骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

背景：间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状，但是其机制还不清楚。 目的：观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。 方法：DBA/1J小鼠随机分3组，非造模组不造模，阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。 结果与结论：与阳性对照组比较，实验组小鼠关节直径明显减小，关节炎症细胞浸润程度明显降低，但比非造模组略高；小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P < 0.01或P < 0.05)；阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P > 0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平，但TLR8与TLR9的表达无相关性。     

骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

背景:间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚.目的:观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响.方法:DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型.实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞.结果与结论:与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P < 0.01或P < 0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P > 0.05).说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性.     

肿瘤微环境下HMSC分化为肿瘤相关成纤维细胞及其对肿瘤生长作用的观察

摘要：目的：鉴定人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cell,HMSC）在肿瘤微环境下分化为肿瘤相关成纤维细胞（tumor associated fibroblast,TAF）及对肿瘤生长作用的观察。 方法：用Transwell实验鉴定HMSC向人胃腺癌细胞株（SGC-7901）迁移的能力。对与人胃癌组织或SGC-7901培养上清液（TCM）长期共培养后的HMSC细胞,用免疫荧光染色检测肌动蛋白微丝(F-actin)的表达、免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及波形蛋白（vimentin）的表达。用实时定量PCR法检测与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞中α-SMA表达水平。分别以SGC-7901细胞、SGC-7901细胞＋HMSC细胞、胃癌组织与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞、TCM与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞接种裸鼠,构建裸鼠致瘤模型,测定4组模型致瘤时间及瘤体大小。 结果：Transwell实验结果表明HMSC在肿瘤微环境诱导下具有向肿瘤迁移的能力,诱导后的HMSC细胞高表达TAF细胞表面特征蛋白F-actin、α-SMA及vimentin,实时定量PCR结果表明与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞α-SMA mRNA表达水平分别为(0.58±0.05)和(0.52±0.06),与对照组(0.35±0.04)相比明显增高（F=4.72,F=5.31,P均<0.05）。 裸鼠致瘤模型显示经肿瘤微环境诱导后的TAF可促进体内肿瘤生长。 结论：肿瘤微环境诱导下HMSC活化并可分化为TAF,并对肿瘤生长起到促进作用。     

宫颈癌组织中Slug基因及其蛋白质的表达与意义

摘要：目的：检测Slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义。 方法：收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本,用RT-PCR、实时定量PCR检测Slug mRNA的表达;用western blot分析Slug蛋白的表达水平,并分析Slug mRNA在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素及高危型HPV病毒载量的相关性。 结果：宫颈癌组织中SlugmRNA表达阳性率及相对表达水平均显著高于慢性宫颈炎症组织（χ²=9.872;U=140,P均<0.01）;western blot也证实Slug蛋白表达水平高于慢性宫颈炎症组织（U=98,P<0.01）。在宫颈癌组织中,Slug的阳性表达与国际妇产科学联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO）肿瘤分期相关,Ⅱ期阳性率高于Ⅰ期（χ²=4.037,P<0.05）,与年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴细胞转移和病理类型无关;而Slug基因相对表达水平与高危型HPV病毒载量呈正相关（r=0.554,P<0.01）。 结论:宫颈癌组织中Slug的表达上调,且与宫颈癌的FIGO分期相关,在宫颈癌的发生机制中,可能存在Slug和高危型HPV的协同作用。     

人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

摘要:目的：构建重组人Nanog基因腺病毒载体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞（hucMSCs）,用于后续研究。 方法：设计含有KpnⅠ及XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒。经PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs。 结果：重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达。 结论：成功构建了Nanog腺病毒表达载体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究。     

小鼠动脉粥样硬化斑块模型的快速制作及CD40在斑块中的表达

目的探讨颈动脉硅胶圈植入法制作小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块模型及斑块中白细胞分化抗原40(CD40)表达。方法 36只雄性载脂蛋白E(ApoE)-/-小鼠随机分为模型组和对照组:模型组小鼠采用颈动脉硅胶圈植入法快速制作AS斑块模型;对照组不予干预。苏木精-伊红(HE)染色检测斑块,免疫组化法检测斑块中CD40表达。结果模型组HE染色右颈动脉可见明显AS斑块形成,术后6周可见坏死中心区域和纤维帽形成,并且CD40表达阳性。结论颈动脉硅胶圈植入法能快速制作小鼠AS斑块模型,斑块中CD40高表达。     

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测

目的 建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平.方法 通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平.绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线.结果 急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P＜0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P＜0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7.结论 建立的测定pokemon基因表达的real-time PCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标.     

长链非编码RNAs及其在临床诊断中的应用

摘要： 随着基因组计划研究的深入,各种非编码RNAs( non-codingRNA,ncRNAs)越来越受到广泛的关注,特别是含量丰富的长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,LncRNAs) ,目前已成为继miRNAs之后的新的研究热点。研究发现,LncRNAs广泛参与多种生理和病理进程,在人类很多复杂性疾病(如肿瘤、神经系统疾病等) 的发生、发展中发挥重要作用。本文着重探讨LncRNA的功能及其潜在的临床诊断应用价值。LncRNAs的研究有望为多种疾病的预测、诊断及治疗提供新的分子依据。     

分子诊断学的一些研究进展

分子诊断学是以分子生物学理论和技术为基础,利用分子生物学技术研究人体生物大分子的存在、结构及其表达调控,从而为疾病的预测、诊断、治疗和预防提供信息和决策依据。目前分子诊断已广泛应用于临床,能进行分子诊断的疾病涉及染色体疾病、感染性疾病、单基因疾病、多基因疾病及恶性肿瘤等,分子诊断技术已成为