硝普钠对内毒素诱导的U937细胞TLR4表达的影响

目的:研究一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937表达TLR4的影响,明确其抗炎机制.方法:佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为四组,即对照组(空白对照)、LPS组(10 ng/ml LPS+100 ng/ml rhLBP)、低剂量SNP组(LPS+rhLBP+50 μmol/L SNP)和高剂量SNP组(LPS+rhLBP+500 μmol/L SNP).用RT-PCR和Western blot测定TLR4 mRNA和蛋白表达.ELISA法测定细胞上清中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果:低、高剂量SNP组TLR4 mRNA的OD值较LPS组(0.308±0.050、0.138±0.004 4 vs 0.342±0.098,P<0.05、P<0.01)低,较对照组高(0.030±0.012,均P<0.01).低、高剂量SNP组TLR4 蛋白的OD值较LPS组(4.42±1.01、3.06±0.07 vs 6.02±1.19,均P<0.01)低,较对照组(2.01±0.09,均P<0.01)高.低、高剂量SNP组TNF-α较LPS组显著降低(105.5±2.56、71.5±7.75 vs 128.67±39.67,均P<0.05),较正常组(60±17.2,P<0.05、P>0.05)高.结论:SNP可能通过抑制TLR4介导的LPS信号跨膜转导,降低其引起的炎症反应,提示SNP对急性肺损伤或脓毒血症可能具有预防和早期治疗的作用.     

丙氧鸟苷诱导转单纯疱疹病毒胸苷激酶基因人肺腺癌细胞A549凋亡研究

目的:观察丙氧鸟苷(GCV)对A549-TK细胞的作用与诱导细胞凋亡的关系。方法:A549-TK、A549两种细胞经50μmol/LGCV作用3～5d后,用电镜、流式细胞仪、细胞凋亡原位检测法(Tunel)观察细胞凋亡。结果:电镜下发现A549-TK细胞有凋亡特征:如凋亡小体、半月征、核浓缩,流式细胞仪发现A549-TK细胞有亚G₀G₁峰,凋亡细胞占12.21%±1.66%,而A549细胞无G₀G₁峰,凋亡细胞占1.32%±0.25%,两者比较P<0.01。Tunel表明A549-TK、A549两种细胞凋亡发生率分别为16%±167%,2.5%±0.36%,两者比较P<0.01。结论:GCV诱导A549-TK细胞凋亡。     

支气管镜在诊疗过程中发生的严重并发症及防治方法探讨

目的探讨支气管镜在诊疗过程中发生的主要并发症及防治方法.方法回顾性分析1983-12～2004-12支气管镜检查和镜下治疗的23 682例患者的临床资料和发生的严重并发症及防治方法.结果 23682例患者共发生严重并发症175例,死亡3例,严重并发症发生率为7.3‰,死亡率为0.13‰.发生的主要并发症为喉、气管、支气管痉挛68例(2.87‰)、大出血37例(1.56‰)、心律失常24例(1.01‰),其他依次为继发性肺部感染16例(0.67‰)、气道梗阻8例(0.34‰)、食管-气管瘘5例(0.21‰)、气胸4例(0.17‰)、肿瘤气管内种植转移4例(0.17‰),结核播散、气管穿孔和死亡各3例(0.13‰).结论随着支气管镜在诊疗过程中的广泛应用,严重并发症的发生率和死亡率均有增加趋势,严格掌握适应证和提高操作技术是减少和预防严重并发症的根本方法.     

多形核白细胞在体外循环后急性肺损伤中的作用

目的研究多形核白细胞(PMN)在体外循环后急性肺损伤发生发展过程中的作用。方法选择24例瓣膜置换术患者,其中男4例,女20例;年龄29～69岁,体重37～73kg。采用支气管肺泡灌洗(bronchoalveolarlavage,BAL)方法收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluild,BALF),同时采集血标本,以观察体外循环心内直视手术后PMN的激活与肺损伤情况。结果本组病例术中转流时间(106.46±33.58)min,阻断时间(77.58±28.02)min,呼吸机辅助时间(24.17±30.90)h。术后患者氧合指数降低明显(P=0.000)。术后周围血WBC计数明显升高(P=0.000)。术后BALF中的白细胞总数(P=0.000)与白细胞分类中PMN所占的比率也明显增加(P=0.000)。BALF与血浆的中性粒细胞弹性蛋白酶(NeutrophilElastase,NE)和MPO水平明显升高(P=0.000)。术后血浆中的血管性假血友病因子(VonWillebrandFactor,vWF)水平也明显升高(P=0.000)。而且,患者血浆与BALF中的NE与患者同时期的氧合指数呈负相关关系,血浆中的vWF水平与患者的氧合指数也呈负相关关系。结论体外循环后周围血液及肺泡中的PMN募集、激活并大量释放蛋白酶,是体外循环后肺损伤的重要机制。     

哮喘豚鼠外周血淋巴细胞凋亡及白细胞介素一5和粒细胞/ 巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达的研究

目的探讨哮喘豚鼠外周血淋巴细胞凋亡及白介素-5(IL-5)、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达。方法实验分为哮喘组和对照组,各15只豚鼠。采用原位末端标记(TUNEL)法检测豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA的表达。结果哮喘组外周血淋巴细胞凋亡率为(3.50±1.00)％,对照组为(6.80±1.50)％,哮喘组显著低于对照组(P＜0.01)。哮喘组IL-5、CM-CSFmRNA表达阳性率分别为(58.00±6.00)％和(49.00±4.00)％,对照组分别为(30.00±2.00)％和(24.00±2.00)％,哮喘组显著高于对照组。结论哮喘豚鼠外周血淋巴细胞IL-5、GM-CSFmRNA的高表达,可能与淋巴细胞被激活、凋亡 受抑制,从而分泌细胞因子增加有关。     

缺氧致大鼠肺组织损伤及低浓度一氧化碳的保护作用

目的 探讨缺氧和一氧化碳(CO)对大鼠肺脏组织结构的影响.方法 36只Wistar大鼠随机均分为正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度CO组.以右心导管法测定平均右心室压力(mRVP)和平均肺动脉压力(mPAP),并且测定全血黏度中切值、血浆黏度、血细胞比容、红细胞刚性指数和右心室肥厚指数[RV/(LV+S)].取心脏及肺脏组织,观察其病理变化,电镜观察大鼠心肌、肺脏、肺动脉的超微结构变化.结果 低氧肺动脉高压组大鼠的mPAP、mRVP、R/(L+S)较正常对照组明显升高(P<0.01);低浓度CO组大鼠的mPAP、mRVP、R/(L+S)虽比正常对照组升高(P<0.05),但低于低氧肺动脉高压组(P<0.01).低浓度CO组血液黏度有所降低,聚集性减弱,红细胞刚性指数降低,和正常对照组比较没有明显差异(P>0.05),与低氧肺动脉高压组比较有所改善(P<0.05).光镜观察发现,低氧肺动脉高压组大鼠较正常对照组均有明显的肺动脉肌层增厚、管腔狭窄,而低浓度CO组肺动脉肌层稍有增厚,宫腔狭窄明显减轻.透射电镜观察见低氧肺动脉高压组肺泡间质增生、纤维化,Ⅱ型上皮细胞不活跃,呈空泡化,内皮细胞肥大,核形态变异,细胞器较多,而低浓度CO组肺泡间质偶见增生,纤维化不明显.结论 低氧可损害大鼠肺组织结构,而CO对缺氧性肺动脉高压大鼠肺脏有保护作用.     

俄罗斯联邦野战内科学发展概况

俄罗斯联邦野战内科学在形成独立的军事医学理论后,历经几十年的发展,现已成为俄罗斯医学的优秀代表学科,其研究内容和救护组织程序等均值得我军借鉴。现就其发展概况作一综述。     

一条肺癌多药耐药相关基因的功能鉴定及染色体定位

目的 进一步分析从肺癌多药耐药细胞株(SPC-A-1／CDDP)克隆出的差异表达基因染色体的定位,并鉴定其耐药相关功能。方法 登录美国国家生物技术信息中心网(www.ncbi．nlm．nih．gov),根据克隆的目的基因序列数据,查询人类基因库,分析确定该基因在人类染色体上的位置。以DNA重组技术构建该目的基因的反义表达载体。电穿孔法将其转染多药耐药细胞株SPC-A-1／CDDP,采用半定量RT-PCR研究该基因表达受抑情况,并以MTT法分析转染细胞对几种化疗药物的敏感性改变。结果 电子信息学确定该目的基因定位在人类染色体的19q13．3～19q13．4位点上。成功构建该基因的反义表达载体,转染反义表达载体的SPC-A-1／CDDP细胞的目的基因mRNA含量明显减少,即基因表达受抑。MTT药敏测试发现转染了反义表达载体的SPC-A-1／CDDP细胞对顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、长春新碱、足叶乙苷和丝裂霉素6种化疗药物的耐药指数分别是3．87、3．28、6．71、2．65、2．11、5．02;对前五种化疗药物的耐药指数与对照细胞相比分别下降了2～3倍。表明该基因与肿瘤细胞的化疗敏感性密切相关。结论 该差异表达基因是一条肺癌耐药相关新基因,其在人类染色体的位置为19q13．3～19q13．4。     

肺动脉平滑肌细胞对低氧诱导的肺微血管内皮细胞白介素表达的调节及机制

目的 研究低氧对肺微血管内皮细胞(PMVECs)的白细胞介素(IL)6、IL-1β、受体酪氨酸激酶(RTK)和Janus激酶3(JAK3)表达的影响,以及肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)在其中的调控作用.方法 单独培养的大鼠PMVECs分为正常(N)组及低氧2h(H2)组、6h(H6)组、12h(H12)组,另设立PMVECs共培养组(与PASMCs共同培养)和单纯培养组,均接受6h或12h的低氧(氧浓度为3%)处理.应用RT-PCR方法 检测IL-6、JAK3的mRNA表达水平,放免法测定培养细胞上清中的IL-6蛋白含量,放射性酶分析法测定细胞膜、胞质中RTK的活性,ELISA法测定细胞培养上清中的IL-1β蛋白含量.结果 低氧刺激后,PMVECs的LL-6、JAK3 mRNA表达及IL-6、IL-1β蛋白含量均增加.与N组比较,低氧处理各组的以上各指标均有所上升(P<0.01),以6h时间点最为明显(P<0.01).胞膜RTK活性在低氧刺激各组明显降低(P<0.01),而胞质RTK活性明显升高(P<0.01),以12h时间点最为明显(P<0.05).在低氧刺激6h后,共培养组的PMVECs内IL-6、JAK3的mRNA表达,以及IL-6、IL-1β蛋白含量均较单纯培养组有所降低(P<0.05);在低氧刺激12h后,共培养组的PMVECs的RTK活性也较单纯培养组降低(P<0.05).结论 低氧可以促进PM-VECs的IL-6 mRNA表达.并能增加IL-6和IL-1β蛋白含量,复合培养情况下PASMCs对此具有下调作用,其机制可能与RTK和JAK涉及的信号转导通路有关.     

RNA干扰her2／neu基因表达抑制肺癌A549细胞增殖的研究

目的:HER2/neu表达对肺癌细胞生物学的影响尚不明了,文中运用RNA干扰技术抑制HER2/neu表达,并观察对肺癌A549 细胞体外增殖的影响.方法:构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体,运用脂质体介导转染A549 细胞并用G418筛选出阳性克隆株;半定量RT-PCR和Western检测转染后HER2/neu mRNA及蛋白的表达水平;FCM检测细胞周期分布; MTT法绘制细胞生长曲线观察体外细胞的增值能力.结果:成功构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体(命名为psilence 3.1-HER2),转染后使A549 细胞HER2/neu mRNA和蛋白的表达较未转染组和阴性对照质粒转染组均显著下调;细胞G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;细胞生长曲线右移、增殖速度明显减慢.结论:psilence 3.1-HER2能够稳定、高效、特异地抑制肺癌A549内her2/neu基因的表达,可显著抑制细胞增殖.针对her2/neu基因的RNAi策略有望成为肺癌的基因治疗的新选择.