骨髓间质干细胞绿色荧光蛋白基因的转染和克隆化研究

目的 建立能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)并连续传代培养的骨髓间质干细胞(MSCs)株。方法 采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-N1)在不同条件下转染MSCs,经过G418筛选,有限稀释法筛选阳性克隆,荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达情况。结果 电穿孔以电容量1050μF、电压260V时效果最好,转染GFP的MSCs能在含有G418的培养基中生长,未转染的骨髓间质干细胞不断死亡。转染24h后即能观察到少量荧光细胞,一个月后大部分荧光细胞呈集落样生长,荧光表达较强,转染率为50％-60％。体外克隆后,能稳定表达至10代,10代后荧光强度明显减弱。结论 GFP基因能在MSCs中进行有效的复制、转录和翻译,并可持续、稳定、高效表达;转染GFP的MSCs能作为研究MSCs的诱导分化及生物细胞工程治疗的载体细胞。     

胶原诱导的关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8的表达及其与相关细胞因子的关系

目的:观察Toll样受体8(TLR8)在鸡Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型小鼠脾脏单个核细胞中的表达及其与IL-10等细胞因子表达的关系.方法:12只DBA/1J小鼠随机分成造模组和阴性对照组.造模组小鼠采用鸡Ⅱ型胶原诱导,在诱导后的第27天出现关节红肿时处死所有小鼠.用ELISA测定小鼠外周血的TNF-α,HE染色观察小鼠关节的炎症变化,Real-time PCR检测脾脏单个核细胞表达IL-10、IL-17A、IL-1β及TLR8的水平.结果:HE染色结果显示,造模组小鼠关节部位与阴性对照组相比出现明显的炎症细胞浸润;造模组小鼠的外周血血清TNF-α水平较阴性对照组明显升高(P< 0.01);模型小鼠脾脏单个核细胞表达IL-10、IL-17A、TLR8和IL-1β的水平也明显高于阴性对照组(P<0.01或P<0.05).相关性分析表明,TLR8的表达与IL-10的表达呈负相关(r=0.945;P<0.01),而与IL-17A、IL-1β无明显相关性(P>0.05).结论:TLR8在鸡Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型小鼠脾脏单个核细胞中的表达水平明显升高.尽管IL-10的表达水平也高于对照组,但其与TLR8的表达呈现明显负相关.     

1％联苯苄唑乳膏治疗浅部真菌病

最近,我科应用北京四环制药厂生产的孚琪（１%联苯苄唑）乳膏治疗６２例皮肤浅部真菌病,取得显著疗效,现报道如下。一、临床资料所有病例均为门诊患者,有典型的临床表现且经镜检证实,治疗前２周内未使用过全身或局部抗真菌药物。共６２例,其中男２９例,女３３例。年龄最小７个月,最大７０岁,平均（４１±１５．５）岁。病程最短５ｄ,最长１４年,平均１．２５年。６２例患者中体股癣２１例,手足癣３５例,皮肤念珠菌病６例。４４例作真菌培养,其中３６例获阳性结果,包括红色毛癣菌２７例、须癣毛癣菌１例、絮状表皮癣菌１例、羊毛状小孢子菌１…     

环状RNA hsa_circ_002059在胃癌患者组织与循环血液中的表达及意义

目的建立胃癌患者癌组织、血浆和血浆外泌体中hsa_circ_002059表达的检测方法,探讨其在胃癌组织与循环血液中表达的临床应用价值。方法应用circ2Traits和starBase v2.0数据库预测胃癌相关环状RNA hsa_circ_002059的表达;实时荧光定量RT-PCR检测配对的胃癌组织与癌旁组织(87例)、胃癌患者和体检健康者血浆(52例)及外泌体(62例)样本中hsa_circ_002059表达水平的差异,并分析与临床病理参数的相关性;ROC曲线和生存曲线分析评价其在胃癌诊断与预后评估中的临床价值。结果 hsa_circ_002059具有多个胃癌相关miRNA结合位点,在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(U=1 759.0,P0.001),且与肿瘤大小有关(χ~2=6.183,P=0.013)。组织hsa_circ_002059筛查胃癌的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))为0.768,敏感性和特异性分别为0.67和0.92。在胃癌患者血浆中hsa_circ_002059的表达水平明显高于体检健康者(U=1 011.5,P=0.027),且与淋巴结转移有关(χ~2=12.231,P=0.005)。血浆hsa_circ_002059筛查胃癌的AUC~(ROC)为0.626,敏感性和特异性分别为0.65和0.64。此外,hsa_circ_002059高表达患者的平均生存时间显著低于低表达者(χ~2=4.594,P=0.032),在胃癌患者血浆外泌体中hsa_circ_002059的表达水平与体检健康者之间的差异无统计学意义(U=1 746.0,P=0.379)。结论 hsa_circ_002059表达与胃癌进展有关,其在组织和血浆中表达水平的检测有望用于胃癌辅助诊断与预后评估。     

应激与早产孕妇胎盘促肾上腺皮质激素释放激素信使核糖核酸的表达

目的：探讨应激及其应对方式与早产和胎盘促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone,CRH）信使核糖核酸（mRNA）水平的相关性。方法：研究对象来自2003年6月至2005年3月在镇江第四人民医院产科分娩的单胎初产妇,早产组46例,正常产组42例;采用生活事件量表（LES）及防御方式问卷（DSQ）在第28周时进行自我评定,胎盘组织的CRH—mRNA的表达采用RT-PCR方法测定,以光密度值（OD值）作为观察数据。统计方法采用独立样本t检验和逐步回归分析。结果：早产组与正常产组在恶性生活事件频度和强度、DsQ的不成熟防御因子（DSQ1）分值的差异有显著性（P〈0．05～0．001）;早产因子、DSQ1分值与胎盘CRH—mRNA的相对含量（0D值）呈正相关,偏回归系数分别为0．552和0．345,t值分别为5.693和3．618,P值均〈0.001。结论：心理应激及其应对方式与早产的发生相关,胎盘CRH-mRNA的高度表达可能是心理应激与早产发生的病理生理中介机制。     

脑瘫患儿血清神经元特异性烯醇化酶及髓鞘碱性蛋白浓度的变化及其临床意义

目的: 探讨脑瘫患儿血清神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)和髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）水平的变化及其临床意义。方法: 选取进行康复治疗的符合脑瘫诊断标准的脑瘫患儿46例（脑瘫组）,同时选取性别、年龄与脑瘫组患儿匹配的健康儿童45名作为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测健康组儿童体检时及脑瘫组患儿治疗前、常规康复治疗3个月后的血清NSE和MBP浓度。采用脑瘫粗大运动功能分级系统（GMFCS）和粗大运动功能88项量表（GMFM 88）对脑瘫组患儿治疗前、后的粗大运动功能进行分级和评估。结果： 健康组儿童血清NSE、MBP浓度分别为（6.77±2.08）μg/L、（0.38±0.10）μg/L;脑瘫组患儿治疗前血清NSE、MBP浓度分别为（16.26±2.94）μg/L、（1.21±0.41）μg/L,治疗3个月后浓度分别为（13.56±2.29）μg/L、（0.85±0.33）μg/L;脑瘫组患儿治疗前、后的GMFM 88评分分别为（132.33±81.60）分、（147.07±83.13）分。健康组儿童的NSE、MBP浓度与年龄之间均无显著相关性（P＞0.05）,而脑瘫组患儿治疗前的NSE、MBP浓度与年龄之间均呈负相关(P＜0.05)。脑瘫组儿童治疗前的NSE、MBP浓度均明显高于健康组(均P＜0.05)。脑瘫组治疗前的NSE、MBP浓度与脑瘫粗大运动功能分级（GMFCS）之间均呈正相关(P＜0.05),与GMFM 88评分之间均呈负相关(P＜0.05)。脑瘫组治疗前、后组内NSE、MBP浓度、GMFM 88评分间的差异均具有统计学意义(P＜0.05)。 结论： 脑瘫患儿血清NSE和MBP浓度较健康儿童显著升高,随年龄增加而降低,且与脑瘫的障碍程度及粗大运动功能相关。     

脐带间质干细胞来源的外切体对顺铂诱导的人肾小管上皮细胞损伤的修复作用

［摘要］目的: 研究人脐带间质干细胞来源的外切体（hucMSC-Ex）对顺铂诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的修复作用,并探讨可能的作用机制。方法: 体外建立顺铂诱导的HK-2细胞损伤模型,实验组以16 μmol/L浓度的顺铂作用HK-2细胞16 h,再加入hucMSC-Ex共培养,同时选择人肺成纤维细胞的外切体（HFL1 Ex）为对照,8 h后采用蛋白质印迹法和FITC-Tunel技术检测hucMSC-Ex对损伤HK-2细胞的抗凋亡和促增殖情况。未经任何处理的HK-2细胞作为正常对照组,单纯顺铂损伤并加等量PBS为PBS对照组。结果： 成功建立了顺铂诱导的HK-2细胞损伤体外模型, 蛋白质印迹分析显示hucMSC-Ex处理改善了顺铂对HK 2细胞的损伤,凋亡蛋白Bax表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达相应升高。FITC-Tunel检测也显示HK-2细胞的凋亡明显减弱。而MTT分析显示hucMSC Ex处理后,HK 2细胞的增殖能力显著增强。结论：HucMSC-Ex对顺铂诱导的HK-2细胞损伤有一定的修复效果,可能是通过促进HK 2细胞的增殖和抑制其凋亡来实现的。     

骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

背景：间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。 目的：观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。 方法：DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。 结果与结论：与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P < 0.01或P < 0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P > 0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。     

外泌体在糖尿病及其并发症中的作用研究进展

外泌体作为细胞间信息交流的重要载体，其相关研究一直是近年来的热点。由于来自特定细胞类型的外泌体中含有多种特异性的蛋白质和核酸等生物活性分子，使其具备了成为疾病诊断及预后判断的新型生物标志物的潜力。此外，某些细胞类型，特别是干细胞来源的外泌体，更开启了“非细胞治疗”的新模式。糖尿病是临床常见代谢性疾病，研究发现在其发生进展过程中，机体内外泌体含量或内容物会发生异常改变，本篇综述重点介绍外泌体在糖尿病及其并发症中的作用研究进展。     

CD8+ T细胞在肿瘤免疫治疗中的应用策略

多种肿瘤免疫疗法相继应用于临床，标志着癌症治疗已迈入免疫治疗时代。CD8⁺ T细胞是抗肿瘤免疫中发挥主要效应的细胞群，频繁出现在已被临床批准使用的肿瘤免疫疗法中。鉴于外泌体的循环稳定性和低免疫源性等优势，携带多种亲代毒性效应物的CD8⁺ T细胞衍生外泌体可能是未来肿瘤免疫治疗中的一个新方案。本文着重对CD8⁺ T细胞在肿瘤免疫治疗中的应用策略进行综述。