piR-hsa-1282在脂多糖诱导的293T细胞急性损伤中的作用

目的: 探讨piR-hsa-1282在脂多糖诱导的293T细胞损伤中的作用。方法: 体外建立脂多糖诱导的293T细胞损伤模型,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测piR-hsa-1282的表达水平,ELISA检测IL-6的分泌改变。蛋白质印迹法分析抑制剂敲减piR-hsa-1282后,293T细胞中凋亡蛋白cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9及炎症蛋白IL-1β表达改变。结果： 脂多糖刺激293T细胞24 h后,细胞活力减弱,凋亡蛋白cleaved-caspase 3表达增强,炎性因子IL-6分泌增多,并且piR-hsa-1282表达也明显上调。与对照组相比,piR-hsa-1282敲减后293T 细胞中cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9及IL-1β蛋白表达降低。结论： piR-hsa-1282可能通过调节细胞凋亡和炎性反应参与脂多糖诱导的293T细胞急性损伤。     

生长抑制因子4基因在胃癌中的表达及临床意义

目的 检测生长抑制因子4（ING4）在胃癌患者组织及外周血中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的相关性及在胃癌诊疗中的应用。 方法 收集30例胃癌患者手术切除的癌组织、对应的癌旁组织和外周血,用RT-PCR、实时定量RT-PCR、巢式RT-PCR检测ING4 mRNA表达;用western blot和免疫组织化学法在蛋白质水平上进行验证,分析ING4在胃癌中的表达水平与临床病理因素的相关性。 结果 RT-PCR和定量结果显示76.7%（23/30）的胃癌组织ING4表达低于对应的癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05); western blot 和免疫组织化学法在蛋白质水平上证实了胃癌组织较癌旁组织中ING4的表达水平下降。胃癌组织ING4的表达与肿瘤分化状态和复发相关,但与临床分期无关。分化水平越低,ING4 mRNA表达越低（P＜0.05);复发的患者癌组织ING4 mRNA表达显著低于未复发患者（P＜0.05)。胃癌患者外周血NG4 mRNA的表达也显著低于健康人。 结论 胃癌组织ING4的表达下调,且与胃癌的分化与复发相关,ING4的基因和蛋白质水平检测可能作为胃癌病程进展或复发监测的新指标。     

大疱性类天疱疮患者白介素2、5、13和γ干扰素的测定

目的：探讨大疱性类天疱疮（BP）患者辅助T细胞（Th）1／Th2亚群的平衡状态及其在发病机制中的作用和临床意义。方法：采用ELISA方法检测BP患者血清、疱液及外周血单个核细胞培养上清中白介素（IL）－2、IL－5、IL－13和γ－干扰素（IFN－γ）的含量。结果：BP患者血清和培养上清中IL－5、IL－13和IFN－γ水平明显升高，而IL－2水平降低；疱液中上述4种细胞因子水平均增高。故BP患者Th1/Th2亚群的平衡状态发生漂移，表现为Th2占优势。结论：Ｔh1/Th2亚群的失平衡与ＢＰ的发病密切相关，通过纠正Th1/Th2亚群的失平衡来治疗BP有一定的临床价值。     

早产时母血及脐血硫化去氢表雄酮含量测定及其意义

目的:探讨母血及脐血硫化去氢表雄酮(DHEA-s)含量与早产的相关性。方法:研究对象选取2002年1月～2003年6月在该院分娩的初产妇33例,其中自发性早产组12例,医源性早产组9例,正常产组12例;母血及脐血DHEA-s含量采用ELISA方法检测。结果:①自发性早产组母血DHEA-s含量(1.025±0.068μg/ml)显著高于医源性早产组(0.065±0.027μg/ml)及正常产组(0.780±0.015μg/ml)(P<0.05),且医源性早产组DHEA-s含量又显著低于正常产组(P<0.05);②自发性早产组、医源性早产组及正常产组母血及脐血DHEA-s含量均相当,无显著性差异(P>0.05),自发性早产组母血及脐血间DHEA-s含量并非呈正相关(r=0.20);③医源性早产组脐血DHEA-s含量(0.040±0.017μg/ml)显著低于正常产组(0.800±0.015μg/ml)及自发性早产组(0.907±0.066μg/ml)(P<0.05)。结论:DHEA-s含量变化与早产的发动相关。     

ⅢA期非小细胞肺癌K-ras基因突变对新辅助化疗的影响

目的探讨ⅢA期非小细胞肺癌(NSCLC)的K-ras基因突变对新辅助化疗的可能影响.方法确诊ⅢA期NSCLC的24例患者接受了2个周期的新辅助化疗,然后手术;观察手术切除肿瘤标本的病理组织学反应,并采用PCR-SSCP分析技术检测手术标本的K-ras基因突变.结果化疗的临床有效率为41.7%(10/24).手术切除率95.8%(23/24),完全性切除率62.5%(15/24).化疗的组织学有效率为43.5%(10/23).23例手术切除标本中9例(31.9%)发生K-ras基因突变.化疗后组织学有效患者的K-ras基因突变率(20.0%)明显低于组织学无效患者(53.8%,P＜0.05),获手术完全性切除的患者K-ras基因突变率(20.0%)显著低于手术不完全性切除患者(75.0%)(P＜0.05).结论新辅助化疗后组织学有效的患者K-ras基因突变率低可能是化疗药物杀灭肿瘤细胞同时也消除了突变的K-ras基因的结果,而不一定是K-ras基因突变影响了新辅助化疗并进而影响患者的预后.进一步增加病例数深入研究是有必要的.     

胃癌外体（exosome）内miRNA-1的检测分析

目的检测胃癌细胞系来源外体(exosome)及其胃癌组织和血清中exosome内miRNA-1的表达水平并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR分别检测胃癌细胞系来源exosome、胃癌患者组织及血清exosome内miRNA-1的表达水平,分析其与临床资料相关性,并绘制ROC曲线进行效能分析。结果 miRNA-1在人胃癌细胞系MGC-803(6.51±0.41)和SGC-7901(14.81±1.30)中的含量明显高于胃上皮细胞系GES-1(1.05±0.25),差异有统计学意义(t分别为11.26、10.38,P均0.01);而MGC-803、SGC-7901细胞培养上清exosome内miRNA-1的表达水平(49.98±11.77和28.68±4.66)显著高于GES-1来源exosome(1.00±0.02)差异有统计学意义(t分别为4.162、5.942,P均0.01);25对胃癌组织标本中有18例癌组织miRNA-1表达上调,7例表达下调,胃癌组织[1.110(0.070,4.307)]平均表达水平高于癌旁组织[1.149(1.110,2.075)],差异有统计学意义(Z=-1.897,P0.05)。miRNA-1在胃癌患者血清exosome内的表达水平[4.130(0.151,12.720)]较体检健康者血清exosome内表达水平[0.704(0.077,7.243)]明显增高(Z=-2.407,P0.05),且与胃癌的淋巴结转移相关;胃癌患者血清exosome内miRNA-1的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.723 0,95%可信区间(CI)为0.627 0~0.818 7,cut off值为2.39,敏感性为66%,特异性为68%。结论胃癌组织及其胃癌患者血清来源exosome内富含miRNA-1,有望成为新的胃癌诊断标志物。     

胃癌患者血清LINC00978表达及其临床意义

目的检测胃癌患者血清中LINC00978表达水平,评估其表达水平与临床病理参数的关系,并探讨其临床诊断价值。方法实时荧光定量RT-PCR检测LINC00978在胃癌细胞、体检健康者、胃良性疾病及胃癌患者血清中的表达水平,分析其与胃癌患者临床病理参数的相关性,并用ROC曲线分析其诊断效能。结果 LINC00978在人胃癌细胞系MGC-803中的表达水平(18.88±1.15)明显高于胃黏膜上皮细胞(1.00±0.03),差异有统计学意义(t=-21.926,P0.05)。LINC00978在胃癌患者血清中的平均含量[3.525(1.385,8.954)]较胃良性疾病患者[0.419(0.258,1.369)]和体检健康者[0.814(0.351,2.510)]均明显升高(Z值分别为-4.834和-4.686;P均0.01),且与淋巴结转移、浸润深度和TNM分期相关(r分别为0.448、0.369和0.383,P均0.01);胃癌患者术后血清中LINC00978的表达水平[0.17(0.15,0.39)]较术前[0.98(0.59,1.61)]明显降低(Z=-5.731,P0.01)。与体检健康者相比,LINC00978在胃良性疾病患者血清中表达差异无统计学意义(Z=-1.693,P0.05)。胃癌患者血清LINC00978的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.807,95%可信区间(CI)为0.723~0.882,当cut-off值为1.806时,其诊断胃癌的敏感性为71.4%,特异性为75.9%。结论 LINC00978在胃癌患者血清中呈高表达,且与淋巴结转移、浸润深度和TNM分期相关,有望成为潜在的胃癌诊断的生物学标志物。     

实时定量PCR检测骨髓间质干细胞及肿瘤细胞BMI-1基因

目的　建立BMI- 1基因(theBcell specificsmoloneymurineLeukemiaVirusintegrationsite 1)表达的实时荧光定量PCR,利用该方法在基因转录水平上研究BMI- 1在间质干细胞 (MSCs)及肿瘤细胞中的表达水平。方法　通过RT- PCR,T- A克隆,real timePCR等方法精确测定并比较BMI 1基因在胚胎MSCs、成人MSCs、A549(人肺腺癌细胞株)、SW 480(人结肠腺癌细胞株)、U937(人髓系白血病细胞株)、健康人外周血淋巴细胞以及白血病细胞中表达水平。结果　测定绘制BMI 1基因的标准曲线(相关系数r=0. 998),胚胎MSCs中BMI- 1的表达水平高于成人MSCs,慢性粒细胞白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中BMI- 1的表达量分别高于急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病,U937和A549中的表达量高于SW 480,健康人外周血淋巴细胞中BMI 1的表达明显低于慢性髓系白血病(P<0. 01)。结论　定量测定BMI -1的real- timePCR方法较稳定、准确。BMI- 1基因可以作为某些肿瘤特别是白血病治疗的靶点,其表达水平可作为判断肿瘤恶性程度的参考指标。     

骨髓间质干细胞与肿瘤细胞中FN1、NME2、TIMP3基因表达检测

目的探讨纤维连接蛋白1(FN1)、肿瘤转移抑制基因2(NME2)、组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)基因在胎儿骨髓间质干细胞(FMSCs)、成人骨髓间质干细胞(AMSCs)、F6、SGC及白血病细胞中的差异表达,寻找肿瘤和白血病的分子生物学特征。方法分别提取FMSCs、AMSCs、F6、SGC及白血病细胞的总RNA,逆转录cDNA,以cDNA为模板用PCR和实时PCR技术分别测定FN1、NME2、TIMP3基因表达水平。结果AMSCs组FN1、NME2、TIMP3基因表达水平均高于FMSCs、F6、SGC组(P<0.001);F6细胞以及白血病细胞中未能检出TIMP3基因的表达。结论FN1、NME2、TIMP3基因的下调以及TIMP3基因的缺如,可能是FMSCs突变为F6肿瘤细胞的分子特征之一;TIMP3基因的下调可能是肿瘤细胞的一种分子标志。