Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用

目的: 建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异.方法: 构建包含Tim4基因片段的标准质粒,通过RT-PCR,实时RT-PCR等检测并比较Tim4基因在37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平. 结果: 建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠;在37例胃癌组织中,26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37),且在26例癌旁组织高表达的样本中,18例(69.2%)胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2;在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19),其中癌旁组织高表达率(大于2)为 75.0%(9/12).结论: 成功建立了检测Tim4基因的实时RT-PCR方法,Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表达呈低趋势,这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础.     

人骨髓间质干细胞分离纯化及基本生物学特性研究

目的　分离纯化人骨髓间质干细胞 (MSC) ,研究其基本生物学特性。方法　用比密 1 .0 73Ficoll淋巴细胞分离液分离成人骨髓MSC ,体外扩增 ,观察细胞生长特性 ,流式细胞仪检测骨髓MSC表面抗原表达及细胞周期 ,染色体技术分析骨髓MSC遗传特性。结果　成人骨髓MSC培养 3d后有散在呈针尖状的贴壁细胞 ,7～ 1 0d后形成集落或融合呈纤维状 ;体外扩增原代可获得 (4～ 6 )× 1 0 5个细胞 ,1 0代可获得 (1～ 5 )× 1 0 1 0 个细胞 ,5～ 6代以后的细胞增殖能力下降 ;流式细胞仪检测结果显示 :CD1 3、CD2 9、CD4 4、CD71表达阳性 ,CD3、CDl4、CD33、CD34、CD38、CD4 5、HLA DR不表达 ;染色体核型正常 ;细胞周期分析显示 ,G0 /G1 期 :79.4 8% ,G2 /M期 :6 .1 0 % ,S期 :1 4 .4 2 %。结论　人骨髓MSC体外具有较好的增殖更新能力 ,3～ 6代的人骨髓MSC作为组织工程细胞具有广阔的应用前景     

猪骨髓间质干细胞生物学特性及分化为成骨细胞和心肌细胞的能力

目的：建立猪骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)体外分离培养方法。对猪MSCs的生物学特性及分化为成骨细胞和心肌细胞的能力进行研究。方法：抽取猪骨髓体外培养MSCs，绘制生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期。选择第二代MSC体外诱导分化为成骨细胞和心肌细胞。通过碱性磷酸酶染色及钙沉积对成骨细胞进行鉴定；用免疫组化，透射电镜鉴定心肌细胞。结果：MSC细胞形态呈长梭形或多边形，细胞生长曲线呈S形，群体倍增时间为26h，细胞周期显示有69．22％细胞处于Go／G1期，24．44％细胞处矛S期，细胞化学染色显示POX、SB阴性，PAS、α-NAE阳性，约1％细胞ALP阳性。MSC经体外诱导分化后可形成骨细胞和心肌细胞。结论：猪骨髓MSCs可在体外长期、稳定培养，具有多潜能分化活性，可以为何质干细胞系及组织工程研究提供较理想的细胞来源。为临床何质干细胞的应用研究提供动物模型，并为进一步的临床康复研究提供实验依据。