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181.
182.
目的 :纯化磷酸二酯酶 5 (PDE5 )用以研究其抑制剂及临床意义。方法 :利用快速蛋白液相层析系统 ,NaCl线性梯度分离PDE5。结果 :从牛海绵体组织与牛海绵体血管均得到 3个蛋白峰 ,Western印迹实验证实峰 1为PDE5 ,其余二峰可能为PDE2和PDE3。结论 :哺乳类海绵体组织有cGMP特异性PDE5存在 ,在海绵体血管尤为丰富。采用快速蛋白液相系统成功分离PDE5 ,方法简便可靠。 相似文献
183.
疣必治治疗尖锐湿疣临床观察钱晖,沈善法,郑逸冰上海第二医科大学附属第九人民医院(邮政编码20。011)76例中,男58例,女18例,年龄18~40岁,平均29岁。病期3天~6月。随机分为两组。治疗组50例用疣必治(含25%足叶草脂安息香酸配,美国博爱... 相似文献
184.
目的:观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)来源的外切体(exosome)对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:原代培养大鼠骨髓MSC并提取外切体鉴定。构建顺铂损伤NRK-52E细胞模型,损伤组为5μmol/L顺铂处理6 h后正常营养液培养48 h,处理组为顺铂损伤后以100μg/m L外切体共培养48 h。未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组。TUNEL-FITC,凋亡双染流式细胞术,蛋白质免疫印迹技术检测各组细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,损伤组NRK-52E细胞肿大,胞核不规则样改变,凋亡细胞增多,凋亡相关蛋白Bax上调而Bcl-2下调;处理组NRK-52E细胞肿大较损伤组缓解,胞核形态改善,凋亡细胞减少,Bax下调且Bcl-2上调。结论:大鼠骨髓MSC来源的外切体对顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡有一定的抑制作用。 相似文献
186.
目的探讨聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)1500诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesechymal stem cell,huc MSC)与胃癌细胞系(HGC-27)融合的可能性及融合细胞(hybrids)的活力。方法荧光染料DIO、DID分别标记HGC-27与huc MSC;细胞计数法观察标记前后细胞增殖情况;PEG1500诱导细胞融合后,用荧光显微镜观察双色的融合细胞;CCK-8法检测融合细胞的活性;流式细胞术分析融合细胞的细胞周期。结果 DIO与DID荧光染料可分别标记HGC-27(表达绿色荧光)与huc MSC(表达红色荧光),且标记对细胞增殖无明显影响;荧光显微镜可观察到双色双核的融合细胞;流式细胞术结果表明,与HGC-27细胞相比,融合细胞活性增强,细胞周期中G1期比例降低,S期比例升高(P0.01)。结论 PEG可诱导huc MSC与HGC-27细胞融合,且融合后的细胞表现很强的体外增殖活性。 相似文献
187.
目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外体(huc-exosomes)对SD大鼠急性心肌梗死(AMI)的修复作用及其可能的分子机制。方法体内构建SD大鼠AMI模型,分为假手术组、AMI+PBS组和AMI+exosomes组,小动物高频彩色超声仪检查心功能;72 h后处死取心肌组织,western blot检测组织内Smad7蛋白变化;体外培养心肌细胞系H9C2及原代培养心肌组织细胞,免疫荧光法鉴定原代培养心肌组织细胞,分为正常氧+PBS、正常氧+exosomes、缺氧+PBS、缺氧+exosomes 4组,分别提取各组的蛋白质或RNA,用定量PCR、western blot分别检测Smad7 mRNA和蛋白质变化。结果成功构建了SD大鼠AMI模型,超声心动图结果显示,尾静脉注射huc-exosomes可改善AMI大鼠的心功能。定量PCR及western blot结果显示,exosomes处理使心肌细胞中Smad7 mRNA和蛋白质的表达水平均上调。结论 huc-exosomes对AMI有修复作用,exosomes可能通过调节Smad7的表达促进细胞修复,Smad7可作为huc-exosomes介导损伤修复的判断指标。 相似文献
188.
目的探讨巨噬细胞(THP-1)活化的人脐带间充质干细胞(huc-MSC)对胃癌细胞系HGC-27中血小板源性生长因子(PDGFD)的调控作用。方法将THP-1与huc-MSC直接共培养,观察共培养前后细胞的形态变化;western blot检测huc-MSC中肿瘤相关成纤维细胞(CAF)相关指标;将HGC-27分为阴性对照组、huc-MSC间接共培养组及THP-1活化的huc-MSC间接共培养组,ELISA法检测各组上清液中PDGFD含量;免疫荧光法检测HGC-27中PDGFD的表达;western blot检测HGC-27中JAK1-STAT3通路活化情况。结果与huc-MSC直接共培养后THP-1细胞部分呈纤长形。huc-MSC中E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),N-cadherin(P0.01)和vimentin(P0.01)表达上调,呈现CAF样活化。与阴性对照组比较,huc-MSC和THP-1活化后huc-MSC均促进HGC-27中PDGFD的表达,THP-1活化的huc-MSC较huc-MSC促进作用更显著(P0.01)。与阴性对照组比较,huc-MSC和THP-1活化后huc-MSC处理组HGC-27中JAK1和STAT3蛋白水平均显著增加(P0.01),THP-1活化后huc-MSC组较huc-MSC组增加更显著(P0.01)。结论 THP-1促进huc-MSC呈CAF样活化,可上调胃癌细胞HGC-27中PDGFD的表达,可能与JAK-STAT3通路活化有关。 相似文献
189.
目的探讨人脐带间充质干细胞(hucMSC)来源的外体(exosomes,hucMSC-Ex)对脂多糖(LPS)诱导的人肝星状细胞系LX2活化的抑制作用及其可能机制。方法体外培养LX2细胞,分别设PBS对照组、LPS组(100 ng/mL)及hucMSC-Ex组(LPS+150μg/mL hucMSC-Ex),48 h后收集细胞并提取相应的RNA及蛋白质。western blot检测LX2活化相关指标(α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白)和凋亡指标(Bcl2、Bax及caspase3蛋白)的表达情况;RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA表达水平;MTT法分析hucMSC-Ex对LX2细胞活化后增殖的影响。结果 LPS可刺激LX2细胞活化,活化后的LX2细胞形态由不规则形状向成纤维细胞样改变,并高表达α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白,其灰度值分别上升约2.45、2.34、2.77倍(P均0.05);Bax及caspase3蛋白表达下降而Bcl2蛋白表达增强;LX2增殖能力增强;经hucMSC-Ex处理后,细胞形态由细长向不规则形态转变,α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白表达减弱,高表达Bax及caspase3蛋白而Bcl2蛋白表达下降,且细胞增殖减少(F=23.44,P0.05)。结论 hucMSC-Ex能够抑制LPS诱导的LX2细胞活化,降低其增殖能力并促进细胞凋亡。 相似文献
190.
人CD44基因真核表达载体构建及在乳腺癌细胞中的表达 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:从人类乳腺癌耐多柔比星细胞株细胞(MCF-7/Adr)中克隆CD44基因并构建CD44基因真核表达载体pcDNA3.1-CD44;将pcNDA3.1-CD44稳定转染入人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞中.方法:从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长的cDNA模板;将含有CD44基因的cDNA模板使用限制性内切酶进行双酶切获得带有酶切位点的CD44基因,再将带有酶切位点的CD44基因经TA克隆后测序验证,然后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,双酶切鉴定后再次测序验证.脂质体法将pcDNA3.1-CD44质粒转染到MCF-7细胞中,48小时后RT-PCR和流式细胞术检测转染前后CD44基因、蛋白在MCF-7细胞的表达变化.结果:成功从人MCF-7/Adr细胞中克隆获得CD44基因并构建真核表达载体,转染后在MCF-7中检测到CD44基因mRNA和蛋白水平表达上调;将上述表达CD44基因及蛋白的瞬时转染MCF-7细胞经G418筛选两周后获得阳性克隆.结论:成功克隆和建立人CD44基因真核表达质粒;pcDNA3.1-CD44能在MCF-7细胞中表达;在MCF-7/Adr中新发现一种CD44基因的变异体(基因库号FJ216964);这为进一步研究其基因功能打下了基础. 相似文献