓干细胞正向心肌细胞分化早期，故形态幼稚。心肌梗死＋激素＋动员组大鼠由于激素治疗的影响，归巢梗死灶的干细胞数量少，因此骨髓动员4周后，心肌梗死＋激素＋动员组大鼠缺血心肌细胞变性，融合成片，心肌组织排列有序的基本结构遭到破坏而瘢痕化：而心肌梗死＋动员组大鼠由于归巢的干细胞数量多，动员治疗4周时的病理切片可见核大、胞浆丰富、深染的心肌细胞，其缺血心肌的基本结构得到保护，组织结构排列基本处于有序状态。结论：①应用干细胞因子动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞后，有较多干细胞向梗死灶迁移存活，在心肌微环境作用下向心肌细胞、血管内皮细胞等方向分化，保护缺血心肌基本结构。②骨髓干细胞动员后，心肌梗死灶内基质细胞衍生因子1表达量上调，可能是吸引骨髓干细胞归巢于梗死灶的原因之一。③骨髓干细胞归巢于梗死灶内不依赖于冠状动脉血流的再通。④激素可阻断炎症反应过程，但同时也抑制了骨髓干细胞向梗死灶归巢。     

D-二聚体及甘油三酯水平与冠状动脉病变的关系探讨

目的　探讨D 二聚体及甘油三酯 (TG)水平与冠状动脉病变的关系。　方法　对 14 2例行冠状动脉造影 (简称冠脉造影 )的病例测定D 二聚体和TG水平。根据造影结果分为冠脉造影阴性组和冠脉造影阳性组 ,冠脉造影阳性组又分为单支单处病变组和多支多处病变组 ,比较各组间D 二聚体和TG。　结果　冠脉造影阳性组D 二聚体和TG水平比冠脉造影阴性组显著增高 (P <0 0 1) ,D 二聚体与TG水平呈正相关 (P <0 0 5 ) ;与单支单处病变组比较 ,多支多处病变组D 二聚体水平显著增高 ( P <0 0 1)。　结论　冠状动脉病变与D 二聚体及TG水平关系密切 ;冠状动脉病变范围与D 二聚体有关     

人参皂甙Rg1对大鼠急性心肌梗死的治疗作用

目的探讨人参皂甙Rg1对大鼠心肌梗死后缺血心肌的治疗作用。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死(AMI)模型,随机分为治疗组和对照组,治疗组大鼠采用人参皂甙Rg1治疗。于建模后24h、2周和4周时杀死大鼠,取出心脏,HE染色观察细胞形态特征和心肌基本结构,并测量梗死面积,计算心室肌质量/体重、心肌梗死总面积/左心室肌总面积的百分比;免疫组织化学方法观察心肌组织CD34阳性细胞的表达;并比较治疗前后外周血中CD34阳性细胞数量的变化。结果应用人参皂甙Rg1治疗后,外周血中CD34细胞数量治疗组制模前为0.043%±0.023%,24h时为0.202%±0.081%,2周为0.937%±0.142%,4周为0.834%±0.110%;对照组制模前为0.046%±0.022%,24h为0.056%±0.037%,2周为0.069%±0.045%,4周为0.064%±0.042%;治疗组制模后24h、2周和4周的CD34阳性细胞百分率均比制模前和对照组大鼠的百分率明显升高(P<0.05);治疗组大鼠在第2周、第4周时,心室肌质量/体重均比对照组明显低(P<0.05);治疗组大鼠心肌梗死区可见大量CD34阳性细胞浸润,其梗死面积明显减小;治疗组大鼠心肌梗死程度较对照组减轻,其缺血心肌的基本结构得到保护。结论应用人参皂甙Rg1治疗AMI大鼠,能显著提高外周血的干细胞数量,并促进干细胞归巢梗死心肌,分化为心肌细胞样细胞,缩小梗死面积,明显减轻心室重塑,保护缺血心肌的基本结构。     

CD40和CD40L在大鼠急性心肌缺血中的表达

目的探讨黏附分子CD40和CD40配体（CD40 Ligand，CD40 L）以及氧化应激在大鼠急性心肌缺血中的表达。方法利用对照组（N组，3只）与急性心肌缺血模型组（A组，6只）作比较，用流式细胞技术法检测外周血中CD40和CD40L表达，比色法检测外周血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的水平。结果急性心肌缺血模型组大鼠外周血中MDA、CD40、CD40L表达均高于对照组（假手术组）大鼠，分别为13．12±2．11和4．69±0．69，16．18±2．48和8．5±3．12，14．91±4．81和6．34±0．2，P〈0．01，但SOD则低于对照组大鼠（78．75±10．61和168．90±6．85），P〈0．01。结论提示CD40-CD40L的相互作用以及氧化应激可能参与了急性心肌缺血的机制。     

骨髓干细胞动员疗法对心肌梗死大鼠心脏的促血管生成作用

目的探讨干细胞动员疗法对心肌梗死大鼠冠脉新生血管形成的影响及其作用机制。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死模型，应用粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞释放并归巢于缺血心肌，建模后第24h、48h和4周时处死大鼠，取出心脏，HE染色检测梗死面积，免疫组化方法观察心肌梗死灶、边缘区和正常心肌组织CD34^＋胞、血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（Flk—1）的表达以及Ⅷ因子表达。结果使用干细胞动员剂后，动员组大鼠心肌梗死区可见CD34^＋浸润，心肌梗死面积明显减小，梗死灶及周围组织中微血管密度、VEGF及其受体的表达量均明显高于AMI组及假手术对照组。结论骨髓干细胞动员疗法在大鼠AMI模型中，通过动员骨髓干细胞归巢于梗死灶内，有效促进微血管形成；通过上调VEGF和VEGF受体Flk-1的表达，促进血管再生，促进缺血心脏功能恢复。     

造影剂对大鼠肾脏氧化应激状态的影响及可能意义

目的探讨不同造影剂对大鼠肾脏氧化应激状态的影响及可能意义。方法将24只雌性SD大鼠分为正常对照组（c组）及造影剂肾病（CIN）模型组[高渗离子型造影剂复方泛影葡胺组（HOCM组）、低渗非离子型造影剂优维显组（LOCM组）和等渗非离子型造影剂碘克沙醇组（IOCM组）]。所有大鼠均在注射造影剂后24h杀检。采用常规病理组织检查观察肾脏病理改变,TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡。同时检测肾脏氧化应激指标丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）、超氧阴离子歧化酶（SOD）、总抗氧化活性（TAOC）、过氧化氢酶（CAT）。结果建模后24h与C组比较,HOCM、LOCM和IOCM组肾小管坏死、肾小管上皮细胞凋亡、肾髓质瘀血均显著升高（P〈0．05）,但肾脏病理改变以HOCM组最为显著,IOCM组最轻。与C组相比,HOCM、LOCM和IOCM组肾MDA显著升高（P〈0．05）,而HOCM、LOCM组肾TAOC显著降低（P〈0．05）;与IOCM组相比,HOCM、LOCM组肾MDA明显升高（P〈0．05）;HOCM组肾H2O2分别较C组、LOCM和IOCM组显著升高（P〈0．05）;但SOD、CAT在各组大鼠差异无统计学意义（P〉0．05）。结论大鼠造影剂肾病时肾脏氧化应激显著增强,氧化应激可能参与CIN发病,造影剂肾毒性大小可能与其对肾脏氧化应激影响程度有关。     

ECHOCARDIOGRAPHIC FEATURES IN FEMALE HYPERTENSIVES

To study the echocardiographic features in female hypertensives.Methods Echocardiography was performed by using an HEWLETT PACKARD 5500 Sonographic Computer System and M-mode, 2-dimension, color imaging and pulsed-wave spectral Doppler in 30 females with I ~ E stage essential hyper tension (patient group, PG) and 30 age-matched normotensive females without heart diseases(control group, CG) .The data assessed were automatically calculated by using the Computer System via averaging the measured values of the traced velocity curves from 5 cycles. Data were expressed as x±SD. The t test and correlation analysis were used to analyse the data.Results Compared with CG, the following e-chocardiographic features in PG were shown: left atrial internal dimension (LAID) and left ventricular mass (LVM) were larger; EF slope(EFs) and fractional shortening (FS) were lower; mitrial valve (MVa) and tricuspid valve (TVa) were higher; MVe, MVe/a and TVe/a were lower. The significant results drawn from correlation analysis     

骨髓干细胞动员与缺血心肌血管再生

目的:探讨动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞归巢于梗死心肌后实现血管再生的能力。方法:实验选用10～12周龄的雄性Wistar(清洁级)大鼠60只,随机分为3组:急性心肌梗死+动员组、急性心肌梗死组及对照组,每组20只。结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作心肌梗死模型,用骨髓干细胞动员剂粒细胞集落刺激因子动员自体骨髓干细胞释放并归巢于心肌梗死灶,于造模后24,48h和4周杀死大鼠,取出心脏,通过免疫组化方法观察心肌梗死灶、边缘区和正常心肌组织CD34阳性细胞、血管内皮生长因子及其受体的表达,以及VIII因子表达,并应用流式细胞术比较动员前后外周血中CD34阳性细胞数量的变化。结果:急性心肌梗死+动员组大鼠造模24h,4周后外周血CD34细胞数量分别为(0.919±0.187)%,(0.834±0.110)%,明显高于造模前犤(0.043±0.023)%犦及心肌梗死组大鼠造模24h,4周后犤(0.071±0.104)%,(0.062±0.296)%犦(t=2.697,2.354,2.492,2.195,P<0.05)。急性心肌梗死+动员组大鼠心肌梗死区可见CD34阳性细胞浸润;制模后4周,急性心肌梗死+动员组微血管新生数明显多于急性心肌梗死组和对照组(t=3.125,3.308,P<0.01)。急性心肌梗死+动员组大鼠梗死灶及周围组织中血管内皮生长因子及其受体的表达量均明显高于急性心肌梗死组及假手术组(t=2.099～3.398,P<0.05)。结论:骨髓干细胞动员的方法在大鼠急性心肌梗死模型中,能通过动员内皮干细胞归巢于梗死灶内,有效促进微血管形成;还通过上调血管内皮生长因子及其受体的表达,促进血管再生,促进缺血心脏功能恢复。     

基质金属蛋白酶和氧化应激在大鼠动脉粥样硬化中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶和氧化应激在动脉粥样硬化中的表达。方法利用高脂饮食诱发的大鼠动脉粥样硬化模型(AS组,n=6),与正常饮食大鼠模型(N组,n=6)作对照,用比色法检测外周血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,利用Zymography法检测外周血中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况,利用免疫组织化学法观察MMP-2及MMP-9在主动脉弓表达情况。结果动脉粥样硬化模型大鼠外周血中MDA、MMP-2、MMP-9表达均高于正常饮食组大鼠[(863.12±42.16)CNN/mm2和(484.92±7.90)CNN/mm2,(367.80±44.68)CNN/mm2和(259.00±42.29)CNN/mm2,(12.88±2.47)mmol/ml和(4.69±0.69)mmol/ml],但SOD则低于正常饮食组大鼠[(71.34±7.06)μN/ml和(168.90±6.85)μN/ml],免疫组织化学法显示MMP-2、MMP-9在主动脉弓内皮细胞及内皮细胞间质中表达,而且AS组表达强于N组。结论动脉粥样硬化形成可能与基质金属蛋白酶异常表达及氧化应激有关。     

骨髓干细胞动员对高龄大鼠缺血心脏功能的保护作用

目的:了解从老年大鼠中动员出的骨髓干细胞归巢于梗死心肌和分化的能力,以及对缺血心脏功能的影响,并探讨其可能机制。方法:W istar大鼠分为3组:高龄心肌梗死+动员组、高龄心肌梗死组和青年心肌梗死+动员组。结扎大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死（AM I）模型,动员组大鼠用骨髓干细胞动员剂干细胞因子动员自体骨髓干细胞释放并归巢于心肌梗死灶,于建模后24 h、48 h和4周杀死各组大鼠,取出心脏,通过免疫组化、HE染色方法观察老年大鼠心肌梗死灶、边缘区和正常心肌组织CD34阳性细胞浸润及心肌再生的情况,应用流式细胞仪比较动员前后外周血中CD34阳性细胞数量的变化,并应用BL-420E生物机能实验系统检测老年大鼠心功能指标。结果:使用干细胞因子后,高龄动员组及青年动员组大鼠外周血中CD34细胞数量显著升高,两组大鼠心肌梗死灶均可见大量CD34细胞浸润;高龄动员组大鼠在制模4周时心功能指标显著比高龄心肌梗死组改善,而高龄动员组和青年动员组的心功能指标无显著差异,均显著改善。制模后24 h,高龄动员组大鼠和青年动员组大鼠心肌梗死程度轻,可见CD34阳性的幼稚心肌细胞样细胞,4周后瘢痕组织少,缺血心肌的基本结构得到保护。结论:在骨髓干细胞动员剂作用下,从老年大鼠个体中动员出的骨髓干细胞归巢梗死心肌能力仍得到增强,有较多干细胞向梗死灶迁移,并向心肌细胞等分化,保护缺血心肌基本结构,改善心功能。