染料激光与曲安奈德联合治疗增生性瘢痕的疗效观察

对68例外观较红的增生性瘢痕进行治疗，其中20例和36例患者分别进行了联合治疗与单独用染料激光、单独局封的自身对照研究，2例进行了组织学研究。联合治疗的总有效率为92.6%，其疗效明显优于单独激光或局封。组织学研究表明，染料激光照射后，瘢痕内血管血栓形成，内皮细胞损伤，甚至管腔闭塞，并有胶原纤维的溶解。因此，染料激光联合曲安奈德局封是治疗增生性瘢痕的有效方法。     

从牛海绵体组织分离纯化磷酸二酯酶5

目的 :纯化磷酸二酯酶 5 (PDE5 )用以研究其抑制剂及临床意义。方法 :利用快速蛋白液相层析系统 ,NaCl线性梯度分离PDE5。结果 :从牛海绵体组织与牛海绵体血管均得到 3个蛋白峰 ,Western印迹实验证实峰 1为PDE5 ,其余二峰可能为PDE2和PDE3。结论 :哺乳类海绵体组织有cGMP特异性PDE5存在 ,在海绵体血管尤为丰富。采用快速蛋白液相系统成功分离PDE5 ,方法简便可靠。     

疣必治治疗尖锐湿疣临床观察

疣必治治疗尖锐湿疣临床观察钱晖，沈善法，郑逸冰上海第二医科大学附属第九人民医院（邮政编码２０。０１１）７６例中，男５８例，女１８例，年龄１８～４０岁，平均２９岁。病期３天～６月。随机分为两组。治疗组５０例用疣必治（含２５％足叶草脂安息香酸配，美国博爱...     

大鼠骨髓间质干细胞来源的外切体抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的:观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)来源的外切体(exosome)对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:原代培养大鼠骨髓MSC并提取外切体鉴定。构建顺铂损伤NRK-52E细胞模型,损伤组为5μmol/L顺铂处理6 h后正常营养液培养48 h,处理组为顺铂损伤后以100μg/m L外切体共培养48 h。未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组。TUNEL-FITC,凋亡双染流式细胞术,蛋白质免疫印迹技术检测各组细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,损伤组NRK-52E细胞肿大,胞核不规则样改变,凋亡细胞增多,凋亡相关蛋白Bax上调而Bcl-2下调;处理组NRK-52E细胞肿大较损伤组缓解,胞核形态改善,凋亡细胞减少,Bax下调且Bcl-2上调。结论:大鼠骨髓MSC来源的外切体对顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡有一定的抑制作用。     

PEG诱导间充质干细胞与胃癌细胞融合的研究

目的探讨聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)1500诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesechymal stem cell,huc MSC)与胃癌细胞系(HGC-27)融合的可能性及融合细胞(hybrids)的活力。方法荧光染料DIO、DID分别标记HGC-27与huc MSC;细胞计数法观察标记前后细胞增殖情况;PEG1500诱导细胞融合后,用荧光显微镜观察双色的融合细胞;CCK-8法检测融合细胞的活性;流式细胞术分析融合细胞的细胞周期。结果 DIO与DID荧光染料可分别标记HGC-27(表达绿色荧光)与huc MSC(表达红色荧光),且标记对细胞增殖无明显影响;荧光显微镜可观察到双色双核的融合细胞;流式细胞术结果表明,与HGC-27细胞相比,融合细胞活性增强,细胞周期中G1期比例降低,S期比例升高(P0.01)。结论 PEG可诱导huc MSC与HGC-27细胞融合,且融合后的细胞表现很强的体外增殖活性。     

脐带MSC来源外体上调Smad7表达修复大鼠急性心肌损伤

目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外体(huc-exosomes)对SD大鼠急性心肌梗死(AMI)的修复作用及其可能的分子机制。方法体内构建SD大鼠AMI模型,分为假手术组、AMI+PBS组和AMI+exosomes组,小动物高频彩色超声仪检查心功能;72 h后处死取心肌组织,western blot检测组织内Smad7蛋白变化;体外培养心肌细胞系H9C2及原代培养心肌组织细胞,免疫荧光法鉴定原代培养心肌组织细胞,分为正常氧+PBS、正常氧+exosomes、缺氧+PBS、缺氧+exosomes 4组,分别提取各组的蛋白质或RNA,用定量PCR、western blot分别检测Smad7 mRNA和蛋白质变化。结果成功构建了SD大鼠AMI模型,超声心动图结果显示,尾静脉注射huc-exosomes可改善AMI大鼠的心功能。定量PCR及western blot结果显示,exosomes处理使心肌细胞中Smad7 mRNA和蛋白质的表达水平均上调。结论 huc-exosomes对AMI有修复作用,exosomes可能通过调节Smad7的表达促进细胞修复,Smad7可作为huc-exosomes介导损伤修复的判断指标。     

巨噬细胞活化的huc-MSC对胃癌细胞PDGFD的调控作用

目的探讨巨噬细胞(THP-1)活化的人脐带间充质干细胞(huc-MSC)对胃癌细胞系HGC-27中血小板源性生长因子(PDGFD)的调控作用。方法将THP-1与huc-MSC直接共培养,观察共培养前后细胞的形态变化;western blot检测huc-MSC中肿瘤相关成纤维细胞(CAF)相关指标;将HGC-27分为阴性对照组、huc-MSC间接共培养组及THP-1活化的huc-MSC间接共培养组,ELISA法检测各组上清液中PDGFD含量;免疫荧光法检测HGC-27中PDGFD的表达;western blot检测HGC-27中JAK1-STAT3通路活化情况。结果与huc-MSC直接共培养后THP-1细胞部分呈纤长形。huc-MSC中E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),N-cadherin(P0.01)和vimentin(P0.01)表达上调,呈现CAF样活化。与阴性对照组比较,huc-MSC和THP-1活化后huc-MSC均促进HGC-27中PDGFD的表达,THP-1活化的huc-MSC较huc-MSC促进作用更显著(P0.01)。与阴性对照组比较,huc-MSC和THP-1活化后huc-MSC处理组HGC-27中JAK1和STAT3蛋白水平均显著增加(P0.01),THP-1活化后huc-MSC组较huc-MSC组增加更显著(P0.01)。结论 THP-1促进huc-MSC呈CAF样活化,可上调胃癌细胞HGC-27中PDGFD的表达,可能与JAK-STAT3通路活化有关。     

人脐带间充质干细胞来源的exosomes对脂多糖诱导的肝星状细胞活化的抑制研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(hucMSC)来源的外体(exosomes,hucMSC-Ex)对脂多糖(LPS)诱导的人肝星状细胞系LX2活化的抑制作用及其可能机制。方法体外培养LX2细胞,分别设PBS对照组、LPS组(100 ng/mL)及hucMSC-Ex组(LPS+150μg/mL hucMSC-Ex),48 h后收集细胞并提取相应的RNA及蛋白质。western blot检测LX2活化相关指标(α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白)和凋亡指标(Bcl2、Bax及caspase3蛋白)的表达情况;RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA表达水平;MTT法分析hucMSC-Ex对LX2细胞活化后增殖的影响。结果 LPS可刺激LX2细胞活化,活化后的LX2细胞形态由不规则形状向成纤维细胞样改变,并高表达α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白,其灰度值分别上升约2.45、2.34、2.77倍(P均0.05);Bax及caspase3蛋白表达下降而Bcl2蛋白表达增强;LX2增殖能力增强;经hucMSC-Ex处理后,细胞形态由细长向不规则形态转变,α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白表达减弱,高表达Bax及caspase3蛋白而Bcl2蛋白表达下降,且细胞增殖减少(F=23.44,P0.05)。结论 hucMSC-Ex能够抑制LPS诱导的LX2细胞活化,降低其增殖能力并促进细胞凋亡。     

人CD44基因真核表达载体构建及在乳腺癌细胞中的表达

目的:从人类乳腺癌耐多柔比星细胞株细胞(MCF-7/Adr)中克隆CD44基因并构建CD44基因真核表达载体pcDNA3.1-CD44;将pcNDA3.1-CD44稳定转染入人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞中.方法:从MCF-7/Adr细胞中提取总RNA进行RT-PCR,获得全长的cDNA模板;将含有CD44基因的cDNA模板使用限制性内切酶进行双酶切获得带有酶切位点的CD44基因,再将带有酶切位点的CD44基因经TA克隆后测序验证,然后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,双酶切鉴定后再次测序验证.脂质体法将pcDNA3.1-CD44质粒转染到MCF-7细胞中,48小时后RT-PCR和流式细胞术检测转染前后CD44基因、蛋白在MCF-7细胞的表达变化.结果:成功从人MCF-7/Adr细胞中克隆获得CD44基因并构建真核表达载体,转染后在MCF-7中检测到CD44基因mRNA和蛋白水平表达上调;将上述表达CD44基因及蛋白的瞬时转染MCF-7细胞经G418筛选两周后获得阳性克隆.结论:成功克隆和建立人CD44基因真核表达质粒;pcDNA3.1-CD44能在MCF-7细胞中表达;在MCF-7/Adr中新发现一种CD44基因的变异体(基因库号FJ216964);这为进一步研究其基因功能打下了基础.